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1、三物黄芩颗粒抗动物型变态反应及其机制研究*【摘要】 目的 运用模型动物观察三物黄芩颗粒的抗过敏作用，并通过其作用环节的影响 ，初步探讨其抗过敏机制。方法 用大鼠被动皮肤过敏法建立型变态反应动物模型，观察反应蓝斑直径； 测定血清中总IgE含量；观察颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒情况及对外源性组 胺的拮抗作用。结果 该颗粒大、中剂量组能非常显著地抑制大鼠背部皮肤蓝色反应斑的直径（ P0.05），能够减低致敏大鼠血清中总IgE含量，大剂量组与模型组比 较差异有显著性（P0.05）。显微镜下拍摄实验大鼠颅骨骨膜贴片，可 见大、中、小剂量组均有一定程度的肥大细胞脱颗粒现象，但与模型组比 较有所减少。该颗粒大、中
2、剂量组对外源性组胺引起的大鼠瘙痒致痒阈， 与正常对照组比较有明显提高（P0.01）。结论 三物黄芩颗粒能有效对抗型变态反应，具有良好的抗过敏作用。【关键词】 三物黄芩颗粒；型变态反应；动物模型；抗过敏三物黄芩颗粒（由黄芩、苦参、生地制备成颗粒剂）源于古方，本课题旨 在从实验角度，探讨三物黄芩颗粒的抗型变态反应动物模型作用及其机 制，从一个方面为该药的临床提供依据，同时探讨该药治疗型变态反应 类疾病的可行性。本次实验在我院动物室（SPF级）进行。实验药物三物黄芩浸膏粉（其颗 粒制剂已于2004年获SFDA临床批文）由四川维奥制药有限公司提供，每 克浸膏粉含原生药5g，批号：030203。临床拟定
3、剂量为每日8g浸膏粉（ 40g原生药），按成人一般体重60kg计算，人日用剂量为0.67g原生药/ kg。设三物黄芩颗粒大、中、小剂量组（13.4g原生药/kg、6.7g原生 药/kg、3.35g原生药/kg)，相当于临床拟定剂量的20倍、10倍、5倍。 实验时按20%、10%、5%浓度配制药液，以1ml/100g体重灌胃。1 抗型变态反应实验1.1 实验动物 SD大鼠，雌雄各半，体重（18020）g，四川省医学科学院实验动物中 心提供，并配给饲料。合格证号：川实动管质99-32。1.2 实验药物和试剂 强的松片：5mg/片，每次510mg，每日1060mg，仙居制药有限公司提供，批号：020
4、257。1%卵白蛋白：中国医药集团上海化学试剂公司生 产，批号F20010702。百日咳三联疫苗：成都生物制品研究所提供，批 号20020403。0.5%伊文思蓝溶液：中国医药集团上海化学试剂公司生产 ，批号F20020913。1.3 实验仪器、设备 ACS-3H- B电子秤：中山市金利电子衡器有限公司；LG10- 2.4型离心机：北京医疗仪器修理厂制造。1.4 实验方法1.4.1 动物分组 动物购回后，取体重160200g健康SD大鼠50只，按体重随机分为正常 对照组、三物黄芩颗粒大剂量组、中剂量组、小剂量组、阳性对照组5组 ，每组10只，雌雄各半。1.4.2 给药方法 正常对照组给予生理盐
5、水，各组均以1ml/100g体重体积灌胃给药，每日 1次，连续7天。1.4.3 剂量设计 阳性对照组用强的松5mg/kg，相当于临床剂量的10倍。1.5 观察指标及测试方法1.5.1 抗血清的制备 取健康SD大鼠5只，用1%卵白蛋白生理盐水溶液按10mg/kg肌注射于后腿 两侧，同时腹腔注射百日咳疫苗21010/只。12天后，处死大鼠采血， 血液以500r/min低速离心，分离血清，此血清置冰箱备用。1.5.2 正式实验 各组大鼠灌胃给药，每天1次，连续7天。第6天用乙醚浅麻醉大鼠，在其 背中线两侧、距脊柱1.5cm处剪光被毛，每侧剪3点，每点间隔1.5cm。 取上述含IgE的抗血清，用生理盐
6、水稀释成130、140、150三种不同稀 释度，按不同浓度抗血清次序，皮内注射于剪毛的各点，每点0.1ml。第 8天进行抗原攻击：尾静脉注射0.5%伊文思蓝溶液1ml，内含卵白蛋白1m g。经20min后，断颈处死大鼠，剪下背部皮肤，检查注射各点的蓝色反 应斑直径。1.6 实验结果 见表1。表1 三物黄芩颗粒对大鼠被动皮肤过敏反应的影响 （xs）注：与对照组相比，*P0.05；*P0.01如表1所示，正常对照组皮斑直径最大，表明造模成功。三物黄芩颗粒大 、中剂量组连续给药7天，能显著地抑制各个稀释度抗血清引起的大鼠背 部皮肤蓝色反应斑的直径（t检验，P0.05），但不如强的松组（P0 .01)
7、，并且稀释度越大，抑制越明显。表明一定剂量的三物黄芩颗粒具 有明显对抗型变态反应模型的作用。2 对型变态反应作用环节的实验2.1 对大鼠IgE的影响2.1.1 实验动物 SD大鼠，雌雄各半，体重（18020）g，四川省医学科学院实验动物中 心提供，并配给饲料。合格证号：川实动管质99-32。2.1.2 实验阳性药物和试剂 强的松片、1%卵白蛋白、百日咳三联疫苗来源同前。苦味酸由广东台山化 工厂生产。2.1.3 实验仪器、设备 血清总IgE免疫放射分析测定盒：北京北方生物技术研究所提供，批号03 0731。ACS-3H-B电子秤：中山市金利电子衡器有限公司。LG10- 2.4型离心机：北京医疗仪
