《先天性肌性斜颈钙蛋白酶-1、泛素和20s蛋白酶体表达遵义医学院》由会员分享，可在线阅读，更多相关《先天性肌性斜颈钙蛋白酶-1、泛素和20s蛋白酶体表达遵义医学院（46页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、缩略词S C MC M TD DU bE 1E 2E 3C M AE n d o GA C y tCC A P N 3H EP B SD A Bm C英文缩略词表英文全称S t e m o c l e i d o m a s t o i dm u s c l eC o n g e n i t a lm u s c u l a rt o r t i c o l l i sD u c h e n n eM u s c u l a rD y s t r o p h yU b i q u i t i nU b a c t i v a t i n ge n z y m eU b c o n j u g
2、a t i n ge n z y m eU b - l i g a t i n ge n z y m eC h a p e r o n e - m e d i a t e da u t o p h a g yE n d o n u c l e a s eGA p o p t o s i s i n d u c i n gf a c t o rC 计o c h r o m e CC a l p a i n 一3H a e m a t i n e - e o s i ns t i n i n gP h o s p h a t eB u f f e rS o l u t i o nD i a m i
3、 n o b e n z i d i n eI m m u n o l a i s t o c h e m i s t r y中文全称胸锁乳突肌先天性肌性斜颈杜氏肌营养不良泛素泛素活化酶泛素结合酶泛素连接酶伴侣蛋白介导的自噬作用核酸内切酶凋亡诱导因子细胞色素C钙蛋白酶3苏木苏伊红染色磷酸缓冲液二氨基联苯胺免疫组织化学目录1 、论文：先天性肌性斜颈钙蛋白酶一1 、泛素和2 0 S 蛋白酶体表英汉缩略词对照表I I I中文摘要l英文摘要$ 05O O0 3前言5日舌“5材料与方法IDOOO$OQQO0 8结果1 5讨论2 1结论0OOOQO 2 5参考文献2 62 、综述：骨骼肌萎缩时骨骼肌蛋白降
4、解途径的研究进3 、致谢4 54 、作者简介4 6I V遵义医学院硕士学位论文中文摘要先天性肌性斜颈钙蛋白酶1 、泛素和2 0 S 蛋白酶体表达中文摘要目的：检测先天性肌性斜颈( C M T ) 病变组织中钙蛋白酶1 、泛素和2 0 S 蛋白酶体的表达；探讨C M T 病变组织中萎缩肌纤维蛋白降解的机制以及了解其与间质纤维化的关系；为深入研究C M T 胸锁乳突肌间质增生及调节肌纤维萎缩的影响因子，以及抑制间质增生和肌纤维萎缩，从而为治疗C M T 探讨新的线索和增添理论依据。方法：根据随机原则并按年龄分层抽样，从1 8 8 例C M T 手术患儿( 男1 2 3 例，女6 5例，年龄3 个月
5、1 6 岁，平均年龄2 9 岁) 中选取4 0 例不同年龄段的C M T 患儿作为C M T 组。按年龄将C M T 组分为4 组，每组1 0 例患儿，即4 月6 月组( 平均年龄4 9 个月) ，7 月1 2 月组( 平均年龄9 2 个月) ，l 岁3 岁组( 平均年龄2 3 岁) ，4 岁“ - 1 6 岁组( 平均年龄1 1 1 岁) 。选取1 例脑瘫和4 例发育性髋关节发育不良的内收肌作为对照组( 男2 例，女3 例，年龄l 岁7 岁，平均年龄3 2 岁) 。对手术切除的病理组织行H E 染色、M a s s o n 胶原染色，免疫组织化学法检测钙蛋白酶1 、泛素和2 0 S 蛋白酶体
