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1、GE Healthcare标签蛋白的 简易纯化从靶基因到纯化蛋白之旅3GST标签蛋白GST融合系统概述4pGEX载体5应用6Tag 剪切酶13应用14GST标签蛋白的检测17订货信息19组氨酸标签蛋白组氨酸标签蛋白概述20应用21订货信息31Strep-标签 II 蛋白Strep-标签 II 蛋白概述32应用33订货信息36MBP标签蛋白MBP标签蛋白概述38应用39订货信息43双标签蛋白双标签蛋白概述44应用45目录由于重组蛋白扩增和纯化技术和产品的日益丰富， 重组蛋白近年来使用大大的 增加。 使用重组标签蛋白有利于纯化和检测的优势现在已经被广泛的知晓。 一 般来说， 在蛋白表达流程的第一步
2、， 是将靶基因克隆进入合适的表达载体。 接 下来，将表达载体转化进入合适的宿主系统，进行接下来的表达分析。现在可以使用的宿主系统种类多样，包括可以进行培养的细菌、酵母、植物、 细丝真菌、 昆虫和哺乳动物细胞， 以及转基因动物和植物。 每种宿主系统都有 各自的优点和缺点，在最终决定选择哪一种宿主时，考虑这些优缺点非常重 要。 在您的特定蛋白最初筛选和最佳表达条件确定之后， 您可以扩大规模纯化 生产，获得大量的靶蛋白，进行下游的应用，如功能分析和结构研究。由于在表达蛋白的标签和亲和柱料的配基之间存在高特异性吸附， 标签蛋白的 纯化相对简单省时。 您可以仅使用一步就获得较高的纯度亲和纯化一般可 以达
3、到 95% 以上的纯度。如果您需要更高的纯度，可能需要进一步的纯化。克隆 细胞培养 筛选 规模放大纯化 结构和 引导设计功能研究3从靶基因到纯化蛋白之旅谷胱甘肽 -S 转移酶 ( GST) 基因融合系统是表达、纯化和检测 E. coli 生产的GST标签蛋白的多功能系统。 GST标签蛋白的代表性特征是， 与谷胱甘肽SepharoseTM色谱柱料的谷胱甘肽配基高特异性结合， 因 而一步洗脱靶分子的纯度可以超过90%。GST标签可能也增加了靶 蛋白的溶解性和稳定性。GST相对来说比较大，相对分子量 ( Mr) 为 26 000。GST 标签蛋白含有特殊的剪切序列，纯化后使用不同的蛋 白酶可以比较简
4、单的去掉 GST 标签。GST标签蛋白的纯化在非常温和的条件下进行，有效地保护了靶蛋 白的功能和抗原性。GST 标签经常用来补充组氨酸标签，或在表达 过程中组氨酸标签不能得到可溶蛋白时，作为代替标签。GST 标签蛋白生产高产量的标签蛋白 的 pGEX 载体GST基因融合系统整合 pGEX 质粒，可以进行日本血吸虫 GST融合的基因或基因片段的可诱导、 高等级细胞内表达。 在E. coli内表达， 在胞浆内产生具有标签的蛋白， GST部分 在氨基端，而感兴趣的蛋白在羧基端。现在有十三种 pGEX 载体。其中九种载体具有可扩展的多 克隆位点 ( MCS) ，此位点含有六个限制性内切酶位点。可 扩展
5、的多克隆位点方便之处在于，使用多种可获得的 lambda载体构建文库，从中获得扩增的cDNA，插入进行 非直接克隆。通用电气医疗集团提供具有位点特异剪切编码识别序列的 pGEX载体，可以被PreScissionTM蛋白酶、凝血酶蛋白酶和 因子 Xa蛋白酶识别 ( 参见本页 pGEX载体的序列图) 。在此序列图中，虽然所有三种读码框的终止编码没有被描 述，所有十三种载体在三种读码框的多克隆位点下游都有 终止编码。5GST ? !? !? !? !? !GST ? !“#$? !“#$Sepharose? !“#$%? !“#$%&? !“#$%&( ? !“#$%&!“(E. coli? !“#
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7、0200030000 50100150mlA280 mAUA587 mAU010002000300001000200030000 200 400 600700ml280 nm ? 587 nm ? ? !“%StrepTrap HP 1 mlStrepTrap HP 5 mlStrepTactin Sepharose High Performance XK 26/20?StrepTrap HP 1 ? StrepTrap HP 5 ? ?StrepTactin Sepharose? !XK 26/20 ?29 ? ? !5.5? !“#-mCherry-Strep-? II ? E? !“31
