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1、 大豆论文：大豆转录因子大豆论文：大豆转录因子 GmC2H2GmC2H2 基因转化拟南芥效果分析基因转化拟南芥效果分析【中文摘要】锌指蛋白(zinc finger protein)是一类具有“指状”结构域的转录因子,主要功能是调控基因的表达,锌指蛋白种类较多,但以 C2H2 型最多。C2H2 型锌指蛋白基因最早在非洲爪蟾中发现,植物中发现的第一个 C2H2 型锌指蛋白基因是在矮牵牛中分离得到的 ZPT2-1,之后陆续在矮牵牛、拟南芥、棉花、大豆、水稻等植物中相继分离到了该类型的锌指蛋白基因,并发现在植物中都含有QALGGH 高度保守序列,而动物锌指蛋白中不存在。已有的研究发现C2H2 型锌指蛋
2、白主要参与植物的生长发育以及调控植物的抗逆性。本研究的 GmC2H2 转录因子基因是依据 GenBank 中大豆 EST 数据库的保守序列,设计特异性的引物,利用 PCR、RT-PCR 等技术获得的一个cDNA 开放阅读框序列,它是大豆中一个编码经典 C2H2 型锌指蛋白的基因,并在 Genbank 中注册,其登陆号为:DQ055134。该基因全长 765 bp,开放阅读框长度为 516 bp,其编码 172 个氨基酸的锌指蛋白,分子量约为 19KD。在本实验室前期研究的基础上,将 GmC2H2 基因的全长编码序列分别构建到 16318hGFP 亚细胞定位载体上,将 16318hGFP -Gm
3、.【英文摘要】Zinc finger protein is a kind of transcription factor that has a finger structural domain, and it can regulate the gene expression. There are various types of zinc finger proteins, but most of them belong to the C2H2-type. C2H2 type zinc finger protein was first discovered in Xenopus tropical
4、is, and a C2H2 zinc finger protein gene named ZPT2-1 which was isolated from the petunia was first found in plants, and the gene of this type zinc finger protein have gradually been isolated from the petunia, Arabidopsi.【关键词】大豆 锌指蛋白 GmC2H2 转录因子 转基因拟南芥【英文关键词】Soybean Zinc finger proein GmC2H2 Transcri
5、ption factor Transgenic Arabidopsis thalian 【索购全文索购全文】联系联系Q1Q1：138113721138113721 Q2Q2：139938848139938848 同时提供论文写作一对一辅导和论文发表服务同时提供论文写作一对一辅导和论文发表服务. .保过包发保过包发【目录】大豆转录因子 GmC2H2 基因转化拟南芥效果分析 摘要 6-7 Abstract 7-8 第一章 绪论 16-25 1.1 植物转录因子研究进展 16-17 1.1.1 转录因子 16-17 1.1.2 植物抗逆相关转录因子 17 1.2 植物锌指蛋白的研究进展 17-18
6、1.2.1 锌指蛋白的结构和分类 17 1.2.2 植物锌指蛋白的功能 17-18 1.3 非生物胁迫下植物的应答机制 18-24 1.3.1 低温胁迫下植物的应答特征 18-19 1.3.2 高盐胁迫下植物的应答特征 19-20 1.3.3 ABA 处理下植物的应答特征 20-22 1.3.4 干旱胁迫下植物的应答特征 22-24 1.4 立题目的意义 24 1.5 技术路线 24-25 第二章 GMC2H2 序列分析及植物载体构建 25-39 2.1 试验材料 25-26 2.1.1 菌种及载体 25 2.1.2 酶及生化试剂 25 2.1.3 试剂盒 25 2.1.4 引物 25 2.1
7、.5 测序 25 2.1.6 培养基的配制 25 2.1.7 主要仪器设备 25-26 2.1.8 引物设计和序列分析软件 26 2.2 超表达载体的构建 26-29 2.2.1 PCR 26 2.2.2 PCR 产物的回收 26-27 2.2.3 连接反应 27 2.2.4 感受态的制备 27 2.2.5 重组质粒的转化 27 2.2.6 质粒 DNA 的提取 27-28 2.2.7 酶切检测 28 2.2.8 DNA 序列测定 28 2.2.9 酶切回收 28 2.2.10 连接转化 28 2.2.11 阳性克隆鉴定及测序 28-29 2.3 亚细胞定位表达载体的构建 29 2.3.1 P
8、CR 29 2.3.2 亚细胞定位表达载体的构建 29 2.3.3 原生质体的瞬时转化 29 2.4 RNA 干扰载体的构建 29-31 2.4.1 中间干扰载体的构建 29-30 2.4.2 最终干扰载体的构建 30-31 2.5 突变体表达载体的构建 31 2.6 结果与分析 31-39 2.6.1 目的基因分析 31 2.6.2 植物表达载体的构建 31-32 2.6.3 亚细胞定位表达载体的构建及亚细胞分析 32-34 2.6.4 RNA 干扰载体的构建 34-37 2.6.5 突变体表达载体的构建 37-39 第三章 转基因拟南芥阳性苗的获得 39-48 3.1 前言 39 3.2
9、材料 39-40 3.2.1 实验材料 39 3.2.2 菌株 39 3.2.3 生化试剂 39 3.2.4 试剂盒 39 3.2.5 培养基配制 39 3.2.6 溶液配制 39-40 3.2.7 主要仪器设备 40 3.3 方法 40-42 3.3.1 农杆菌转化 40-41 3.3.2 Floral-dip 法转化拟南芥 41 3.3.3 转基因阳性植株的筛选及鉴定 41-42 3.4 结果与分析 42-48 3.4.1 农杆菌转化 42 3.4.2 Floral-dip 法获得转基因拟南芥 42-44 3.4.3 转基因阳性株 PCR 检测 44-46 3.4.4 转基因植株拟南芥的
10、GUS 组织染色分析 46-48 第四章 转基因拟南芥逆境生理分析及基因表达分析 48-70 4.1 前言 48 4.2 材料 48 4.3 溶液配制、试剂盒及仪器设备 48-49 4.3.1 一般溶液配制 48 4.3.2 试剂盒 48 4.3.3 主要仪器设备 48-49 4.4 实验方法 49-52 4.4.1 拟南芥材料的处理 49 4.4.2 逆境胁迫条件下生理指标测定 49-51 4.4.3 转基因拟南芥目的基因的相关基因表达 51-52 4.5 结果分析 52-70 4.5.1 低温、ABA、高盐处理下拟南芥的表型观察 52-53 4.5.2 低温、ABA、高盐处理下拟南芥细胞膜的损伤率变化 53-55 4.5.3 低温、ABA、高盐处理下拟南芥的 MDA 含量变化 55-56 4.5.4 低温、ABA、高盐处理下拟南芥的可溶性糖含量变化 56-58 4.5.5 低温、ABA、高盐处理下拟南芥的脯氨酸含量变化. 58-60 4.5.6 转基因拟南芥相关基因的表达特征 60-70 第五章 结论 70-72 参考文献 72-80 致谢 80-81 作者简介 81