6、的表达，对间质纤维化程度和免疫组化中强阳性肌细胞数进行判定。结果：H E 染色、M a s s o n 胶原染色显示，C M T 组均可观察到萎缩的肌纤维及问质纤维化，其中2 9 例标本可观察到增生的脂肪细胞。免疫组化结果显示，在对照组中，钙蛋白酶1 、泛素和2 0 S 蛋白酶体主要位于肌纤维胞浆，染色均匀，表达强度为阴性至中等阳性。与对照组相比，C M T 组中萎缩肌纤维钙蛋白酶1 、泛素与2 0 S 蛋白酶体的表达明显增加，在间质增生与纤维化严重的区域，可观察到强阳性肌细胞数明显增加。C M T 组中钙蛋白酶1 的强阳性肌细胞数百分比为4 0 7 _ q ：1 3 8 ，明显高于对照组的0
7、 5 2 - q ：0 5 4 ( P 1 岁患儿，即头颈偏斜，患侧S C M 挛缩，颈部活动受限。所有患儿均行超声检查，确定患侧S C M 异常。术前均告知手术时机与保守治疗的关系。本研究得到医院伦理委员会审核批准。1 1 2 对照组：1 例脑瘫和4 例发育性髋关节发育不良的内收肌作为对照组，其中男2例，女3 例，年龄1 岁 7 岁，平均年龄3 2 岁。对照组纳入标准及病例数量参照国外相关研究【1 6 1 7 1 ，为H E 染色下，正常的或轻微肌纤维紊乱的内收肌组织，该组织并无明显肌萎缩及间质纤维化等病理改变的情况。所有标本经1 0 甲醛固定，石蜡包埋。1 2 主要实验仪器( 1 ) L
8、e i c a T P 生物组织脱水机( 2 ) L e i c aE G 生物组织包埋机( 3 ) L e i c a2 1 3 5 石蜡切片机( 4 ) L e i c aB A T H 展片机( 5 ) Q P - B 1 型切片漂烘温控仪( 6 ) 西门子_ 4 0 C 低温冰箱( 7 ) 高速离心机德国德国德国德国安徽电力科学研究所德国德国遵义医学院硕士学位论文材料与方法( 8 ) 洁净工作台苏州( 9 ) 隔水式恒温培养箱( 9 1 6 0 型)( 1 0 ) 格兰仕微波炉( 1 1 ) L e i c a 高级研究用生物显微镜( 1 2 ) L e i c aM s h o tM
9、 C 5 0 彩色数码C C D 摄像头( 1 3 ) I m a g e P r oP l u s 彩色图像分析系统1 3 主要实验试剂1 3 1H E 染色试剂盒：苏木素染色液伊红染色液1 3 2M a s s o n 染色试剂盒：清理液( R e a g e n tF ，G E N M E D )韦格液( R e a g e n tH ，G E N M E D )比氏液( R e a g e n tI ，G E N M E D )酸性液( R e a g e n tJ ，G E N M E D )染色液( R e a g e n tK ，G E N M E D )修正液( R e a g
10、 e n tL ，G E N M E D )上海三发科学仪器公司广东格兰仕电器有限公司德国德国美国武汉博士德生物工程有限公司1 0 毫升1 0 毫升上海杰美生物技术开发公司4 0 0 毫升2 0 0 毫升2 0 毫升2 0 毫升2 0 毫升2 0 毫升2 0 毫升1 3 3 钙蛋白酶1 抗体：兔抗人，多克隆抗体，购于武汉博士德生物工程有限公司；1 3 4 泛素抗体：兔抗人，多克隆抗体，购于福州迈新生物技术开发有限公司；1 3 52 0 S 蛋白酶体抗体：兔抗人，多克隆抗体，购于P r o t e i n T e c h 公司；1 3 6 磷酸缓冲生理盐水( P B S ) ：购于福州迈新生物技
