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1、1Bel 亚型鉴定及家系调查【摘要 】 为了研究 Bel 亚型的血清学特征和遗传背景，采用红细胞凝集试验检测先证者及其家庭成员红细胞上的 A、B、H 抗原和血清中的抗 A 抗体、抗 B 抗体，用凝集抑制试验检测唾液中的A、B 、H 血型物质。结果表明：先证者与其母、女儿 3 人确定为Bel 亚型；先证者的 2 个妹妹确定为 ABel 亚型；先证者的父亲、儿子和配偶分别为 A、B 和 B 型。结论：我国人群中 Bel 亚型是家族遗传。 【关键词】 ABO 血型 弱 B 抗原 Bel 亚型 家系调查Identification and Domestic Investigation of Bel S
2、ubtypesAbstract In order to study the serological characteristics and genetic background of Bel subtypes, A, B and H antigens on the surface of red blood cells of the proband as well as his family and the antiA, antiB antibodies in their serum samples were detected by hemagglutination test; the A，B
3、，H substances in saliva were determined by inhibitory agglutination test. The results indicatad that the proband, his 2mother and his daughter all were identified to be Bel phenotype; his two sisters were identified to be ABel phenotype; his father, son and spouse were identified to be A, B and B ph
4、enotype respectively. It is concluded that the Bel subtype exists as family genetic characteristics in China.Key words ABO system； weak B antigen；Bel subtype; domestic investigationB 亚型较 A 亚型少见。凡红细胞上显示较弱的 B 特异性者，统称B 亚型（或弱 B） 。B 亚型的分类，基本上与 A 亚型平行1 。国外报道有 B3、Bx、Bm 及 Bel4 ，国内也有 Bint、B3 、Bx 、Bm及 B2 亚型的报
5、道，但国内很少有 Bel 的报道，我们最近在无偿献血者中发现 1 例 B 亚型的血清学实验结果符合 Bel 的特性，并对其进行了家系调查，现报道如下。材料和方法检测对象先证者 无偿献血者，男，36 岁，汉族，身体健康。 ABO 血型鉴定：正定为 O 型，反定为 B 型，正反定型不符。3家庭成员 先证者的父母、同胞妹妹 1、同胞妹妹 2、配偶、1 个儿子和 1 个女儿。试剂抗 A、抗 B、抗 AB、抗 A1 单克隆抗体（单克隆抗体试剂，为美国 Dominion 公司产品） ；抗 H 抗体（植物凝集素为美国Dominion 公司产品） ；人源抗 B 血清由本实验室自制，效价为1128；试剂红细胞
6、Ac、Bc、Oc 购自上海血液中心。试管法正反定型正定型 取试管 6 支，分别加抗 A、抗 A1、抗 B、人源抗 B、抗AB、抗 H 抗体各 100 l，每管加被检者经生理盐水洗涤 3 次制备的 5%红细胞悬液 50 l，混匀离心后观察结果。反定型 取 3 支试管，各加 100l 被检者血清，再分别加入 50 l Ac、Bc、Oc 试剂，红细胞混匀离心，观察结果。吸收放散试验2 4第一步采集被检者静脉全血 8 ml（EDTA 抗凝）生理盐水洗涤5 次，离心后弃去上清，取压积红细胞 3-4 ml；第二步抗 B 单克隆抗体和人源抗 B 血清做平行试验；第三步将等体积抗 B 单克隆抗体加入压积红细胞
7、中混合，4 孵育 1 小时，每隔 15 分钟混匀 1 次；第四步用 4生理盐水洗涤孵育后的压积红细胞 6 次,保留末次洗涤液, 再加入压积红细胞 1/2 体积的生理盐水；第五步 56水浴 10分钟，每分钟轻轻震荡 1 次，立即离心获得上清即为放散液；第六步用试剂红细胞检测放散液有无放散出来的抗B 抗体, 同时用末次洗涤液进行平行实验作为阴性对照。唾液血型物质的检查Bel 亚型鉴定及家系调查血型物质准备 取被检者唾液 1-2 ml，沸水煮 10 分钟，离心后取上清。最适稀释度标准血清的制备 抗 A、抗 B 单克隆抗体试剂用生理盐水稀释至其效价为 116，抗 H 抗体不用稀释。中和 分别将 100