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10、pg1 120 ml17-1139-01 HiLoad 26/60 Superdex 30 pg1 320 ml17-1140-01HiLoad 16/60 Superdex 75 pg1 120 ml17-1068-01HiLoad 26/60 Superdex 75 pg1 320 ml17-1070-01HiLoad 16/60 Superdex 200 pg1 120 ml17-1069-01 HiLoad 26/60 Superdex 200 pg1 320 ml17-1071-01HiPrep 26/10 ?1 53 ml17-5087-014 53 ml17-5087-02Exc
11、elGel SDS? 8-18680-1255-53LMW-SDS Marker ? 10 ?17-0446-0136? !“#$%&L ? !“#$%&(? 麦芽糖结合蛋白 ( MBP) 是有用的亲和标签， 能够增加获得的标签蛋白的表达等 级和溶解性。 MBP标签也可以促进连接蛋白的正确折叠。 由于MBP标签增加了 溶解性，标签对于不溶形式聚集的重组蛋白尤其有用 ( 包涵体) 。亲和纯化在生理条件下进行，使用麦芽糖进行温和洗脱。温和的洗脱保护了 MBP标签蛋白的活性。MBP 标签蛋白MBP ? !MBP*2-paramyosin-Sal?MBPTrapTM HP 1? !“#$%&()*+,
12、-. ? !“ #$KTAprime plus ? !“#$%&()*!+,-./? !“#$? !?MBPTrap HP?HiLoad 16/60 Superdex 200 pg?KTAprime plus?ExcelGel SDS ? 8-18?Multiphor II? !“? !-SDS Marker? 2000150001000500010203040mlA280 mAU10012050A280 mAU0020406080100120ml? !“#?HiLoad 16/60 Superdex 200 pg? MBPTrap HP 1? !“#$%&E2?F ?1 ml/min? ?P
13、BS? !pH 7.4? !?MBPTrap HP 1? ?4? !MBP*2-? !“ -Sal? ?E. coli? ?1 ml/min ? !“?20 mM Tris-HCl?200 mM ? !1 mM EDTA?1 mM DTT?pH 7.4 ? !“? !“#$%10 mM? SDS-PAGE39? ? !“#$%&()*+,-./0-1? !“#$%&(Mr 103)976645302014? MBP*2- paramyosin-SalHiLoad Superdex 16/60 200 pg? !Marker1:15 ? !“1:15 ? !“# MBPTrap HPMBPTra
14、p HP40MBP ? !? !“#$% ? !“#$%&()? !?MBPTrap HP?Superdex 200? !XK 16/20?KTAprimeMCAD E? !“85 500F ? !“#$%&()*+,-./? !“#?MCAD ? !“#$%& ? ! ? !“#$%&SDS-PAGE? !“#$ ? !“#$%&()? *+,-.“/0123 ? ? !“#$%&1000150020002500500A280 mAU0020406080100ml1202003004001000020406080mlA280 mAU?Superdex 200 pg ? !“#? !?MBPT
15、rap HP 5 ? ?15 ? !N? MBP-MCAD?E. coli? ? !“?20 mM Tris-HCl?200 mM ? !1 mM EDTA? 1 mM DTT?pH 7.4? !“? !“#$%10 mM ? ?5.0 ml/min E? ?!“#$ 0.5 ml/minF?KTAprime? !“#?Superdex 200 pg ?XK 16/20?2 ? MBPTrap HP 5 ? !“#$%& ? ?20 mM HEPES?200 mM? !pH 7.0?0.4 ml/min ?KTAprime?E. M. Maier?Dr. von Haunersches Kinderspital? !? ? !“#$%&? !“#$%&()*+,-./? !“#$%&()*+,-./012 ? !“#? !“#$%? Marker1:6? !“#$1:6? MBPTrap HP? ?MBPTrap HP? !“#SDS-PAGE(Mr
