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1、 霍乱诊断标准及处理原则 GB 159841995 霍乱是由 01 群和 0139 群霍乱弧菌引起的急性肠道传染病，是发病急、传播快、波及面广、 危害严重的甲类传染病，也是当今三种国际检疫传染病中最严重的一种。 根据 中华人民共和国传染病防治法 和 中华人民共和国传染病防治法实施办法 的规定， 制定本病的诊断标准及处理原则。 1 主题内容与适用范围 本标准规定了霍乱的诊断标准，对病人、疫点、疫区的处理原则等，并推荐了对霍乱的病原 学检查、血清免疫学检查、霍乱弧菌的鉴定和分型方法以及对病人的补液疗法等。 本标准适用于全国各级卫生防疫、 医疗保健机构对由 01 群和 0139 群霍乱弧菌引起的霍乱
2、的 诊断和处理。 2 诊断原则 根据夏秋季节霍乱流行期间的疫区内，凡有腹泻，伴有呕吐，从粪便或吐泻物检出 01 群或 0139 群霍乱弧菌或血清检查对 01 群或 0139 群霍乱弧菌的抗体有明显升高者予以诊断。病 人的临床症状可由轻度到重度不等。 3 诊断标准 3.1 疑似霍乱诊断标准 a.凡有典型临床症状，如剧烈腹泻，水样便(黄水样、清水样、米泔样或血水样)，伴有呕吐， 迅速出现严重脱水，循环衰竭及肌肉痉挛(特别是腓肠肌)的首发病例，在病原学检查尚未肯 定前。 b.霍乱流行期间有明确接触史(如同餐、同住或护理者等)，并发生泻吐症状，而无其他原因 可查者。 具有上述项目之一者诊断为疑似霍乱。
3、 3.2 确定诊断标准 a. 凡有腹泻症状，粪便培养 01 群或 0139 群霍乱弧菌阳性； b. 霍乱流行期间的疫区内，凡有霍乱典型症状(见 3.1a)，粪便培养 01 群和 0139 群霍乱弧菌 阴性，但无其他原因可查者； c. 在流行期间的疫区内有腹泻症状，作双份血清抗体效价测定，如血清凝集试验呈 4 倍以 上或杀弧菌抗体测定呈 8 倍以上增长者； d. 在疫源检查中， 首次粪便培养检出 01 群或 0139 群霍乱弧菌前后各 5 天内有腹泻症状者。 临床诊断：具备 b。 确诊病例：具备 a 或 c 或 d。 4 临床分型标准 4.1 轻型 仅有腹泻症状，极少伴呕吐，大便一天少于 10
4、次，大便性状为软便、稀便或黄水样便，个 别患者粪便带粘液或血，皮肤弹性正常或略差，大多数患者能照常进食及起床活动，脉搏、 血压、尿量均正常。 4.2 中型 腹泻次数一日 1020 次，精神表现淡漠，有音哑，皮肤干而缺乏弹性，眼窝下陷，有肌肉痉挛， 脉搏细速， 血压(收缩压)儿童9.33kPa(70mmHg)， 成人 129.33kPa(9070mmHg)， 尿量每日400mL，脱水程度相当体重儿童为 510，成人为 48。 4.3 重型 腹泻次数一日 20 次以上，极度烦躁甚至昏迷，皮肤弹性消失，眼窝深凹，明显发绀，严重 肌肉痉挛，脉搏微弱而速，甚或无脉，血压(收缩压)儿童6.67kPa(50
5、mmHg)，成人 9.33kPa(70mmHg)或测不到等循环衰竭的表现，尿量每日50mL 或无尿，脱水程度儿童 相当于体重 10以上，成人 8以上。 4.4 中毒型(干性霍乱) 为一较罕见类型，起病后迅速进入休克状态，无泻吐或泻吐较轻，无脱水或仅轻度脱水，但 有严重中毒性循环衰竭。 5 治疗原则 5.1 按甲类传染病隔离治疗。危重病人应先就地抢救，待病情稳定后在医护人员陪同下送往 指定的隔离病房。确诊与疑似病例应分开隔离。 5.2 轻度脱水病人，以口服补液为主。口服补液治疗方法可参考附录 D 的 D1 章。 5.3 中、重型脱水病人，须立即进行静脉输液抢救，待病情稳定、脱水程度减轻、呕吐停止
6、 后改为口服补液。输液治疗方法可参考附录 D 的 D2 章。 5.4 在液体疗法的同时，给予抗菌药物治疗以减少腹泻量和缩短排菌期。可根据药品来源及 引起流行的霍乱弧菌对抗菌药物的敏感性，选定一种常用抗菌药物，连服 3 天。常用抗菌药 物及剂量可参考附录 E。 6 解除隔离标准 6.1 停服抗菌药物后，连续二天粪便培养(如无粪便，可用肛拭子从直肠取粪便)未检出霍乱 弧菌者解除隔离。 6.2 患者经治疗症状消失后，如无大便培养条件，自发病日起，住院隔离不得少于七天。 6.3 慢性带菌者， 大便培养连续七天阴性， 每周培养胆汁一次， 连续两次阴性者可解除隔离， 但尚需进行流行病学观察。 7 疫点疫区
