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1、实验十实验十 豆粕中尿素酶活性的测定豆粕中尿素酶活性的测定一、实验目的一、实验目的掌握测定尿素酶活性的各种方法的基本原理及方法步骤。二、实验原理二、实验原理将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合，在 30保持 30min 后，尿素酶催化尿素水解产生氨的反应。用过量的盐酸溶液中和所产生的氨，再用氢氧化标准溶液回滴。三、实验设备三、实验设备1、样品筛：孔径 200m； 2、酸度计：精度 0.02pH，附有磁力搅拌器和滴定装置； 3、恒温水浴：可控温 300.5； 4、试管：直径 18mm，长 1 50mm，有磨口塞子； 5、精密计时器； 6、粉碎机：粉碎时应不生强热（如球磨机 7、分析天平感量 0
2、.1mg； 8、移液管；10mL。四、实验内容四、实验内容称取约 0.2g 已粉碎的试样，称准至 0.1mg，转入试管中， （如活性很高的样品，可只 称 0.05g 试样） ，移入 10ml 尿素缓冲溶液，立即盖好试管并剧烈摇动，马上置于 300.5恒温水浴中，准确计时保持 30min。即刻移人 10m1 盐酸溶液，迅速冷却到 20。将试管内容物全部转入烧杯，用 5ml 水冲洗试管两次，立即用氢氧化钠标准溶液滴定 到 pH4.70 。 另取试管作空白试验，移人 10ml 尿素缓冲液，10ml 盐酸溶液。称取与上述试样量相 当的试样，也称准至 0.1mg，迅速加入此试管中。立即盖好试管并剧烈摇动
3、，将试管置于 300.5的恒温水浴，同样准确保持 20min，冷却至 20，将试管内容物全部转入烧杯， 用 5mL 水冲洗试管两次，并用氢氧化钠标准溶液滴定至 pH 4.70。 以每分钟每克大豆制品释放氨的 mg 量来表示尿素酶的活性（UA） ，可按下式计算：mVVCUA30)(140式中：C氢氧化钠标准溶液浓度（mo1/L） ；V0一空白试验消耗氢氧化钠溶液体积（m1） ；V测定试样消耗氢氧化钠溶液体积（m1） ；m试样质量（g） 。若试样经粉碎前的预干燥处理时，则其计算如下：)1 (30)(140SmVVCUA式中：S 一预干燥时试样失重的百分率。由一个分析人员用相同方法，同时或连续两次测定结果之间的相差，应不超过平均 值的 10，以其算术平均值报告结果。
