《全脑缺血再灌注大鼠海马Fas凋亡通路激活及HWTX-Ⅰ干预研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《全脑缺血再灌注大鼠海马Fas凋亡通路激活及HWTX-Ⅰ干预研究（75页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、湖南师范大学硕士学位论文全脑缺血再灌注大鼠海马Fas凋亡通路激活及HWTX-干预研究姓名：刘仁仪申请学位级别：硕士专业：运动人体科学指导教师：陈嘉勤20070601摘要目的：通过观察H W T X I 大鼠蛛网膜下腔用药对全脑缺血再灌注损伤在体动物模型海马C A l 区锥体细胞及胞内线粒体形态结构变化、F a s 凋亡通路相关因子核酸及蛋白表达的影响，探讨H W T X - I 与由F a s分子启动的死亡信号转导通路之间的关系，确定其在以上模型中神经保护有效性和可能分子机制，为开发一种新型神经保护作用药物提供理论和实验依据。研究方法：成年雄性S D 大鼠4 8 只，随机分为3 组，即假手术组
2、、非用药组和H W T X - 1 1 O 肛酬I ( g 剂量用药组，每组1 6 只；每组8 只用 于光镜观察海马C A l 区N i s s l 染色锥体细胞显微形态结构变化，电镜观察海马C A l 区锥体细胞超微形态结构变化和免疫组化技术检测海马C A l 区F a s 凋亡通路相关因子蛋白表达变化；另8 只用于P C R 技术检测海马F a s 凋亡通路相关因子m R N A 转录水平变化；除假手术组大鼠外，非用药组和用药组大鼠都以“四血管闭塞法”构建全脑缺血再灌流损伤在体动物模型并结合蛛网膜下腔置管术。研究结果：1 光镜观察：在假手术组中，清晰可见数层锥体细胞排列整齐紧密；在非用药组
3、中，锥体细胞排列散乱，分布稀疏，层次不完整；在用药组中，锥体细胞略呈疏散分布状态。2 电镜观察：在假手术组中，锥体细胞线粒体嵴清晰可见，未见其出现断裂现象；在非用药组中，锥体细胞线粒体嵴模糊不清，出现线粒体嵴断裂和线粒体空泡化现象；在用药组中，锥体细胞线粒体嵴未出现明显断裂现象。3 免疫组化定性实验：在假手术组中，几乎未见F a s 、F a s L ( C D 9 5 L ) 、F A D D 、C a s p a s e 3 及C a s p a s e 8 蛋白表达；在非用药组中，阳性细胞数量多，较假手术组和用药组有更强F a s 、F a s L 、F A D D 、C a s p a
4、 s e 3及C a s p a s e 一8 蛋白表达；在用药组中，阳性细胞分布明显较非用药组少而稀疏。4 免疫组化半定量实验：F a s 、F a s L 、F A D D 、C a s p a s e 3 及C a s p a s e 8阳性单位均值以非用药组为最高，其次是用药组，而假手术组最低；非用药组、用药组F a s 蛋白表达与假手术组比较，差异具有非常显著性意义( P ，用药组与非用药组比较差异具有显著性意义( P ：1 9 6 - 2 0 1 3 8 W e s tR E ，C h e nW Q ，D a l v aM B ，e ta 1 C a l c i u mr e g
5、u l a t i o no fn e u r o n a lg e n ee x p r e s s i o n P r o cN a t lA c a dS c iUSA2 0 0 1 ：9 8 ( 2 谚：1 1 0 2 4 - 1 1 0 3 t 3 9 K r i e g l s t e i nJ S a u e rD N u g l i s hJ P r o t e c t i v ee f f e c t so fc a l c i u ma n t a g o n i s t sa g a i n s tb r a i nd a m a g ec a u s e db yi s
6、 c h e m i a I n ：H a r t m a n nA C e r e b r a lI s c h e m i aa n dC a l c i u m H e i d e l b e r g ：S p r i m g e r V e r l a g ，1 9 8 9 ，2 2 3 - 2 3 I 4 0 张天锡神经外科基础与临床( 第一版) 上海百家出版社1 9 9 1 ，1 8 8 - 1 9 2 4 1 S t r a c kS ，B a r b a nM R ，W a d z i n s k iB E ，e ta 1 D i f f e r e n t i a li na
7、 c t i v a t i o no fp o s t s y n a p t i cd e n s i t ya s s o c i a t e da n ds o l u b l eC a “C a l m o d u li nd e p e n d e n tp r o t e i nk i n a s eI Ib yp r o t e i np h o s p h a t a s el a n d2 A n e u r o c h e m , 1 9 9 7 6 8 ：2 1 1 9 - 2 1 2 8 6 0 4 2 K e m p s k i0 C e r e b r a le
8、d e m a S e m i nN e p h r o l ，2 0 0 1 ，2 1 ( 3 ) ：3 0 3 4 3 周蕴理。钙拮抗剂应用现状及前景，临床荟萃，1 9 9 8 ，V 0 1 1 3 ，N o 2 3 ，1 0 8 5 -1 0 8 6 4 4 潘永灵临床荟萃1 9 9 4 ，9 ( 1 5 ) ：6 9 2 4 5 P a h o rM R i s ko fg a s t r o i n t e s t i n a lh a e m o r r h a g ew i t hC a l c i u ma n t a g o n i s t si nh y p e r t e
