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1、No.免疫学综述论文题目：幽门螺杆菌临床检测应用研究进展学生姓名：汪靖园学 号：3511015123专 业：临床检验诊断学班 级：1105班二一一 年 十一 月幽门螺杆菌临床检测应用研究进展汪靖园 (西安交通大学第一附属医院 班级：1105 学号：3511015123) 1983年澳大利亚学者Warren和Marshall首先从人胃粘膜活检标本中分离出幽门螺杆菌(Helicobacter Pylori,Hp), 引起了国内外学者的广泛关注和重视。近20年研究表明,Hp感染是世界上最常见的人类细菌感染之一1,有关幽门螺杆菌临床检测的研究取得了长足进步和可喜成果,并在临床上逐步得到应用。根据Hp检
2、测同时是否需做胃镜检查分为:侵入性检测,在胃镜下采取活检标本。包括:快速尿素酶试验,细菌培养,活检标本切片染色,直接涂片染色和聚合酶链反应(PCR)等。非侵入性检测,不需胃镜检查。包括:13C、14C呼吸试验,血清免疫学检测,15N尿素排泄试验等。各种检测方法各有其优缺点。现将幽门螺杆菌临床检测应用研究进展综述如下。1侵入性检测1.1快速尿素酶试验该试验是所有检测手段中最为简便迅速的一种方法,与胃镜检查同时进行,敏感性和特异性分别达91%和100%,数分钟即可做出诊断。目前已有试剂盒,使用简便、快速、便宜。该试验检查结果与直接涂片法、分离培养法、组织病理检查结果近似。活检标本的尿素酶活性主要与
3、感染Hp的数量多少有关,量少时可造成假阴性结果,而其它能产生尿素酶的细菌如空肠螺杆菌,变形杆菌等,都水解尿素,可造成假阳性反应。此法不宜单独作为Hp根除率的检查2。1.2细菌培养胃黏膜组织的细菌培养是诊断Hp感染的最可靠方法,可做为验证其他检测手段的金标准。但培养结果受不少因素影响,当Hp变成圆球形、死亡、菌量过少或培养环境达不到Hp生长的要求,则常规方法难以检出而致假阴性3。1.3活检标本切片染色将胃黏膜活检组织标用100%中性福尔马林固定,常规石蜡包埋、切片染色。根据Hp的形态学特征进行检测和分析4。直接观察胃黏膜表面上定植的Hp,是临床上最常的另一项Hp诊断的“金标准”。1.4细胞涂片染
4、色Piccolomini等5报道了用leifson鞭毛染色法诊断Hp感染,用leifson鞣酸-品红染色法来做胃活检标本印片细胞学检查,以显示Hp的鞭毛,并与组织学检查、RUT和细菌培养等方法进行比较。1.5电镜对Hp的超微结构观察Hp呈弯曲形或S型、V型、环形、小球形及杆状,菌体长约1.56m,表面光滑,两端钝圆,有16根带鞘鞭毛。1.6聚合酶链反应(PCR)Hoshina等6首先将PCR技术用于Hp的诊断,敏感性及特异性与组织学和细菌培养相似。Hp的尿素酶基因、16SrRNA基因和编码Hp特异26KD蛋白质的基因部分序列的测出,为PCR特异性引物的选择提供了依据7-9。1.7PCR单链构象
5、多态技术(PCR-SSCP)王红等10用PCR及SSCP技术分析和鉴定临床分的Hp菌株方法。该方法敏感性强、图形简单、易比较、重复性好。PCR-SSCP不仅可以用于Hp流行病学调查,而且能评估治疗后再现的Hp是复发还是再感染。2非侵入性检测2.113C、14C呼吸试验尿素很可能是Hp生长因素之一,在胃黏膜上皮细胞结合处有很高浓度尿素存在,而Hp感染者尿素显著降低。呼吸试验检测Hp的敏感性和特异性分别100%和88%,Hp清除后则呼出减少或消失。根据标记物的不同,分为13C和14C呼吸试验,儿童多采用13C。呼吸试验具有快速、可靠、安全、无痛苦的优点。Ormand等11发现收集服用核素标记的尿素
6、后20 min的呼气体即可有效地检测Hp感染。Epp等12采用减量示踪剂(75 mg13C-尿素)来进行呼气试验(UBT),77例Hp阳性的病人中,74例UBT检测呈阳性(敏感性96%),并将部分病例于6个月后复检UBT,90.6%病例的UBT结果可重复出现,说明13C-UBT敏感性和特异性高,重复性好,可常规用于Hp诊断和监测Hp根除。2.215N-尿氨排泄试验根据呼吸试验类似的原理,让受试者口服稳定性同位素15N标记的尿素,然后测定尿中排出的15NH3来判断胃内Hp的实际感染状况,其敏感性为96%。15N-尿氨排出试验是一种有一定定量意义的敏感性与特异性均高的Hp感染体内诊断试验。2.3免
