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1、1R446.11+1 单位代码：10660学 号：05005001073成都医学院成都医学院 20052005 级医学检验系本科毕业生论文级医学检验系本科毕业生论文两种凝血试剂在 CA-7000 上的结果分析学 生： 袁锐导 师： 周湘红年 级： 2005 级专 业： 医学检验2010 年 3 月 20 日 2目 录摘 要 3前 言 3材料与方法 3结 果 4讨 论 5参考文献 6英文 摘要6致 谢 6略缩词表 8论文原创性声明 8附：综 述 83两种凝血试剂在 CA-7000 上的结果分析学生 袁锐 指导老师 周湘红 摘要：摘要：目的 检测长岛凝血试剂的性能。 方法 对长岛凝血试剂进行重复性
2、、稳定性及与比对试剂相关性等方面的评价。在比对试验中以德灵凝血试剂作为对比试剂，分别利用两种试剂对临床患者的血浆标本进行凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原（FBG）三个项目在 CA-7000 仪器上进行检测。计算两种试剂所得结果的相关系数，回归方程及显著性水平。 结果 长岛公司自主研发生产的 PT 试剂、APTT 试剂及 FIB 试剂在重复性、稳定性方面都已经达到较高水平，但其在临床标本比对试验中与进口德灵试剂所测得结果相关性较差，具有显著性差异。 结论 国产长岛凝血试剂的性能有待进一步提高。关关键词键词： ：凝血酶原时间；活化部分凝血酶原时间；纤维蛋白原；一致
3、性；显著性水平凝血酶原时间（PT） 、活化部分凝血活酶时间（APTT） 、纤维蛋白原（FIB）的测定是出凝血疾病筛查试验中最常用的检测项目，而目前临床检验室里所用试剂多为进口试剂，由于价格较高，科室成本增加。因此，用国产试剂是否可以代替进口试剂是试验室面临的一个新课题1。该试验中，用 CA-7000 全自动血栓与止血分析仪使用已经获得室内质控（IQC）和室间质评（EQA）合格的美国 Dade Behring（简称德灵）公司生产凝血试剂与新进的上海长岛生物技术有限公司（简称长岛）自行开发生产的即用型液体 PT、APTT、FIB 试剂进行重复性、稳定性及相关性等方面性能的比较，通过对比德灵试剂，分
4、析国产长岛试剂的可靠性，以便在为临床提供准确结果的前提下为科室节省开支。1.材料与方法1.1 仪器 Sysmex CA-7000 自动血液凝血分析仪（简称 CA-7000）1.2 材料 校准物、质控物均为 Dade Behring 公司生产。Dade Behring 试剂批号为：PT： 54526938，APTT： 53742537，FIB:53792631。长岛试剂批号为：PT：0901053，APTT：0904231，FIB:0906022。41.3 标本 收集贵州省人民医院住院病人标本，每天收集 10 份，连续收集 5 天，共 50 份标本，包括正常及异常患者，要求血量严格按照真空采血管
5、中标注1.8ml，查无凝血，无溶血等情况2。1.4 样本处理 以 3000 转/分离心 20 分钟，分离乏血小板血浆3（PPT）备用。1.5 方法 每天室内质控严格按照 Sysmex CA-7000 自动血液凝血分析仪使用手册中步骤进行，在在控前提下对长岛试剂进行分析。统计学分析计量资料用Microsoft Excel 处理，用均值，偏差，标准差，相关系数及回归方程表示。1.5.1 重复性测定 用长岛试剂对同一质控物作 PT、APTT 及 FIB 三个项目的双份测定。测定时将质控物分成 10 份，取两次测定结果均值并记录，分别计算结果的均值、标准差及变异系数（CV） 。1.5.2 稳定性测定
6、分别取两种试剂各 5 瓶置于室温环境下，进行 PT、APTT 及FIB 三个项目的双份测定，取均值并记录结果，连续测定 5 天，分别计算测定结果的均值、标准差及变异系数（CV） 。1.5.3 临床标本测定 每天选取 10 份患者标本，每份样本用两种试剂分别作PT、APTT 及 FIB 三个项目的双份测定记录其均值，连续 5 天共测定 50 份标本，以 X 表示长岛公司试剂测定结果，以 Y 表示 Dade Behring 试剂测定结果，进行一致性检验。在德灵定标、IQC、EQA 保证的前提下考察长岛的准确度。具体方法在 t 检验基础上对两种试剂所测定结果拟合直线回归方程并将此直线回归方程与方程
7、Y=X 进行比较，即分别检验总体截距(Ta)与 0 之间的差别是否具有统计学意义，总体斜率(Tb)与 1 之间的差别是否具有统计学意义4。2.结果2.1 重复性 长岛公司 PT、APTT 及 FIB 凝血试剂检测重复性结果的生物学变异与分析质量要求5见表 1。表 1 长岛 PT、APTT 及 FIB 凝血试剂重复性检测结果项目长岛 CV（%）CV 分析质量要求（%）PT0.42.0APTT1.41.4FIB1.15.42.2 稳定性 长岛、德灵凝血试剂 PT、APTT 及 FIB 凝血试剂稳定性检测结果见5表 2。表 2 长岛公司 PT、APTT 及 FIB 凝血试剂稳定性检测结果项目长岛 C
8、V（%）德灵 CV（%）CV 分析质量要求（%）PT6.925.132.0APTT11.7818.381.4FIB4.437.155.42.3 一致性 长岛公司 PT、APTT 及 FIB 凝血试剂检测所测得结果与德灵公司PT、APTT 及 FIB 凝血试剂检测所测得结果一致性较差，三项所测得结果的回归方程分别是 PT：Y=0.7996X+2.0647， r2=0.9247；APTT：Y=0.5469X+9.7828，r2=0.6946；FIB：Y=0.7195X+0.7377，r2=0.7468, t 检验结果见表 3。表 3 两种凝血试剂测得结果一致性分析项目PTAPTTFIBPTa4.2
