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1、原 创 性 声 明本人声明: 所呈交的硕士学位论文， 是本人在指导教师的指导刃 ， 独立进行研究工作所取得的成果。 除文中己经注明引用的内容卜 ， 本论文不包含任何其他个人或集体已 经发表或撰写过的作品成a 。 对本文的研究做出重要贡献的个人和集体， 均已在文中以明确了 式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学 位 论 文 作 者 签 “ :湘军 岭日 期 :与 7 乃 年才 月 ， a 日关于论文使用授权的说明本人同意学校有权保留并向国家有关部门送交学位论文的复印件，允许论文被查阅和借阅。同意 ( 或不同意) 学校及国家有关机构有权公布论文的全部或部分内容，并采用影印、缩印或其他
2、复制手段保存论文。论 文 作 者 签 “ :札军 吃 指 导 教 师 签 “日 期 ， 2 A r ,7 ,s , . -v日 期 : 分 .为 ， 不对吉 林 大 学 硕 士 学 位 论 文+曰 1 A 巨要目 的:探讨结肠直肠癌组织中的MU C - 2的表达与不同的临床病理参数的关系及其临床意义。方法:采用免疚组化方法检测 1 0 4 例结肠直肠癌和 2 0 例正常结肠直肠粘膜中MU C - 2 的表达。结果:2 0例正常结直肠组织中 MU C - 2的表达阳性率为1 0 0 % 。而1 0 4 例结直肠癌组织中M U C - 2 的阳性率为4 0 .3 8 %,MU C - 2在结肠直肠
3、癌中的表达与肿瘤的浸润深度，淋巴结转移和 D u k e s 分期密切相关 ( P 0 . 0 5 ) 。结论:M U C - 2 可能参与结直肠癌的 发生 发展， 但M U C - 2的高 低不能 作为结直肠癌的定性依据， 它可以间 接反映肿瘤的预后 。关健词:MU C - 2 ;免疫组织化学;结肠直肠肿瘤吉丝; k全巫生主 f 兰 3 t一一一一一前言大肠癌包括结肠和直肠癌， 是我国常见恶性肿瘤之一， 其发病率呈上升趋势， 尤其在经济发展较快的城市和地区。 据上海市统计， 1 9 9 0 年大 肠癌的 发病率已由 原来恶性肿瘤的第四 位 上升为次于肺癌和胃 癌之后的第三位， 这种发展趋势与
4、西方经 济发达国家中结直肠癌的发病趋势相一致。因此， 如何预防其 发生以降低其发病率和早期发现并采取积极有效的治疗措施 以降低死亡率已 成为广大医务工作者的共同 任务和目 标。粘蛋白由各自 相应名称的粘蛋白基因编码产生， 迄今已发现 1 3 种， 分为膜结合型和分泌型两大类， 粘蛋白MU C - 2 属于 分泌型粘蛋白的一种，M U C - 2是上皮细胞产生粘液的主要成分，广泛分布于消化道，对消化道粘膜起保护和润滑作用。大量研究表明粘蛋白的基因 表达具有组织和细胞特异性，其蛋白表达的改变在肿瘤发生和细胞分化中起重要作用， 粘蛋 白M U C - 2 与胃 癌的关系已 有报道:第三军医大学的汪荣
5、泉等证实粘蛋白MU C - 2 在胃粘膜癌变中是上调表达的，其表达与 肿瘤的分化密切相关。 但截至2 0 0 0 年1 月， 粘蛋白MU C - 2 与结直肠癌的关系未见相关报道。因此，拟通过粘蛋白 MU C - 2免疫组化的研究，以揭示其与结直肠癌的类型，D u k e s 分期， 有无淋巴结转移， 及组织浸润深度的关系。并 检验 MU C - 2 与结直肠癌有无定性关系。吉 林 大 学 硕 士 学 位 论 文材料和方法1 、材料:本组材料共计 1 0 4例，均为一汽总医院病理科标本( 2 0 0 0 . 1 - 2 0 0 2 . 1 2 ) ，男性 6 1 例，女性 4 3 例，年龄 3
6、 6 - 7 2岁，中 位年龄5 6 . 7 岁。 分化程度按照全国大肠癌病理研究协作组织统一规范化分。另取 2 0 例纤维结肠镜检正常结肠直肠组织做MU C - 2 免疫组化.2 、单克隆抗体来源:试验用 M U C - 2单克隆抗体及生物制剂均为北京中山生物有限公司产品。3 、免疫组织化学方法:( 1 ) 石蜡切片脱腊和水化后，用P B S 冲洗3 次，每次3 - 5分钟。( 2 ) 每张切片 加 1 滴或5 0 u 1 过氧化酶阻断溶液， 以阻断内源性过氧化物酶的活性，室温下孵育 1 0 分钟。( 3 ) P B S冲洗。( 4 ) 每张切片加一滴或5 0 u 1 非免疫性动物血清， 室
7、温下孵育 1 0分钟，减少非特异性背景，不必冲洗， 只需吸去多余的液体。( 5 ) 每张切片 加 1 滴或5 0 u 1 的第一抗体，室温下孵育6 0分钟。吉 林 大 学 硕 士 学 位 论 文( 6 ) P B S 冲洗。( 7 ) 每张切片加一滴或5 0 u 1 生物素标记的第二杭体， 室温下孵育 1 0 分钟。( 8 ) P B S冲洗。( 9 ) 每张切片 加一滴或5 0 u 1 链霉菌抗生素蛋白 一 过氧化物酶溶液，室温下孵育 1 0 分钟。( 1 0 ) P B S 冲洗。( 1 1 ) 每张切片加2 滴或 l 0 o u l 新鲜配制的D A B溶液，显微镜下观察3 - 1 0
8、分钟。( 1 2 )自 来水冲洗，苏 木素复染，中 性树胶封固。4 、染色结果判断:M U C - 2 光镜下不着色 着为阴 性 ( 一) ， 呈棕黄色 着为阳性( 十 ) ，呈棕褐色 着为强阳性 + + ) 。显色 部位为胞浆，显色范围 2 0 %为局灶性，2 0 %- 8 0 %为片状，a 8 0 %为弥漫性.5 、统计学分析:采用卡方检验。P 0 . 0 5 ) a讨论:本组2 0 例正常结直肠粘膜中均检测出MU C - 2 ，表明 在正常人的结直肠中 存在 M U C - 2 ，而 本组 1 0 4例结直肠癌的病例中MU C - 2的阳性率为4 0 .3 8 %， 表明粘蛋白M U C
