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1、教师用-生物技术实践 第 页1生物技术实践生物技术实践5-15-1 微生物的利用微生物的利用【直击考纲直击考纲】1.1.微生物的分离和培养。微生物的分离和培养。 2.2.培养基对微生物的选择作用。培养基对微生物的选择作用。【重点突破重点突破】1 1微生物的分离和培养微生物的分离和培养(1)(1)无菌技术：主要包括无菌技术：主要包括消毒和灭菌消毒和灭菌。消毒方法：常用消毒方法：常用煮沸消毒煮沸消毒法、法、巴氏消毒巴氏消毒法。法。常用灭菌方法：常用灭菌方法：灼烧灼烧灭菌灭菌接种环、接种针等金属器具；接种环、接种针等金属器具；干热干热灭菌灭菌主要针对玻璃器皿等；主要针对玻璃器皿等；高高压蒸汽压蒸汽灭
2、菌灭菌主要针对主要针对培养基培养基等。等。(2)(2)如图为如图为倒平板倒平板操作过程，操作时要待培养基操作过程，操作时要待培养基冷却至冷却至 5050_ _左右左右时，在时，在酒精灯火焰酒精灯火焰附近进行。制备固体附近进行。制备固体培养基最后要将平板倒置，其主要目的是培养基最后要将平板倒置，其主要目的是防止培养皿盖上的水珠滴入培养基造成污染防止培养皿盖上的水珠滴入培养基造成污染。教师用-生物技术实践 第 页2(3)(3)平板划线操作平板划线操作(4)(4)稀释涂布平板法：先将菌液进行稀释涂布平板法：先将菌液进行一系列梯度稀释一系列梯度稀释后涂布平板，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起后涂布平
3、板，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而在培养基表面形成的微生物将被分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个菌落单个菌落。如图所示：。如图所示：2 2培养基对微生物的选择作用培养基对微生物的选择作用(1)(1)培养基中加入培养基中加入青霉素青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。可以分离出酵母菌和霉菌。(2)(2)培养基中加入培养基中加入高浓度的食盐高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。可得到金黄色葡萄球菌。(3)(3)培养基中培养基中缺乏氮源缺乏氮源时，可以分离固氮微生物。时，可以分离固氮微生物。(4)(4)当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。当培养基的某
4、种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。(5)(5)改变改变微生物的培养条件微生物的培养条件，也可以达到分离微生物的目的，如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐，也可以达到分离微生物的目的，如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物。高温的微生物。【技能点拨技能点拨】1 1平板划线操作的注意事项平板划线操作的注意事项(1)(1)每次划线之前都需要灼烧接种环灭菌。每次划线之前都需要灼烧接种环灭菌。(2)(2)灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。(3)(3)划线时最后一区域不要与第一区域相连。划线时最后
5、一区域不要与第一区域相连。(4)(4)划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。2 2平板划线法中的平板划线法中的“连续划线连续划线”及稀释涂布平板法中的及稀释涂布平板法中的“系列稀释系列稀释”目的是一样的，都是为了保证菌种目的是一样的，都是为了保证菌种在培养基中单个分布在培养基中单个分布( (平板划线法中最后一次划线的末端处的菌种最纯平板划线法中最后一次划线的末端处的菌种最纯) )。【对位训练对位训练】1 1 临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从
6、病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：(1)(1)为了从样本中获取致病菌单菌落，可用为了从样本中获取致病菌单菌落，可用_法或法或_法将样本接种于固体培养基表法将样本接种于固体培养基表教师用-生物技术实践 第 页3面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。(2)(2)取该单菌落适当稀释，用取该单菌落适当稀释，用_法接种于固体培养基表面，在法接种于固体培养基表面，在 3737 培养箱中培养培养箱中培养 2424 h h，使其均，使
7、其均匀生长，布满平板。匀生长，布满平板。(3)(3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有 A A、B B、C C、D D 四种抗生素的滤纸片均匀置于该平四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含板上的不同位置，培养一段时间后，含 A A 的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A_A_；含；含 B B 的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素 B_B_；含；含 C C 的滤的滤纸片周围的透明圈比含纸片周围的透明圈比
