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1、洁净室沉降菌测试标准操作规程洁净室沉降菌测试标准操作规程1、菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称 CFU。通常用个数表示。2、测试方法:沉降法,即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿,经 48 小时以上培养,在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数,来评定洁净环境内的活微生物数,并以此来评定洁净室的洁净度。3、所用的仪器和设备1)高压消毒锅:使用时参照文件 GZ-ZL-SOP-066-00 进行操作。2)恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。3)培养皿:一般采用中 90mm15mm 硼硅酸玻璃培养皿。使用前将培养皿置于 121湿热灭菌 20 分钟。4
2、 4、培养基:普通营养琼脂培养基。将培养基加热熔化,冷却至约、培养基:普通营养琼脂培养基。将培养基加热熔化,冷却至约4545在无菌操作条件下将培养基注入培养皿,每皿约在无菌操作条件下将培养基注入培养皿,每皿约 15m115m1。待琼脂。待琼脂培养基凝固后,将培养基平皿放入培养基凝固后,将培养基平皿放入 30303535恒温培养箱中培养数小恒温培养箱中培养数小时,若培养基平皿上确无菌落时,若培养基平皿上确无菌落生长,即可供采样用,制备好的培养即可供采样用,制备好的培养基平皿应在基平皿应在 2 288的环境中存放。的环境中存放。5、测试步骤1 1)采样方法:将已制备好的培养皿放置在预先确定的取样点
3、,打开)采样方法:将已制备好的培养皿放置在预先确定的取样点,打开培养皿盖,使培养基表面暴露培养皿盖,使培养基表面暴露 0.50.5 小时,再将培养皿盖上盖后倒置。小时,再将培养皿盖上盖后倒置。2 2)培养,时间不少于)培养,时间不少于 4848 小时。每批培养基应有对照试验,检查培小时。每批培养基应有对照试验,检查培养基本身是否污染,可每批选定养基本身是否污染,可每批选定 3 3 只培养皿作对照培养。只培养皿作对照培养。3 3)菌落计数:用肉眼直接计数,然后用)菌落计数:用肉眼直接计数,然后用 5 51010 倍放大镜检查,有否倍放大镜检查,有否遗漏。若培养皿上有遗漏。若培养皿上有 2 2 个
4、或个或 2 2 个以上菌落重叠,可分辨时仍以个以上菌落重叠,可分辨时仍以 2 2 个个或或 2 2 个以上的菌落计数。个以上的菌落计数。6、注意事项1)测试用具要做灭菌处理,以确保测试的可靠性、正确性。2)采取一切措施防止人为对样本的污染。3)对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。4)由于细菌种类繁多,差别甚大,计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察,不要漏计培养皿边缘生长的菌落,并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别,必要时用显微镜鉴别。5)采样前应仔细检查每个培养皿的质量,如发现变质、破损或污染的应剔除。7、测试规则1)测试状态(1)沉降菌测试前:被测试洁净室(区)的温湿度须达到规
5、定的要求,静压差、必须控制在规定值内。被测试洁净室(区)已消毒。(2)测试状态有静态和动态两种,并在报告中注明测试状态。(3)测试人员:测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。静态测试时,室内测试人员不得多于 2 个人。2)测试时间(1)对单向流,如 100 级净化房间内及层流工作台,测试应在净化空调系统正常运行不少于 10 分钟后开始。(2)对非单向流,如 10000 级、100000 级以上的净化房间,测试应在净化空调系统正常运行不少于 30 分钟开始。8 沉降菌计数1)最少采样点数目:可按表 1 确定。在满足最少测点数的同时,还宜满足最少培养皿数,见表 2。表 1 最少采样点数目面积
6、(m2) 洁净度级别100 10000 100000 30000010 23 2 2 21020 4 2 2 22040 8 2 2 240100 16 4 2 2100200 40 10 3 3注:表中的面积对于单向流洁净室是指送风面积,对于非单向流洁净室是指房间面积。表 2 最少培养皿数洁净度级别 所需 90mm 培养皿数(以沉降 0.5 小时计)100 14100002100000 230000022)采样点的布置:工作区测试点位置离地 0.81.5m 左右(略高于工作面)。可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点,采样点的布置应力求均匀,避免采样点在某 局部区域过于集中,某局部区域过于
7、稀疏。3)记录:测试报告中应记录房间温度、相对湿度、压差、测试状态及测试数据。4)结果计算:用计数方法得出各个培养皿的菌落数。平均菌落数的计算见下式:m1+m2+mn平均菌落数 m=n式中:m 为平均菌落数;m1 为 1 号培养皿菌落数;m2 为 2 号培养皿菌落数;mn 为 n 号培养皿菌落数;n 为培养皿总数。5)结果评定:用平均菌落数判断洁净室的空气中的微生物。6)洁净室(区)内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准(见表3)。表 3 洁净级别 100 级 10000 级 100000 级 300000 级标准(平均)1 个/皿 3 个/皿 10 个/皿 15 个/皿7)若某洁净室(区)的平均菌落数超过评定标准,则必须对此区域先行消毒,然后重新测试两次,测试结果必须合格。主要参考文献:国家标准 GB/T 16294-1996