9、 - 2的下调机制可能参与了结直肠癌的发生。与 H a n s k i 等研究发现M U C - 2 m R N A在非粘液性结直 肠癌呈低水平 表达， 且随着肿瘤细胞转移潜能的降低而降低。本组研究结果显示:粘蛋白MU C - 2的表达与结直肠癌的浸润深度，淋巴结转移和 D u k e s吉 林 大 学 硕 士 学 位 论 文分期有关， 提示粘蛋白M U C - 2的 表达可能参与结肠直肠癌的侵袭性。C h a o 等研究亦显示:粘蛋白MU C - 2 在粘液性结肠直肠癌的表达与局部浸润和远处转移有关。与本组试验结论相同。本组试验结果未发现粘蛋白MU C - 2的表达与肿瘤的分化程度有关，表明
10、结肠直肠癌细胞分泌粘蛋白MU C - 2可能不受肿瘤细胞恶性程度影响。结论:MU C - 2的高低不能作为结直肠癌的定性依据。MU C - 2可能参与结直肠癌的浸润深度，淋巴结转移和 D u k e s分期有关。而与肿瘤的分化无关。MU C - 2可作为判断肿瘤预后的一项依据 。吉 林 大 学 硕 士 学 位 论 文Ab s t r a c tO b j e c t i v e : T h e a i m o f t h i s s t u d y w a s t o e x p l o r e t h ee x p r e s s i o n a n d t h e c l i n i c
11、a l s i g n i f i c a n c e i n c o l o r e c t a l c a r c i n o m a .Me t h o d s : T h e e x p r e s s i o n o f m u c i n MU C - 2 i n 1 0 4 c a s e s o fc o l o r e c t a l c a r c i n o m a w e r e d e t e c t e d b y S - P i m m u n o h i s t o c h e m i c a lt e c h n i q u e .R e s u l t :
12、T h e p o s i t i v e e x p r e s s i o n r a t e s o f m u c i n MU C - 2 i nn o r m a l c o l o r e c t a l m u c o s a w a s 1 0 0 %, b u t t h e p o s i t i v e e x p r e s s i o nr a t e s o f mu c i n MUC - 2 i n 1 0 4 c a s e s wa s 4 0 . 3 8 %. Bo t h o f t h e ms h o w b r o w n - y e l l o
13、 w i n t h e c y t o p l a s m , e s p e c i a l l y a r o u n d t h ek a r y o n . Mu c i n MU C - 2 e x p r e s s i o n w a s r e l a t e d t o i n v a s i o n , l y m p hn o d e m e t a s t a s i s a n d D u k e s s t a g i n g , b u t u n r e l a t e d t od i f f e r e n t i a t i o n .Di s c u
14、s s i o n s : We d e t e c t e d MUC - 2 i n t h e n o r ma l c o l o r e c t a lt i s s u e o f 2 0 p a t i e n t s . i t s h o w s t h a t MU C - 2 i s s e c r e t e d i n t h en o r m a l c o l o r e c t a l t i s s u e . b u t t h e p o s s t i v e r a t e o f c o l o r e c t a lc a r c i n o m
15、a i s 4 0 . 3 8 % , t h e d o w n - r e g u l a t i o n o f c a n c e r m a y b eh a p p e n i n t h e p a t i e n t s . T h e r e s u l t t h a t MU C - 2 i s e x p r e s s e d l o w l yi s s a m e a s H a n s k i s c o n c l u s i o n e x c e p t t h e c o l o r e c t a l m u c i nc a r c i n o m
16、a . Mu c i n MU C - 2 e x p r e s s i o n w a s r e l a t e d t o i n v a s i o n ,l y m p h n o d e m e t a s t a s i s a n d D u k e s s t a g i n g , b u t u n r e l a t e d t o3吉 林 大 学 硕 士 学 位 论 文d i f f e r e n t i a t i o n .C o n c l u s i o n s : T h e d o w n - r e g u l a t i o ne x p r e s s i o n m a y b e i n v o l v e dm p r o g r e s s i o n mo f mu c i n MUC- 2c o l o r e c t a l c a r c i n o ma ,a n d t h e d e t e c t i n g o fm uci nMU C - 2 m a y b
