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1、免疫细胞的分离*1免疫细胞的分离免疫细胞v1、概念直接参与免疫应答及与免疫应答相关的所有细胞。v2、分类单核吞噬细胞系统：单核细胞 / 巨噬细胞树突状细胞（DCs)淋巴细胞系统：T 淋巴细胞 （Th / Tc)B 淋巴细胞NK 细胞粒细胞系统: 中性粒细胞噬酸性粒细胞噬碱性粒细胞*2免疫细胞的分离免疫细胞的分离v人外周血单个核细胞的分离v淋巴细胞的分离v免疫细胞亚群的分离*3免疫细胞的分离细胞分离原理v细胞的大小和比重v细胞表面标志v细胞黏附于各种物质表面的特性*4免疫细胞的分离一、人外周血单个核细胞的分离Ficoll分层离心法人外周血单个核细胞(peripheral blood mononu
2、clear cell, PBMC): Monocyte、Lymphocyte。原理：原理：血液中各细胞成分的比重不同，经离心 沉淀，即可在分层液与血浆之间获得比较纯的 单个核细胞，其中淋巴细胞占90%以上。*5免疫细胞的分离不同细胞密度不同 红细胞和多形核白细胞 1.092单个核细胞 1.070分层液 1.077*6免疫细胞的分离一、人外周血单个核细胞的分离Ficoll分层离心法 Ficoll分层液：蔗糖聚合物+泛影葡胺，密度1.077+0.001g/L。*7免疫细胞的分离二、淋巴细胞的分离v尼龙棉柱法vE花环分离法v补体细胞毒法免疫荧 光法*8免疫细胞的分离二、淋巴细胞的分离尼龙棉柱法原理原
3、理：B细胞和单核细胞具有易黏附的特性， 将淋巴细胞悬液加至尼龙纤维柱上，37 作 用12h后，洗脱的为非黏附性的T细胞。*9免疫细胞的分离PBMC尼龙纤 维棉柱B细胞 单核细胞T细胞二、淋巴细胞的分离 E花环分离法（纯化T细胞）原理原理 成熟成熟T T细胞表面有绵羊红细胞受体（细胞表面有绵羊红细胞受体（E E受体，受体，CD2CD2分分 子），可和子），可和SRBCSRBC形成形成E E花环，花环，B B细胞则无。细胞则无。 E E花环比重大，沉淀，经分离液分离来。花环比重大，沉淀，经分离液分离来。 E E花环周围的绵羊花环周围的绵羊RBCRBC可可 用低渗法除去用低渗法除去 。三、免疫细胞亚
4、群的分离v免疫磁珠分离法v流式细胞术*11免疫细胞的分离三、免疫细胞亚群的分离免疫磁珠分离法原理：原理：将抗体交联于磁珠表面形成免疫磁珠 （Immunomagnetic bead，IMB），免疫磁 珠直接或者间接偶联在抗体上，从而与细胞 相连， 在高强度、梯度磁场中达到细胞磁性 分离的目的。*12免疫细胞的分离三、免疫细胞亚群的分离免疫磁珠分离法v1. 直接法：抗细胞表面分子抗体 +磁性微球免疫磁珠+细胞悬液 与免疫磁珠结合的细 胞v2. 间接法：第二抗体+磁性微粒 第一抗体+细胞 特定细胞免疫磁珠法分选装置三、免疫细胞亚群的分离流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）FCM将免疫荧
5、光技术应用于流式细胞仪，对单个细胞的表面标 志（抗原或受体）进行快速、精确的分析和自动检测，并将 不同类型的细胞分选收集。原理：原理：细胞经荧光染色后，通过高速流动系统，细胞 排成单行，逐个流经检测区。当细胞从流动室喷嘴 处流出时，超声震动液流，使液流段裂成一连串的 均匀小滴，每个小滴内最多含一个细胞，细胞经激 光束照射产生荧光和散射光，由光电倍增管接收， 转换成脉冲信号，数据经电脑处理，分辨细胞类型 。*17免疫细胞的分离流式细胞仪工作原理*18免疫细胞的分离流式细胞仪*19免疫细胞的分离免疫细胞的分离v人外周血单个核细胞的分离Ficoll分层离 心法v淋巴细胞的分离尼龙棉柱法、E花环 分离法、补体细胞毒法免疫荧光法v免疫细胞亚群的分离免疫磁珠分离法、 流式细胞术谢谢！*21免疫细胞的分离