7、处理 疫点疫区的划定及处理的目的在于及时发现和管理传染源，切断传播途径，迅速控制疫情。 对从首例病人检出的埃尔托型霍乱弧菌应及时做噬菌体生物分型。 如为流行株要及时划定 疫点、疫区，并按下列规定处理。如为非流行株，按一般腹泻病菌处理。 7.1 疫点、疫区的划定 a. 疫点：指与病人、疑似病人或带菌者同一门出入的住户或与其生活有密切关系的若干户 为范围。 b. 疫区：根据疫点的地理位置、水系分布、交通情况、自然村落等特点来划定。一般在农 村以一个村或几个村、一个乡或毗邻乡，在城市以一个或几个居委会或一个街道为范围。 7.2 疫点处理 a. 疫情报告：责任疫情报告人发现病人、疑似病人或带菌者时，城
8、镇于 6h 内，农村于 12h 内，以最快的通讯方式向发病地的卫生防疫机构报告，并同时报出传染病卡。 b. 隔离治疗传染源：病人、疑似病人和带菌者要立即就地隔离治疗。转送病人时对途中污 染的物品、地面和运送病人的工具要随时消毒处理。 c. 疫点消毒：做好随时消毒和终末消毒。对病人、疑似病人和带菌者的吐泻物和污染过的 环境、物品、饮用水进行消毒。 d. 验便：对疫点内所有人员，自开始处理之日起每日验便一次。第一次采便应在服药前进 行。 e. 病家和密切接触者预防服药：可根据药敏试验情况和药物来源选择一种抗菌药物， 连服 2天。常用抗菌药物及服用剂量参考附录 E。 7.3 疫点的解除：在传染源隔离
9、后，疫点内所有人员验便连续两次阴性，无续发病人或带菌 者出现时可予以解除。如无粪检条件，自疫点处理后 5 日内无新病例出现时亦可解除。 7.4 疫区处理：加强饮用水消毒和水源管理、饮食卫生和集市贸易管理、做好粪便管理、改 善环境卫生。及时发现传染源，按 7.2 规定处理，防止传播。 附录 A 病原学检查 (补充件) A1 标本的收集 标本以病人粪便为主，水样便采取 13mL，成形便采取指甲大小的粪量，亦可用直肠棉拭 或采便管由肛门插入直肠内 35cm 处采取。 A2 标本的送检 采得的标本应立即接种于培养基。 不能立即检查的， 要放入碱性蛋白胨水或文腊二氏保存液 或插入 Cary-Blair
10、二氏半固体保存培养基中。标本与保存液比例约为 15。 A3 分离培养 A3.1 直接分离培养：急性期病人水样大便标本在增菌培养的同时可取其粘液絮片或用棉拭 子直接接种在选择性培养基上。目前常用的强选择性培养基有庆大霉素琼脂、4 号琼脂和 TCBS 琼脂等。 A3.2 增菌后分离培养： 所有粪便标本都应接种碱性蛋白胨水培养基， 放 37增菌 68h 后， 从菌膜下表层取一接种环培养物，划线接种于强选择性琼脂平皿。 A3.3 鉴定：自分离培养基上挑取可疑菌落与 01 群霍乱弧菌多价诊断血清及 0139 群霍乱弧 菌诊断血清做玻片凝集试验。玻片凝集用血清的效价一般应为 140150。如可疑菌落 在血
11、清中很快(一般在 10s 内)出现肉眼可见的明显凝集，在生理盐水中不凝集者判为阳性。 可疑菌落较多时，应挑选 5 个以上的菌落逐个进行玻片凝集检查，必要时，取原划线菌落边 缘透明部分再做玻片凝集， 均为阴性时方可报告未检出 01 群及 0139 群霍乱弧菌。 对首发病 例菌株需送上一级实验室做进一步鉴定或复查。 附录 B 血清学检查 (参考件) B1 血清学检查有助于流行病学追溯诊断， 检查抗体的成分为抗菌抗体。 为进行血清学诊断， 需要采取病人的双份血清，在发病第 13 天采第一份血清，第 1520 天采第二份血清。检 查血清中抗菌抗体常用凝集试验和杀弧菌试验，杀弧菌试验比凝集试验敏感。 B
12、2 试管凝集试验：用生理盐水对倍连续稀释待检血清，每管含稀释血清 0.5mL。将标准菌 在营养琼脂上的1618h培养物用0.2福尔马林生理盐水制成约含18亿菌/mL(相当于细菌 标准比浊管浓度)的悬液，每稀释血清管加 0.5mL；另将菌悬液加入 0.5mL 生理盐水中作对 照。摇匀，置 37C3h 观察初步结果，再放冰箱(4)或室温过夜，观察最后结果。生理盐水 对照不出现自然凝集，能使菌凝于管底成伞状，上清半透明者判为，以能使菌呈凝 集的血清最高稀释度判为血清凝集效价。 第二份血清效价比第一份血清增长 4 倍或以上者有 诊断意义。 B3 杀弧菌抗体检测：可采用改良微量法，检测程序如下： a.