11、术开发有限公司；1 3 71 0 正常山羊血清：购于福州迈新生物技术开发有限公司；1 3 8M a x v i s i o n 免疫组化试剂盒：包含快捷型酶标羊抗鼠兔k G 聚合物，购于福州迈新生物技术开发有限公司；1 3 9D A B 显色试剂盒：购于福州迈新生物技术开发有限公司；9遵义医学院硕士学位论文材料与方法1 4 实验方法1 4 1H E 染色步骤( 1 ) 石蜡连续切片，厚度4 u m ：( 2 ) 二甲苯脱蜡2 次x l O 分钟；( 3 ) 用无水酒精洗去二甲苯2 次3 分钟，然后9 5 、8 0 、7 0 酒精各1 分钟；自来水冲洗3 分钟；( 4 ) 苏木素染色3 分钟，自
12、来水冲洗1 分钟；( 5 ) 1 盐酸酒精分化2 0 秒，自来水冲洗1 分钟；( 6 ) l 稀氨水返蓝3 0 秒，蒸馏水洗1 分钟；( 7 ) 伊红染色约1 5 分钟，自来水冲洗1 分钟；( 8 ) 7 0 酒精脱水1 分钟，8 0 酒精1 分钟，9 5 的酒精2 次x 1 分钟，无水酒精2次3 分钟；( 9 ) 二甲苯浸泡2 次5 分钟；( 1 0 ) 中性树脂封片，L e i e a 高级研究用生物显微镜下观察组织病理学变化。1 4 2M a s s o n 染色步骤( 1 ) 标本连续切片，厚度4 u m ，染色前脱蜡至水；( 2 ) 加上5 0 0 微升清理液( R e a g e
13、n tG ) 于切片上，铺满整个切片标本表面；( 3 ) 放入6 0 “ C 恒温培养箱孵育达6 0 分钟( 注意：避免干枯) ；( 4 ) 除去包氏液( R e a g e n tG ) ；( 5 ) 在室温中，切片置入5 0 毫升清理液( R e a g e n t F ) 中，孵育2 分钟；( 6 ) 移去切片的清理液( R e a g e n tF ) ；( 7 ) 加2 0 0 微升韦格液( R e a g e n tH ) 于切片上，铺满整个切片标本表面；( 8 ) 室温中孵育5 分钟；( 9 ) 移去韦格液( R e a g e n tH ) ；( 1 0 ) 在室温下，将切片置
14、于5 0 毫升清理液( R e a g e n tF ) 中孵育达5 分钟；( 1 1 ) 移去切片上清理液( R e a g e n t F )1 0遵义医学院硕士学位论文材料与方法( 1 2 ) 加入2 0 0 微升比氏液( R e a g e n tI ) 于切片上，铺满整个切片标本表面；( 1 3 ) 于室温下孵育5 分钟；( 1 4 ) 移去比氏液( R e a g e n tI ) I( 1 5 ) 加入2 0 0 微升清理液( R e a g e n tF ) 于切片上，铺满整个切片标本表面；( 1 6 ) 移去切片上的清理液( R e a g e n tF ) ；( 1 7 )
15、 重复实验步骤1 5 至1 6 二次：( 1 8 ) 加入2 0 0 微升酸性液( R e a g e n tJ ) 于切片上，铺满整个切片标本表面：( 1 9 ) 移去切片上的酸性液( R e a g e n tJ ) ；( 2 0 ) a n 上2 0 0 微升染色液( R e a g e n tK ) 在切片上，铺满整个切片标本表面；( 2 1 ) 于室温下孵育5 分钟，避免光照；( 2 2 ) 移去切片上染色液( R e a g e n tK ) ；( 2 3 ) 加上2 0 0 微升修正液( R e a g e n tL ) 在切片上，铺满整个切片样品表面；( 2 4 ) 室温孵育2 分钟；( 2 5 ) 移去切片上修正液( R e a g e n tL ) ；( 2 6 ) 室温，切片置入5 0 毫升清理液( R e a g e n tF ) 中孵育达2 分钟：( 2 7 ) 移去切片上的清理液( R e a g e n tF ) ；( 2 8 ) 封片( 中性树脂) ；( 2 9 ) 即刻