8、 l 血型物质与制备后的试剂 100 l 等体积混合，室温放置 10 分钟。检测 用 Ac 检测中和后的抗 A 抗体，Bc 检测中和后的抗 B 抗体，5Oc 检测中和后的抗 H 抗体。结果判断 与 Ac、Bc、Oc 凝集表示唾液中没有 A、B、H 物质，不凝集或凝集减弱表示唾液中有 A、B、H 物质。结 果先证者及其家庭成员血清学检查结果先证者一家血型及唾液血型物质检测结果见附表。根据血清学结果（符合放散型 B 亚型的血清学特征） ，判定先证者为 Bel 亚型，其母和其女血型也为 Bel 亚型，其 2 个妹妹血型均为 ABel 亚型，妹妹 2 血清中有抗B 抗体，其父亲、配偶和儿子分别为正常
9、A、B和 B 型。家系调查的结果分析母亲表型为 Bel，其子女均带有 Bel 抗原 ,推测母亲基因型很可能为 Bel/Bel 或 Bel 基因,具有遗传优势；其子女的 Bel 基因均继承自母亲，2 姐妹基因型只能为 A/Bel，先证者基因型只能为 O/Bel，根据子女血型推测父亲基因型为 O/A；先证者女儿为 O/Bel，妹妹 2 ABel 型血清中有意外抗B 抗体，而其它 Bel 型血清中均无抗B 抗体(附图 )。家族内 Bel 抗原特征血清学基本一致，Bel 抗原强弱及吸6收放散能力没有明显差异。Figure. Pedigree of a donor family with Bel sub
10、type 讨 论在血型血清学实验中，ABO 亚型是导致正反定型不一致的主要原因之一。目前 B 亚型尚没有特异性的诊断血清来鉴定，区别 B 亚型的标准有：红细胞与抗 B、抗 AB 及抗 H 抗体的凝集反应强弱程度唾液中有无 B 物质和 H 物质的存在1 。B 亚型在国内并不太少见，较常见的是 B2、B3 、Bm ，但 Bel 很少见有报道。B3、Bx 对抗 B 抗体、抗 AB 抗体可出现弱凝集反应，根据凝集反应和吸收放散能力的强弱可区分 B3、Bx。而 Bm、Bel的红细胞对抗 B 抗体、抗 AB 抗体均不发生凝集反应3 ，弱 B 抗原的存在只能通过对抗 B 抗体的吸收和放散实验来证实4 。有文
11、献报告，少数 Bel 个体血清中有不规则的抗 B 抗体存在5 。区别Bm 与 Bel 的依据是唾液中是否存在 B 血型物质，分泌型 Bm 的唾液中有 B 和 H 物质，而 Bel 只有很强的 H 物质，没有 B 物质。此次家系调查中有 5 例通过吸收放散试验检测到 B 抗原，Bel与 ABel 个体的放散能力没有明显差异，B 抗原血清学特征在遗传过程中没有发生明显变化，遗传性状稳定，均为 B 抗原弱表达；唾液中没有 B 物质只有 H 物质或 A 物质，符合 Bel 亚型的血清学特性。7其中 4 例血清中没有不规则的抗 B 抗体，只有妹妹 2 有不规则的抗 B 抗体存在。Lin 等6报告了台湾
12、7 例 Bel 的血清学特征，Bel、ABel 血清中均存在意外抗 B 抗体。本报告中仅 1 例 ABel 血清中有抗 B 抗体，显示中国大陆人群中 Bel 血型的血清学特征与台湾地区有差异。分子生物学检测手段是鉴定 B 亚型更可靠的方法。Sun 等6利用 PCR 技术对 6 位台湾非亲缘个体的 ABO 基因 6-7 外显子进行扩增，发现 Bel 亚型的第 7 外显子 502 位置上 CT 发生突变，而对照组正常 B 型不发生突变。【参考文献】1SchenkelBrunner H. Human blood groups. SpingerVerlag Wien New York,1995: 11
13、2-1142 李勇，杨贵贞主编. 人类红细胞血型实用理论与实验技术. 北京：中国科学技术出版社，1990: 267-2683Wallace ME,Gibbs FL. Blood group systems:ABH and Lewis.Bethesda:American Association of Blood Bank.1986：274-27584Heier HE, Kornstad L. Expreession of B and H antigens on erthrocytes of a week B individual. Immun Hematol, 1992; 8: 94-995Lin PH,Li L, Lin Tsai SJ. A uniqiue 502CT mutation in exon 7 of ABO gene associated with the Bel phenotype in Taiwan. Transfusion, 2003; 43:1254-12596Sun CF, Chen DP, Lin KT, et al. Molecular genetic analysis of the Bel phenotype. Vox Sang, 2003; 85: 213-220