13、2，3，5氯化三苯四氮唑溶液(TTC)的配制：用无菌蒸馏水配制 0.5(W/V)溶液，加热 溶解，置灭菌棕色瓶中，4保存备用。 b. 补体指示菌混悬液制备：选取标准 01 群及 0139 群霍乱弧菌为指示菌，分别连续在营养 琼脂平板上分离 2 次，选取光滑型菌落 23 个，挑取小量接种于 5mL 营养肉汤中，37培 养 6h， 取 0.1mL 转种于 5mL 营养肉汤， 37培养 2h， 用分光光度计测定 492nm 吸光度(OD) 值，调整 OD 值至 0.1 为原液。将原液作 150 稀释后与 110 补体等量混合，即为补体指 示菌混悬液。 c. 待检血清稀释：于经洗涤处理、无水乙醇浸泡
14、5min 和紫外灯照射灭菌 1h 的微量培养板 或 410 孔聚苯乙烯塑料板用微量加液滴管每孔加入一滴(0.025mL)灭菌磷酸盐缓冲盐水 PBS 或生理盐水，再将待测灭活血清一滴(0.025mL)加入每排的第 1 孔，自第 1 孔开始作连 续对倍稀释至第 10 孔。 d. 加补体指示菌悬液：于每孔稀释血清加入补体指示菌悬液一滴，加盖，在微型振荡器上 振荡 12min，置 37水浴箱孵育 30min。 e. 加 TTC 营养肉汤：每孔加入含 0.01TTC 的营养肉汤 0.15mL(2 大滴)，混匀后，继续置 37水浴箱孵育 4h。 f. 观察结果：以孔内无颜色变化的血清最高稀释度为被检测标本
15、的杀弧菌抗体滴度，第二 份血清效价比第一份血清升高 8 倍或以上者有诊断意义。 附录 C 01 群霍乱弧菌的鉴定和分型 (参考件) C1 血清分型 用普通琼脂或碱性琼脂培养基上的菌苔进行血清分型。 分型使用小川型及稻叶型的单价血清 作玻片凝集反应。 C1.1 在小川型单价血清凝集，在稻叶型单价血清不凝集者为小川型。 C1.2 在小川型单价血清不凝集，在稻叶型单价血清凝集者为稻叶型。 C1.3 在小川型、稻叶型单价血清均呈明显凝集者为彦岛型。 C2 试管凝集试验 用生理盐水自 120 开始对倍连续稀释 01 群霍乱多价血清，每管含稀释血清 0.5mL。将被 检菌在营养琼脂的 1618h 培养物用
16、 0.2福尔马林生理盐水制成每毫升约含 18 亿菌体(相 当于细菌标准比浊管浓度)的悬液， 每稀释血清管加入 0.5mL； 另将菌悬液 0.5mL 加入 0.5mL 生理盐水中作对照。摇匀，置 373h 观察初步结果。再放 4或室温过夜，观察最后结果。 生理盐水对照不出现自然凝集，能使试验菌出现凝集的血清最高稀释倍数为凝集滴度， 凝集滴度达到或超过血清原效价一半的即可确定为 01 群霍乱弧菌。 对一次流行的首批病例菌株和玻片凝集反应不典型的菌株应做本试验。 C3 古典型和埃尔托型的鉴别 C3.1 按表 C1 所列的试验鉴别 01 群霍乱弧菌的两个生物型。 表 C1 01 群霍乱弧菌两个生物型的鉴别 注：括弧内为少数菌株结果。 C3.2 试验方法： a. 第组霍乱噬菌体裂解试验： 本项试验与噬