9、2664.77054.63640.05Tb6.08818.66353.58800.052.4 在上述实验期间，用德灵的校准品校准，质控品做 IQC 在控，参加我省和卫生部 EQA 合格。3. 讨论PT 是检查外源凝血途径诸因子及相关抑制物的重要筛选试验，FIB 是肝脏合成的一种血浆球蛋白，是体内重要的凝血因子，其主要生理功能是作为凝血因子参与体内凝血过程；在 PT 测定前的标本准备过程中，要求在室温下离心力不小于 1500g 至少离心 15 分钟6。APTT 是检测内源性凝血途径诸因子的缺陷和相关抑制物的筛选试验，也是当前用于凝血因子，肝素抗凝治疗以及狼疮抗凝血物检测的主要手段，因此为临床诊治
10、提供可靠的依据尤显重要。WHO 于 1981 年提出 PT 标准化报告方式为 INR,INR=(PTR)ISI 其中 ISI 为国际敏感度指数,PTR 为 PT 测定值(s)与 PT 标准对照值(s)的比值。经上述公式换算成 INR 值后,能克服试剂之间敏感度差异的影响,使 INR 值报告方式具有可比6性和可信度。PT、APTT、FIB 检测为临床诊治提供可靠的依据非常重要，为了探讨国产长岛试剂是否可以代替进口德灵试剂在 CA-7000 上使用。我们从精密度（重复性实验） ，试剂稳定性及准确度三方面以德灵试剂为参考对长岛试剂进行评价。在精密度评价试验中重复性最有意义7，依照 CLSI 颁布的
11、EP5-A2 文件定量测量方法的精密度性能评价批准指南第二版试验方案的基础上进行简化8，据表 1 得长岛试剂重复性符合分析质量要求。若实验结果 PT 用 INR 来表示，则长岛 PT 凝血试剂的重复性更鲜明的表现出来，其 INR 所得变异系数结果为 0。在稳定性方面，表 2 示长岛稳定性也较好，在开瓶后置于室温下可达到与进口试剂相同的水平，其中长岛 FIB 试剂在室温条件下 5 天内依然有效，显示出了即用型液体试剂的优越性。在准确度方面，长岛在与德灵的临床标本比对试验中，据表 3 准确度的一致性检查反映的相关系数，最好的是 PT，也只能达到 0.9616。经统计学处理，说明两种试剂所得结果的一
12、致性较差（P0.05） ，具有显著性差异的统计学意义。经过上述实验，在同一时间、同一质量要求、同一样本、同一试验设备等条件一致下，以德灵为参考，长岛公司自主研发的即用型 PT、APTT 及 FIB 液体试剂在精密度及稳定性方面虽已达到国际水平，但在准确度上，在同一质量要求的前提下与德灵测试结果仍有显著性差异。这是否是因为长岛需要的检测系统与德灵现有检测系统不同，或者由于其它因素差异如 ISI 换算不同，还需要进一步证实。据此，本文认为，在德灵参考下，长岛要应用于 CA-7000，需进一步提高和改进。参考文献：1 张福海，两种凝血试剂在 CA-1500 上的测定结果比较J，中国医疗前沿，2007
13、，1（3）：45。2 管洪在，等.临床血液学与检验实验指导M，第三版，北京：人民卫生出版社，2008，167.3 陆如岳，富含血小板血浆对 APTT、PT 检测的影响J，浙江临床医学杂志，2006， （8）：207.4 杨有业，等.临床检验方法学评价M，北京：人民卫生出版社，2008，46-48.75 杨有业，等.临床检验方法学评价M，北京：人民卫生出版社，2008，58-66.6 National Committee for Clinical Laboratory Standards. Collection , transport ,and processing of blood speci
14、mens for testing plasma-based coagulation assays; Approved Guideline-Fourth Edition. NCCLS document H21-A4.NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 190878-1898 USA ,2003.7 杨有业，等.临床检验方法学评价M，北京：人民卫生出版社，2008，98-99.8 杨有业，等.临床检验方法学评价M，北京：人民卫生出版社，2008，110-116.Comparision of two kinds o
15、f thrombin reagents on CA-70000Rui Yuan，Department Of Medical Laboratory Science , GuiYang Medical University; .Xianghong Zhou , Department Of Medical Laboratory Science, Peoples Hospital Of GuiZhou Provence. Postcode:550002ABSTRACTABSTRACT：Objective To evaluate whether the thrombin reagent made by changdao can be a substitute of the imported ones. Methods To evaluate the repeatability, the stability and the relativity of the reagents of Chang
