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1、实验八、3,5-二硝基水杨酸测定总糖1在样品的总糖提取时,为什么要用浓在样品的总糖提取时,为什么要用浓 HCl 处理?而在其测定前,又为何要用处理?而在其测定前,又为何要用 NaOH 中中 和?和? 总糖测定是建立在还原糖的测定的基础上的,经 HCL 处理是为了将所有的非还原糖水解还 原成还原性糖,经过测定还原糖含量确定总糖含量。用 NaOH 中和是因为 HCL 会消耗菲 林试剂,所以必须要先中和来消除其影响 2.标准葡萄糖浓度梯度和样品含糖量的测定为什么要同步进行?标准葡萄糖浓度梯度和样品含糖量的测定为什么要同步进行? 时间差别大,吸光度会产生较大误差,虽然溶液在一定时间范围内是保持相对稳定
2、的,但 是分光光度计本身存在局限性,要求时间不能太长。 3.比色测定的操作要点是什么?方法的基本原理是什么?比色测定的操作要点是什么?方法的基本原理是什么? 操作要点:1.用相同型号的比色管。2.配制等体积的系列标准样品。3.配制待测样品(与标 准样品等体积) 。4.对比,找出相同的浓度。 基本原理:基于被测溶液的颜色显色剂后生成的有色溶液,其颜色强度和物质含量成比例。 溶液中的物质在光的照射激发下,产生对光的吸收效应。 4.72 型分光光度计的原理及使用时的注意事项是什么?型分光光度计的原理及使用时的注意事项是什么? 原理:72 型分光光度计的基本依据是朗伯比耳定律,它是根据相对测量原理工作
3、的,即 先选定某一溶剂作为标准溶液,设定其透光率为 100%,被测试样的透光率是相对于标准 溶液而言的,即让单色光分别通过被测试样和标准溶液,二者能量的比值就是在一定波长 下对于被测试样的透光率。 注意事项:1.保持其干燥,且不能置于高温环境使用。 2.定期使用,日常维护工作中要定期更换仪器的硅胶。3. 每次装入比色皿的溶液不要过满,一般装 2/3 即可,并在每次倒溶液时应小心 操作,减少对进光面的擦洗次数,以防进光面磨损而影响透过率。4. 分光光度计是计量仪器,必须定期检定或校准,若经修理后必须重新检定,经检定合格后方可使用。 5.5.比色测定时为什么要设计空白管?比色测定时为什么要设计空白
4、管? 减除溶液的差异,以便消除实验的误差。 6.3,5-3,5-二硝基水杨酸比色法是如何对总糖进行测定的二硝基水杨酸比色法是如何对总糖进行测定的? ? 黄色的 3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂与还原糖在碱性条件下共热后,自身被还原为棕红 色的 3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内,反应液里棕红色的深浅与还原糖的含量成正 比,在波长为 540nm 处测定溶液的吸光度,查对标准曲线并计算,便可求得样品中还原糖 的含量。再通过还原糖求出总糖含量。 7.7.如何正确绘制和使用标准曲线如何正确绘制和使用标准曲线? ?标准曲线应在坐标纸上绘制,横坐标轴距坐标纸底边 1.5-2cm,标示出刻度和葡萄糖的毫克数;纵坐标轴距坐标纸左边 1.5-2cm,标示刻度和光密度值;曲线为过原点的直线,测定点均匀分布在直线的两侧;标准曲线只能在测试条件完全相同的情况下,用于确定样品中的物质含量。对于重复的测定,应取吸光度的平均值查标准曲线;测定数据不应记在标准曲线上。 8.8.糖测定过程中的干扰物质有那些?如何除去?糖测定过程中的干扰物质有那些?如何除去? 具有还原性的物质。过滤除去 9.9.在提取糖时,其他杂质是否会影响到测定?在提取糖时,其他杂质是否会影响到测定? 会,会影响到吸光度,所以先除出去杂质。