《高效液相色谱法测定藻类中的类胡萝卜素和叶绿素》由会员分享，可在线阅读，更多相关《高效液相色谱法测定藻类中的类胡萝卜素和叶绿素（3页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、高效液相色谱法测定藻类中的类胡萝 卜 素和叶绿素*袁建平张义明 史贤明 龚贤弟 陈峰（ 华南 理工大 学轻工 食品 学院广 州 5 1 0 6 4 1 ）（ 香港大学植物学系）提 要 提出了 用高效液相色谱法测定藻类中 类胡萝卜 素和叶绿素的方法。 采用丙酮等有机溶剂提取藻类中 的类胡萝 卜 素和叶 绿素， 然后在反相C 1 8 柱上进行分离。 流动相 选用二氯甲烷 乙腈 甲 醇 水（ 2 2 . 5 : 9 . 5 : 6 7 . 5 : 0 . 5 ） ， 流速为1 . 0 m L / m in 。 用 光度检 测器检测， 波长为4 5 0 n m 。 叶黄素、 - 胡萝卜 素、 胡萝卜
2、素、 叶绿素a 和叶 绿素b 的 平均回 收率分别为9 9 . 1 %， 9 8 . 5 %， 9 9 . 4 %， 1 0 0 . 6 %和9 9 . 9 %， 相对标准偏差分别为2 . 4 %， 5 . 6 %， 6 . 0 %， 4 . 1 %和 4 . 0 %。关键词 高效液相色谱法， 类胡萝 卜 素， 叶绿素， 藻类 分类号O 6 5 8 / S 9 1 21 前言类胡萝 卜 亲( c a r o t e n o id s ) 和叶绿素( c h l o r o - p h y l l s ) 是各种植物中广泛存在的天然色素， 在植物 体中具有重要的生理功能。叶绿素是植物进行光合 作
3、用所必需的物质。 而类胡萝 卜 素 在强光下可防 止 叶 绿素的光氧化； 在弱光下， 可作为辅助色素吸收光 能并传递给叶 绿素 分子）。 类胡萝 卜 素由 胡萝 卜 素 ( c a r o t e n e s ) 和叶黄素类（ x a n t h o p h y l ls ， 为胡萝 卜 素 的含氧衍生物） 两部分组成， 已 发现并分离出 来约 6 0 0 种， 且与叶 绿素同时存在， 因而 对类胡萝 卜 素及 叶绿素的研究较为困难。 虽然难以 得到所有标准品， 但高效液相色谱技术仍被认为是研究类胡 萝 卜 素及叶绿素的有效手段（ 26 。螺旋藻等藻类因含有丰富的营养物质而受到人 们的广泛重视
4、。 本文对实验室培养的 螺旋藻、 小球藻 和H a e m a t o c o c c u s l a c u s tr i s 这 3 种藻类中的类胡萝 卜 素 和叶绿素的高效液相色谱法（ H P L C ） 测定 进行了研 究 。2 实验部分2 . 1仪器与试剂 仪器美国B e c k m a n G o l d 1 2 5 型高效液相色 谱仪， G o ld 1 6 6 型光度检测器， G S - 1 5 R型离心机，德国 B . B r a u n 细胞破碎器； 美国B r a n s o n B - 1 5 型超声波发生器。 试剂叶黄素（ F l u k a 公司， 8 5 ） ，
5、a - 胡萝 卜 素、 胡萝卜 素、 叶 绿素a 、 叶绿素b （ S i g m a 公司） ， 甲 醇、 乙腈、 二氯甲 烷、 丙酮（ B D H公司， H P L C 级） 。2 . 2 色素提取 （ 1 ） 量取 2 m L螺旋藻 ( S p i r u l in a p l a t e n s i s , U T E X 1 9 2 6 ) 培养液， 离心后弃去溶液。 加入 2 m L 9 0 丙酮水溶液， 置于超声波发生器水浴上使其破碎。离心后取上层清液测定。 （ 2 ） 取 2 m L小球藻 ( C h l o r e l l a v u lg a r i s ) 培养 液， 离
6、心后弃去溶液。 用细胞破碎器破碎后加入丙酮， 混匀、 离心 ， 取上清液测定。 （ 3 ） Ha e m a t o c o c c u s l a c u s t r is 色素提取方法同小 球藻。3 结果与讨论3 . 1 类胡萝 卜 素和叶绿素测定的线性范围 线性试验结果表明， 在 0 5 0 m g / L 范围内， 叶 黄素、 a - 胡萝 卜 素、 胡萝 卜 素、 叶绿素a 和叶 绿素 b 的浓度均与峰面积呈良好的线性关系， 其回归方 程分别为（ n =6 ） ： 叶 黄素： A 1 =2 . 9 3 3 C 1 -0 . 9 0 0 , r 1 =0 . 9 9 9 9 ;a -
7、胡萝 卜 素： A 2 = 3 . 9 0 9 C 2 - 1 . 2 5 0 , r 2 = 0 . 9 9 9 8 ; 胡萝 卜 素：A 3 =3 . 1 3 1 C 3+ 0 . 2 4 2 , r 3 =0 . 9 9 9 2 ; 叶 绿素a ： A 4 =0 . 4 1 9 C -0 . 1 3 4 , r 4 =0 . 9 9 9 7 ; 叶 绿素b ：A 5 =1 . 0 6 1 C 5 +0 . 6 0 8 , r 5 =0 . 9 9 9 4 . 3 . 2 回收率与精密度试验 在样品 提取过程中 分别加入已 知量的叶黄素、 a - 胡萝 卜 素、 胡萝 卜 素、 叶 绿素a
8、 和叶绿素b 标样 进样测定。 由测定结果求得平均回收率分别为9 9 . 1 %, 9 8 . 5 %, 9 9 . 4 %, 1 0 0 . 6 % 和 9 9 . 9 %。 重复测定样品（ n =6 ） ， 根据测定结果计算得到叶黄素、 a - 胡萝 卜 素、 胡萝 卜 素、 叶绿素 a 和叶绿*本 文 为 香 港R G C 和 香 港 大 学C R C G 资 助 项目本文收稿日 期 ： 1 9 9 6 - 0 1 - 0 5 ， 修回日期： 1 9 9 6 - 0 3 - 0素 b 测定的相对标准偏差（ R S D ） 分别为 2 . 4 %,5 . 6 %, 6 . 0 %, 4 .