8、器修理厂制造。2.1.4 动物分组 动物购回后，取体重160200g健康SD大鼠60只，按体重随机分为正常 对照组（不致敏）、模型组（要致敏）、三物黄芩颗粒大剂量组、中剂量 组、小剂量组、阳性对照组6组，每组10只，雌雄各半。2.1.5 给药方法 正常对照组及模型组给予1ml/100g生理盐水，各组均以1ml/100g体重 体积灌胃给药，每日1次，连续7天。2.1.6 观察指标及测试方法 实验第1天，除正常对照组外，用卵白蛋白生理盐水溶液按10mg/kg肌内 注射于后腿两侧，同时腹腔注射百日咳疫苗21010/只，各组按给药方法 灌胃7天。第13天（IgE高峰时间），处死动物采血，血液低速离心，
9、分 离血清，送成都中医药大学附属医院放免科测血清总IgE含量。2.1.7 实验结果 见表2。表2 三物黄芩颗粒对致敏大鼠血清IgE含量的影响 （xs） 由表2可见，空白组与模型组比较差异有显著性(t检验，P0.05），说 明造模成功。三物黄芩颗粒大、中、小剂量组连续灌胃给药7天，能够减 低致敏大鼠血清中总IgE含量，其中大剂量组与模型组比较差异有显著性 （P0.05），说明三物黄芩颗粒大剂量组能够明显减低致敏大鼠血清中 总IgE含量。2.2 大鼠颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒实验2.2.1 实验动物 SD大鼠，雌雄各半，体重（18020）g，四川省医学科学院实验动物中 心提供，并配给饲料。合格证号：川
10、实动管质99-32。2.2.2 实验阳性药物和试剂 强的松片、苦味酸、1%卵白蛋白、百日咳三联疫苗同前。0.5%伊文思蓝 溶液：中国医药集团上海化学试剂公司生产，批号F20020913。2.2.3 实验仪器、设备 ACS-3H- B电子秤：中山市金利电子衡器有限公司；LG10- 2.4型离心机：北京医疗仪器修理厂制造。2.2.4 动物分组 动物购回后，取体重 160200g健康SD大鼠24只，按体重随机分为空白组（不用药，不注射 抗血清，只进行抗原攻击：大鼠头部皮下注射0.5%伊文思蓝溶液1ml，内 含卵白蛋白1mg)、模型组（不用药，但注射抗血清，进行抗原攻击）、 西药组（注射抗血清，进行抗
11、原攻击）、中药小剂量组（小剂量组，注射 抗血清，进行抗原攻击）、中药中剂量组（中剂量组，注射抗血清，进行 抗原攻击）、中药大剂量组（大剂量组，注射抗血清，进行抗原攻击）6 组，每组4只，雌雄各半。2.2.5 给药方法 空白组给予生理盐水，各组均以1ml/100g体重体积灌胃给药，每日1次 ，连续7天。2.2.6 观察指标及测试方法 制备抗血清：另取健康SD大鼠4只，体重160200g，用卵白蛋白生理盐 水溶液按10mg/kg肌内注射于后腿两侧，同时腹腔注射百日咳疫苗2101 0/只。第13天（IgE高峰时间），处死动物采血，血液低速离心，分离血 清，此血清置冰箱备用。正式实验：（1）各组按给药
12、方法灌胃7天；（2 ）第6天，接种抗血清，除空白组外，其余5组大鼠头部皮下注射稀释成 120大鼠抗血清0.1ml；（3）第8天进行抗原攻击，30min后断头处死。 取颅骨，经脱水、固定、染色后，流水冲洗，细心剥离颅骨骨膜，展于载 玻片晾干，在光镜下进行形态学观察并拍摄照片。2.2.7 实验结果及分析 显微镜下拍摄实验大鼠颅骨骨膜贴片，可见空白组实验大鼠颅骨骨膜血管 周围的肥大细胞几乎无脱颗粒现象；而模型组有大量肥大细胞脱颗粒现象 ，且可见细胞破裂，说明造模成功。西药组（30mg/kg)和中药大、中、 小剂量组有一定程度的肥大细胞脱颗粒现象，均明显少于造模组。4个治 疗组比较，肥大细胞脱颗粒现象
13、最少为西药组，其次为大、中、小剂量组 。说明三物黄芩颗粒能抑制肥大细胞脱颗粒，但作用弱于强的松。3 结论本课题利用型变态反应动物模型，研究了三物黄芩颗粒的抗过敏作用， 结果该颗粒能有效对抗型变态反应，具有良好的抗过敏作用。其大、中 剂量连续给药天，对 30、1、50三种不同稀释度的抗血清能非常显著地抑制大鼠背 部皮肤蓝色反应斑的直径（P0.05）。该颗粒能有效作用于实验性型 变态反应的三个作用环节，发挥抗过敏作用，明显减低致敏大鼠血清中总IgE含量，大剂量组与模型组比较差异有显著性（P0.05）。在显微镜 下拍摄实验大鼠颅骨骨膜贴片，可见大、中、小剂量组有一定程度的肥大 细胞脱颗粒现象，且均明显少于对照组，说明三物黄芩颗粒能抑制肥大细 胞脱颗粒，但作用弱于西药组。声明：版权归原作者所有，如果侵犯了你的版权，请第一时间和我联系， 我将立刻做出处理！
