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1、菌种传代与保藏 菌种传代与保藏 标准菌株主要来源标准菌株主要来源 美国菌种保藏中心美国菌种保藏中心（ATCC） American Type Culture Collection Center 中国普通微生物菌株保藏中心中国普通微生物菌株保藏中心（CGMCC） China General Microbiological Culture Collection Center 工业微生物菌种保藏管理中心工业微生物菌种保藏管理中心（CICC） China Center for Industrial Culture Collection 中国医学微生物菌种保藏中心中国医学微生物菌种保藏中心（CMCC） C
2、hina Center for Medical Culture Collection 菌种传代与保藏 9203要求 标准菌株标准菌株：来自认可的国内或国外菌种保藏机构的标准 菌株 标准储备菌株：标准储备菌株：从国内或国外菌种保藏机构获得的标准 菌株经过复活并在适宜的培养基中 生长后，即为标准 储备菌株。 工作菌株：工作菌株：由标准储备菌株由标准储备菌株, , 转接一代获得的菌株。转接一代获得的菌株。标 准储备菌株可用于制备每月或 每周 1 次转种的工作 菌株 菌种传代与保藏 9203要求 标准储备菌株保存时，可将培养物等份悬浮于培养基 中，并分装于小瓶中， 可采用低温冷冻干燥、液氮贮存、超低温
3、冷冻（低于- 30）等方法保存。 低于-70 或低温冷冻干燥方法可以延长菌种保存时 间。 冷冻菌种一旦解冻转种制备工作菌株后，不得重新冷 冻和再次使用。 菌种传代与保藏 9203要求 工作菌株的传代次数不得超过 5 代（从菌种保藏机构 获得的标准菌株为第 0 代），1 代是指将活的培养物 接种到微生物生长的新鲜培养基中培养 任何亚培养的形式均被认为是转种 或传代 1 次。 实验室应对工作菌株的特性和纯度进行确认。 菌种传代与保藏 菌种传代与保藏 菌液菌液 平板平板 斜面斜面 菌种传代与保藏 根据对氧气的需要情况分为：根据对氧气的需要情况分为： 需氧培养需氧培养 微需氧微培养微需氧微培养 厌氧培
4、养厌氧培养 菌种传代与保藏 菌种保藏的原则 根据微生物生理、生化特点，人工创造条件，主要是 低温、干燥、缺氧三者，使微生物的代谢处于不活泼、 生长繁殖受抑制的休眠状态，以达到保持纯种优良性 状的目的。 菌种传代与保藏 长期保藏法： -80低温保藏法 真空冷冻干燥法 液氮超低温保藏法 沙土管保藏法 短期保藏法： 传代培养保藏法 液体石蜡保藏法 菌种传代与保藏 - -80低温保藏法 将微生物菌种保藏在-80冰箱的一种保藏方法。原 理是低温条件可减缓微生物的新陈代谢，以达到长期 有效地保藏微生物 菌种传代与保藏 菌种传代与保藏 -20有效期12个月，100-1000CFU 简单、便捷、定量、活性稳定
5、 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 铜绿假单胞菌 大肠埃希菌 黑曲霉等12种 根据说明书使用 菌种传代与保藏 传代培养保藏法包括斜面培养和半固体培养等。 操作方法：操作方法： 即将菌种穿刺到斜面或半固体中，培养好后放在低温干 燥处保存（2-5冰箱），定期传种，一般1-2个月移 植一次(视菌种特征而定)。 菌种传代与保藏 标准菌种的申购记录（出库单或发票复印件）； 从标准菌株到工作菌株操作及记录 定期转种传代记录，时间，数量 纯度、特性等实验室所需关键指标的确认记录；每支 菌种都应注明 ：名称、标准号、接种日期、传代数、 操作者； 菌种使用记录，流转记录。 销毁记录 菌种传代与保藏 菌种保藏管理要求
6、相关标准： 病原微生物实验室生物安全管理条例 GB 194892008 实验室生物安全通用要求 GB/T 27405-2008 实验室质量控制规范 食品微生物检测 CNAS CL05 实验室生物安全认可准则 CNAS-CL09 实验室认可准则在微生物检测实验室的应用说 明 菌种传代与保藏 CNAS-CL09检测和校准实验室能力认可准则在微生物 检测领域的应用说明 菌种传代与保藏 5.6 测量溯源性 5.6.2.2.2 实验室必须保存有满足试验需要的标准菌 种（标准培养物）， 除检测方法（如药物敏感试验、抗菌性能测试）中规 定的菌株外 还应包括应用于培养基（试剂）验收/质量控制、方法 确认/证实
7、、阳性对照、阴性对照、人员培训考核和质 量保证等所需的菌株。 菌种传代与保藏 1）标准菌种必须从认可的菌种或标本收集途径获得。 （获得证据） 2）实验室应有文件化的程序管理标准菌种（原始标 准菌种、标准储备菌株和工作菌株），涵盖菌种申购、 保管、领用、使用、传代、存储等诸方面，确保溯源 性和稳定性。该程序应包括： 菌种传代与保藏 a保存菌株应制备成储备菌株和工作菌株。标准储备 菌株应在规定的时间转种传代，并做确认试验，包括 存活性、纯度、实验室中所需要的关键特征指标，实 验室必须加以记录并予以保存。（根据具体的品种制 定确认项目） b每一支标准菌种都应以适当的标签、标记或其它标 识方式来表示其名称、菌种号、接种日期和所传代数。 （标签） c记录中还应包括（但不限于）以下内容： 从原始菌种传代到工作用菌种的代数； 菌种生长的培养基及孵育条件； 菌种生存条件。 菌种传代与保藏 5.6.3.3 所有的标准菌种从原始标准菌种到储备菌株 和工作菌株传代培养次数原则上不得超过 5 次，除 非标准方法中有明确要求，或实验室能够证明其相关 特性没有改变。（传代记录及其确证记录） 5.6.3.4 实验室应有程序和措施以保证标准菌种的安 全，防止污染、丢失或损坏，确保其完整性（具体措 施）。 谢谢！