9、 1 % 和 4 . 0 %。 3 . 3 藻类样品的测定图 1 图 3分别给出钝顶螺旋 藻、 小球藻和 H a e m a t o c o c c u s l a c u s t r i c 等3 种藻类色素 提取液的色 谱图， 其色谱条件： 色谱柱为 U lt r a s p h e r e O D S( 4 . 6 m m 2 5 0 m m, B e c k m a n ) ， 流动相为二氯甲烷 - 乙 腈 - 甲 醇- 水( 2 2 . 5 : 9 . 5 : 6 7 . 5 : 0 . 5 ) ， 流速为 1 . 0 m L / m in ， 检测波长4 5 0 n m。 色素 测
10、定结果见表1 ， 螺旋藻中 含有的玉米黄质（ 3 , 3 - 二 羟基- 胡萝 卜 素） 与叶黄素（ 3 , 3 - 二羟基- a胡萝 卜 素） 性质相近， 不能分离， 因而表 1 中螺旋藻的叶黄素含量应包含 玉米黄质（1 ） 。 H a e m a t o c o c c u s l a c u s t r i s 在生长过程中因虾青素（ 3 , 3 - 二羟基- 4 , 4 - 二酮 - 胡萝 卜 素） 酯 的含量增多而逐渐转变为红色。参考文献1 O l a i z o l a M, D u e r r E O. J A p p l P h y c o l , 1 9 9 0 ; 2 :
11、9 7 2 G u i l l o u A, C h o u b e rt G, d e l a N o u e J .F o o d C h e m,1 9 9 3 ; 4 7 6 : 9 3 3 A n d e r s o n D W, T a n g C S , R o s s E . P o u l S c i , 1 9 9 1 ;7 0: 1 1 54 B i a c s P A, D a o o d H G . J P l a n t P h y s i o l , 1 9 9 4 ; 1 4 3 : 5 2 05 Mi n g u e z - Mo s q u e r a M
12、I , H o r n e r o - Me n d e z D .J A g r i cF o o d C h e m, 1 9 9 3 ; 4 1 : 1 6 1 66 Mo n ma M, T e r a o J , I t o M e t a l . B i o s c i B i o t e c hB i o c h e m,1 9 9 4 ; 5 8 : 9 2 6S i mu l t a n e o u s D e t e r mi n a t i o n o f C a r o t e n o i d s a n d C h l o r o p h y l l si n A l
13、 g a e b y Hi g h P e r f o r ma n c e L i q u i d C h r o ma t o g r a p h yY u a n J ia n p i n g ( C o ll e g e o f L i g h t I n d u s tr y a n d F o o d E n g i n e e r i n g , S o u t h C h in aU n i v e r s i t y o f T e c h n o l o g y , G u a n g z h o u ,5 1 0 6 4 1 ) Z h a n g Y i m i n g
14、 , S h i X i a n m i n g , G o n g X i a n d i a n d C h e n F e n g( D e p a r t m e n t o f B o t a n y , U n i v e r s i t y o f Ho n g Ko n g )A b s t r a c t A n i s o c r a t i c r e v e r s e d - p h a s e H P L C me t h o d f o r t h e s i m u l t a n e o u s d e t e r m i n a t i o n o f c
15、a r o t e n o i d s a n d c h l o r o p h y l l s in a lg a e is p r e s e n t e d . B o t h c a r o t e n o id s a n d c h l o r o p h y l ls w e r e s e p a r a t e d b y u s in g a C 1 8 c o lu m na n d a m o b i l e p h a s e c o n s i s t i n g o f d i c h l o r o m e t h a n e / a c e t o n i
16、t r i l e / m e t h a n o l / w a t e r ( 2 2 . 5: 9 . 5: 6 7 . 5, 0 . 5 ) .T h e f l o w r a t e w a s 1 . 0 m L / m i n .T h e s e p i g m e n t s w e r e d e t e c t e d b y a U V - V I S a b s o r b a n c e d e t e c t o r s e t a t 4 5 0 n m .T h e a v e r a g e r e c o v e r i e s o f t h e s e p ig m e n t s b y s t a n d a r d a d d it io n m e t h o d w e r e 9 9 . 1 % f o r l u t e in ,9 8 . 5 % f o r a - c a r o t e n e , 9 9 . 4 % f o r - c a r o t