9、 n s i v eP e r s o n so v e r6 7y e a r so l d T h eL a n c e l ，1 9 9 6 ，3 4 7 ：1 0 6 1 4 6 M a r c oP a h o r J a c kM C a l c i u m - C h a n n e lb l o c k a d ea n di n c i d e n c eo fC a n c e ri na g e dP o p u l a t i o n s T h eL a n c e t ，1 9 9 6 ，3 4 8 ：4 9 3 4 7 孙安阳，王永铭钙拮抗剂的皮肤不良反应，中国临
10、床药学杂志，1 9 9 6 ，z3 4 8 ：4 9 3 4 8 段运珍，杨守儒硝苯地平引起溶血性黄疸1 例，新药与临床，1 9 9 8 ，7( 4 ) ：2 5 5 4 9 D e lR 心，M a d r i dA H ，V a l i n oJMe ta 1 C l i nC h e m , 1 9 9 8 ，4 4 ( 1 1 ) ：2 2 7 0 5 0 M a d r i dA I ，D e lR J M ，R u b iJ A mH e a r tJ ，1 9 9 8 ，1 3 6 ( 6 ) ：9 4 8 5 1 l l e r 蹦，R e m p p i sA ，S c h
11、e t t o l dTe ta 1 C i r c u l a t i o n ，1 9 9 4 ，9 0 ：1 6 1附录图l 大鼠海马C A l 区定位图( 4 0X ) 注：免疫组化A B C 法进行染色，对大鼠海马C A l 区进行定位，如箭头所示田2 光镜观察大鼠N i s s l 染色海马C A I 区锥体细胞形态结构的变化( 2 0 0x )注：假手术组( a ) 可见数层锥体神经细胞，排列整齐紧密，胞浆染色清晰，呈蓝色，胞浆内 尼氏体均匀丰富；非用药组( b ) 可见锥体神经细胞排列散乱，层次不完整，稀疏分布出现大量胞体浓缩、深染，细胞体积缩小等特征；用药组( c ) 可见效
12、层锥体神经细胞，排列较整 齐，稀疏分布。出现少量胞体浓缩，深染，细胞体积缩小等特征硕士学位论文图3 电镜观察大鼠海马锥体细胞胞内线粒体结构形态学变化注：假手术组( a , 5 8 5 0 0 x ) 大鼠海马锥体细胞线粒体嵴清晰可见，未见线粒体嵴断裂现象；非用药组大鼠海马锥体细胞可见线粒体嵴模糊不清，出现空泡化现象( h 5 8 5 0 0 x ) 用药组( c , 9 3 6 0 0 ) 大鼠海马锥体细胞线粒体嵴清晰可见，未见明显线粒体嵴断裂现象圈4 1 F a s 蛋白表达图4 3 F A D D 蛋白表达图4 2 F a s L 蛋白表达图4 大鼠海马C A I 区凋亡蛋白表达的免疫组织
13、化学 定位A ( x1 6 ) ，B ，C ( x1 6 0 )( 注：A ，B C 分别为假手术组非用药组和用药组)硕士学位论文表1 - 1F a s ，F a s L , 和F A D D 蛋白表达免疫组化切片计算机显微图像分析结果( 阳性单位)表1 - 2C a s l x t s e - 8 和C a s l x t s e - 3 蛋白表达免疫组化切片计算机显微图像分析结果( 阳性单位)塑型塾量竺堕墅!兰竺鬯盟 假手术组83 4 5 1 O 6 2 2l1 7 1 0 4 4 1非用药组用药组882 8 1 5 34 - 3 1 2 1 “ *2 3 6 6 1 土1 2 3 3 “
14、 * #2 4 6 9 24 - 2 2 3 2 * *2 3 5 5 14 - 1 2 7 1 “ * #注：A ，B 、C 分别为假手术组、非用药组和用药组；与假手术组比较，。p 0 5 ，+ p 0 ，0 1 ； 与非用药组比较4 脚0 5 ，“蕾如0 1表2 - 1F a s ，F a s I , 和F A D Dm R N AR T - P C R 检测结果数据分析组别数量F a sF a s LF A D D表2 - 1c a s 婵渺8 和C a s p a s e - 3m R N A 表达R T - P C R 捡澍结果数据分析组别数量C a s p a s e - 8C a
15、 s p a s e - 3非用药组用药组88O 2 6 0 0 0 1 l 0 2 3 64 - 0 0 1 2 “ 0 4 9 0 4 - 0 0 3 l +0 4 2 0 4 - 0 0 4 4 #注：A ，B C 分别为假手术组非用药组和用药组；与假手术组比较，P 叼0 5 ，。叩哪0 1 ；与 非用药组比较4 P 0 0 5 ，8 o0 1 )圈5 - 3F A D D m R N A 表达图5 - 4c 目印a 刚m R N A 表达图5 大鼠海马组织凋亡因子F a s 凋亡通路相关因子m R N A 表达 ( 注：A - B C 分别为假手术组，非用药组和用药组)硕士学位论文图6
16、 假手术组、非用药组和用药组F a s 凋亡通路相关因子蛋白表达量比较的直观囤( 注：与假手术组比较，p 0 5 ，P 0 1 ；与非用药组比较，协锄0 5 ，蝌P 旧0 1 )图7 假手术组非用药组和用药组F a s 凋亡通路相关因子m R N A 表达差异比较的直观圈( 注：与假手术组比较，* P 0 0 5 ，”P 0 0 1 ；与非用药组比较0 0 5 ，”套( 0 0 1 )科研情况1 参与课题1 1 虎纹蜘蛛毒素一I 对脑缺血损伤神经细胞保护作用分子机制研究，国家自然科学基金项目( 课题批准号：3 0 6 7 1 0 8 5 ) ，2 0 0 7 2 0 0 9年，共计2 6 万，课题组成员。1 2