7、疫学方法通过测定血清中的Hp抗体来检测Hp感染,其方法有:酶联免疫吸附法(ELISA);免疫酶试验;免疫印迹技术;胶乳凝集试验;其他:补体结合试验、被动血凝反应、细菌凝集反应及毒素中和试验等。其中以ELISA法最为常用。ELISA法敏感性强、稳定。Hp培养阳性者,发现所有患者血清含抗Hp抗体,IgG明显升高,Hp抗体效价在1320以上者,确定有Hp感染。Rathbone等13用ELISA测定73例经胃镜检查并活检确诊为Hp感染的患者血清Hp抗体,发现其敏感性和特异性分别达到93%和97%。杨昭徐等14采用ELISA法对1 675份人血清进行了抗特异性抗Hp尿素酶(HpU)抗体的检测,以HpU抗
8、体的含量为66g/L标准阳性血清做为判断标准,其敏感性及特异性分别为98%和96%,用纯化尿素酶做为抗原应用于ELISA试验属于第二代血清学诊断抗原,适用于血清流行病学调查,药物治疗效果的观察和消化不良患者的筛选。免疫印迹法可用来确诊其他血清试验结果,尤其是对处于界值附近的患者血清。潘志军等15用免印迹法检测血中抗HpIgG,结果敏感性为100%,特异性为90%,阳性预测值、阴性预测值分别为97.2%和100%,与空肠弯曲菌和结肠弯曲菌无明显交叉反应。采用乳胶凝集试验检测血中抗HpIgG抗体,并与组织培养法和镜检法进行对照,血中抗Hp抗体与黏膜内Hp检出一致率为73.1%,特异性为60%100
9、%,敏感性为81.3%,对Hp感染的筛选诊断具有一定的实用价值。Engstrand等建立了检测Hp的单克隆抗体方法,为诊断Hp感染提供了更为特异的检测段。补体固定试验操作繁琐,敏感性低,应用受限另外血球凝集试验是将Hp制成抗原,患者血清Hp的H抗原有凝集反应,但特异性和敏感性均差。免疫学检查除了检测血液中的抗体外,还可检测唾液、胃液、尿液中的抗体,但由于准确性有限,儿童的临床应用受到限制16。Hp免疫学检测方法中最引人注目的进展是粪便Hp抗原(hpsa)试验它具有快速、简便、标本易收集等优点,以13C-尿素呼气试验或侵入性试验作“金标准”的对比研究说明,该方法检测Hp感染有很高的敏感性和特异性
10、这一试验不仅对筛选Hp感染患者有用,也可用于监测抗Hp治疗后的疗效。Koletzko等17用EIA法检测304例有消化道症状而未经治疗儿童粪便中Hp抗原,结果显示敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为98%、99%、98%和99%。但尚无充足的依据推广临床应用18。在成人中此试验的敏感性和13C呼吸试验相当19。综上所述,Hp的检测有很多种方法,各有优缺点。临床应用上,一般主张血清学检测作为筛查手段,尿素酶试验作为快速诊断,活检组织检查和细菌培养作为确诊方法,由于耐药菌株的增加,培养与药敏显得尤为重要,组织学检查和13C、14C呼吸试验用于确定经治疗后Hp是否根除。为了提高阳性率和准确性
11、,最好能同时使用几种检查方法,取长补短。随着医学研究的不断深入,Hp的检测方法必将不断取得突破性进展。 参考文献1刘镭,曾常茜.幽门螺杆菌检测方法的研究进展 北华大学学报自然科学版2003，1（4）:33-362赵志泉,徐顺福.幽门螺杆菌的诊断方法与评价J.实用老年医学,2000,14(2):65-57.3Valentine JL, Arthur RR, Mobley HLT,et al. Detection of helicobacter pylori by using the polymerase chain reactionJ.J Clin Microbiol, 1991,29(4):6
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