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1、 分类号： R917 单位代码： 10114 密 级： 学 号： 不同浓度葡萄糖对铜绿假单胞菌 生物膜形成影响的研究 研究生： 郭阳 指导教师： 段金菊教授 申请学位门类级别： 科学学位 专业名称： 药剂学 研究方向： 临床药学 所在学院： 药学院 二 O 一三年 五 月 二十 日 学位论文独创性声明学位论文独创性声明 本人声明，所呈交的学位论文系在导师指导下本人独立完成的研究成果。文中任何引用他人的成果均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说
2、明并表示谢意。 本人如违反上述声明，愿意承担以下责任和后果： 1、交回学校授予的学位证书； 2、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报； 3、本人按照学校规定的方式，对因不当取得学位给学校造成的名誉损害，进行公开道歉。 4、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。 论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论学位论文版权使用授权书文版权使用授权书 本人完全了解山西医科大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山西医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论
3、文和汇编本学位论文。 本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为山西医科大学。 （保密论文在解密后应遵守此规定） 论文作者签名： 日期： 年 月 日 指导教师签名： 日期： 年 月 日 （本声明的版权归山西医科大学所有，未经许可，任何单位及任何个人不得擅自使用）目 录 摘摘 要要 . 1 1 ABABSTRACTSTRACT . 4 4 前前 言言 . 8 8 第一部分第一部分: : 铜绿假单胞菌的耐药率与生物被膜形成能力的铜绿假单胞菌的耐药率与生物被膜形成能力的相关性分析相关性分析 . 1010 1 材料与方法 .10 2 结果 .15 3 讨论 .20
4、 第二部分第二部分：半定量检测不同浓度葡萄糖对铜绿半定量检测不同浓度葡萄糖对铜绿假单胞菌生物膜形成能力的影响假单胞菌生物膜形成能力的影响 . 2222 1 材料与方法 .22 2 结果 .25 3 讨论 .29 第三部分第三部分：观察不同浓度葡萄糖对铜绿假单胞观察不同浓度葡萄糖对铜绿假单胞菌生物膜形成过程的影响菌生物膜形成过程的影响 . 3232 1 材料与方法 .32 2 结果 .35 3 讨论 .39 课题小结课题小结 . 4242 参考文献参考文献 . 4343 综综 述述 . 4747 主要英文缩略语与中文对照表主要英文缩略语与中文对照表 . 5656 个人简历个人简历 . 5858
5、致致 谢谢 . 5959 山西医科大学硕士学位论文 1 不同浓度葡萄糖对铜绿假单胞菌 生物膜形成影响的研究 摘 要 铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginoisa, PA） 为临床常见菌，在医院内感染中占有相当重要的地位，主要引起通风性呼吸道感染、烧伤性继发性感染和囊性纤维化病人的继发性肺炎。由于 PA 对多种常用抗生素(如某些 -内酰胺类、喹诺酮类、四环素类及氯霉素等)耐药，因此给临床治疗造成许多困难。PA 耐药的原因是多方面的，其中之一就是细菌生物被膜(bacterialbiofilm，BF)的形成。细菌生物被膜，又称菌膜，是指细菌吸附于固体物质表面后(如医用有机材料或机体豁
6、膜表面)，分泌多糖基质、纤维蛋白、脂蛋白等多糖-蛋白复合物，使细菌相互粘连并将其自身菌体包裹于生物被膜之中，从而形成致密的膜样状态，造成泛耐药。 多糖基质是形成生物膜的必要条件，糖尿病患者体内的高糖环境对铜绿假单胞菌形成生物膜是否有影响？本课题通过研究不同浓度葡萄糖对铜绿假单胞菌生物膜形成的影响，为临床糖尿病患者铜绿假单胞菌感染提供治疗思路。 本研究收集了 42 株临床分离的铜绿假单胞菌，对其进行耐药性测定、生物膜形成能力检测、耐药性与生物膜相关性分析、不同浓度葡萄糖对生物膜形成能力和形成过程的影响研究。 1、铜绿假单胞菌的耐药率与生物被膜形成能力的相关性分析 菌株来源：连续收集山西医科大学附
7、属第二医院 2012 年 3 月到 2012 年 6 月临床分离的 42 株铜绿假单胞菌菌株。 方法：采用平板结合结晶紫染色法建立铜绿假单胞菌生物被膜模型，定量分析 42 株临床分离的铜绿假单胞菌生物被膜形成能力；采用琼脂倍比稀释法测定菌株的耐药性；概率法检验生物被膜形成能力与耐药性的相关性。 山西医科大学硕士学位论文 2 结果：42 株临床分离的铜绿假单胞菌对丁胺卡那耐药率为 2.4%；对头孢他啶、 哌拉西林/舒巴坦均为 11.9%； 对左氧氟沙星为 14.2 %， 对哌拉西林为 19.0%，对美罗培南的耐药率达到 28.6%； 对头孢哌酮-舒巴坦为 35.7 %， 对氨曲南为 40.5 %
8、。 41 株 （97.6 %） 具有生物膜形成能力， 其中生物膜形成能力弱的为 19 株 （45.2 %） 、生物膜形成能力强的 22 株（52.4 %） 、1 株菌（2.4 %）没有形成生物被膜。铜绿假单胞菌对头孢哌酮-舒巴坦的耐药性随着生物被膜的形成能力增强而增强。 2、半定量检测不同浓度葡萄糖对铜绿假单胞菌生物膜形成能力的影响 菌株来源：本文第一部分筛选出的 22 株生物膜强阳性铜绿假单胞菌(A570 1.0)。 方法：采用 7 组浓度葡萄糖培养液构建铜绿假单胞菌生物膜感染模型，结合结晶紫染色法对生物被膜形成能力进行半定量分析。 结果：生物膜结晶紫染色半定量实验显示，随培养液中葡萄糖浓度
9、的升高，22 株待测菌的生物膜形成能力均呈上升趋势(拟合直线斜率均0)； 其中 4 株待测菌在葡萄糖浓度11.1mmol/L 时上升趋势明显，拟合直线斜率为 0.0250.031；其余 18 株菌的 A570值变化不显著，拟合直线斜率为 0.0040.019。 3、观察不同浓度葡萄糖对铜绿假单胞菌生物膜形成过程的影响 菌株来源： 38 号铜绿假单胞菌，为本文第二部分中葡萄糖对生物膜形成能力影响最大的菌株，拟合直线斜率为 0.031。 方法：采用 7 组浓度葡萄糖培养液构建 PA 生物膜模型，激光扫描共聚焦显微镜（CLSM）观察生物膜的形成过程及厚度。 结果：CLSM 观察葡萄糖对生物膜形成过程
10、影响实验表明：与无糖组及低浓度葡萄糖组相比，当葡萄糖浓度11.1mmol/L 时，生物膜形成速度加快、成熟时间减少、粘附能力增强、厚度增加 (P 1.0 者为生物膜形成能力较强的，以“+”表示。 1.2.4 统计学分析 本实验采用行*列表计量资料的2检验对细菌的耐药率与生物被膜形成能力的关系进行分析，=0.05。 2 结果 2.1 42 株临床分离铜绿假单胞菌最低抑菌浓度（MIC）测定结果 42 株临床分离的铜绿假单胞菌对 8 种抗菌药物的最低抑菌浓度见表 1-2，对8 种抗菌药物的敏感率、中介敏感率、耐药率见表 1-3。42 株临床分离的铜绿假山西医科大学硕士学位论文 16 单胞菌对丁胺卡那耐药率最低，只有 2.4%；