8、含 A A 的小，说明的小，说明_；含；含 D D 的滤纸片周围的透明圈也比含的滤纸片周围的透明圈也比含 A A 的的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素 D D 的的_。(4)(4)根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素_。答案答案 (1)(1)划线划线 稀释涂布稀释涂布( (或涂布或涂布) ) (2)(2)涂布涂布 (3)(3)敏感敏感不敏感不敏感 该致病菌对该致病菌对 C C 的敏感性比的敏感性比 A A 的弱的弱
9、耐药菌耐药菌 (4)A(4)A解析解析 微生物纯化的方法主要为平板划线法和稀释涂布平板法。根据微生物的特点对其进行一系列浓度微生物纯化的方法主要为平板划线法和稀释涂布平板法。根据微生物的特点对其进行一系列浓度梯度稀释，然后用涂布法接种于固体培养基表面，然后在适宜条件下培养；抗生素是由真菌产生的，可梯度稀释，然后用涂布法接种于固体培养基表面，然后在适宜条件下培养；抗生素是由真菌产生的，可以抑制生长、繁殖或杀死细菌等致病菌的一类物质，含以抑制生长、繁殖或杀死细菌等致病菌的一类物质，含 A A 的滤纸片周围出现透明圈，说明有抗生素的滤纸片周围出现透明圈，说明有抗生素 A A 的的地方该致病菌受到抑制
10、；地方该致病菌受到抑制；B B 的周围没有透明圈，说明致病菌对抗生素的周围没有透明圈，说明致病菌对抗生素 B B 不敏感，通过不敏感，通过 C C 的透明圈要比的透明圈要比 A A 的的透明圈小，说明该致病菌对透明圈小，说明该致病菌对 C C 的敏感性比的敏感性比 A A 的弱；的弱；D D 出现了透明圈，说明该致病菌对出现了透明圈，说明该致病菌对 D D 敏感，但是在透明敏感，但是在透明圈上出现一个菌落，又排除杂菌污染，判断此菌落的微生物对抗生素圈上出现一个菌落，又排除杂菌污染，判断此菌落的微生物对抗生素 D D 产生了耐药性。根据以上分析，产生了耐药性。根据以上分析，为达到抗菌的目的，最好
11、选用抗生素为达到抗菌的目的，最好选用抗生素 A A。2 2请回答下列与微生物有关的问题：请回答下列与微生物有关的问题：(1)(1)微生物的分布：能降解某种除草剂微生物的分布：能降解某种除草剂( (一种难以降解的含氮有机物一种难以降解的含氮有机物) )的细菌主要分布在的细菌主要分布在_的土壤中。的土壤中。(2)(2)微生物的消毒和灭菌：在菊花组织培养中，对外植体常用微生物的消毒和灭菌：在菊花组织培养中，对外植体常用_和氯化汞进行消毒；在微和氯化汞进行消毒；在微生物培养中，对培养基常用生物培养中，对培养基常用_法进行灭菌。法进行灭菌。(3)(3)微生物的应用：在葡萄酒的自然发酵过程中，运用吸附在葡
12、萄皮上的野生型微生物的应用：在葡萄酒的自然发酵过程中，运用吸附在葡萄皮上的野生型_发酵产生酒精。发酵产生酒精。(4)(4)微生物的接种：微生物接种的方法很多，最常用的微生物的接种：微生物接种的方法很多，最常用的是下面图示中是下面图示中 A A、B B 两种方法。常用来统计样品活菌数两种方法。常用来统计样品活菌数目的方法是目的方法是 _。(5)(5)微生物的计数：运用活菌计数法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是微生物的计数：运用活菌计数法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是_。(6)(6)微生物的鉴定：要从土壤样液中筛选出能降解该除草剂的细菌微生物的鉴定：要从土壤样液中筛选出能降解
13、该除草剂的细菌( (已知该除草剂在水中溶解度低，含一已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明定量该除草剂的培养基不透明) )。设计培养基配方时，从用途来看，除加入必需的营养成分外，还应。设计培养基配方时，从用途来看，除加入必需的营养成分外，还应_；从物理性质来看，还应加入；从物理性质来看，还应加入_。接种培养后，依据培养基中是否产生。接种培养后，依据培养基中是否产生_来筛选能降解该除草剂的细菌。来筛选能降解该除草剂的细菌。答案答案 (1)(1)长期使用该除草剂长期使用该除草剂 (2)(2)酒精酒精 高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 (3)(3)酵母菌酵母菌 (4)A(4)A 稀释涂布
14、平板法稀释涂布平板法 (5)(5)当两当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 (6)(6)以该除草剂为唯一氮源以该除草剂为唯一氮源( (或或“在无氮培养在无氮培养教师用-生物技术实践 第 页4基中添加该除草剂基中添加该除草剂”)”) 琼脂琼脂 透明圈透明圈解析解析 (1)(1)能降解某种除草剂能降解某种除草剂( (一种难以降解的含氮有机物一种难以降解的含氮有机物) )的细菌主要分布在长期使用该除草剂的土壤中，的细菌主要分布在长期使用该除草剂的土壤中，这是由于长期使用该除草剂，选择出了能分解利用该除草剂的变异类型细菌。这是由于长期使用该除草剂，选择出了能分解利用该除草剂的变异类型细菌。(2)(2)对外植体常用酒精和氯对外植体常用酒精和氯化汞进行消毒；在微生物培养中，对培养基常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。化汞进行消毒；在微生物培养中，对培养基常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。(3)(3)在葡萄酒的自然发酵过程在葡萄酒的自然发酵过程中，运用吸附在葡萄皮上的野生型酵母菌发酵产生酒精。中，运用吸附在葡萄皮上的野生型酵母菌发酵产生
