基因工程基本原理

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1、-1-基因工程基本原理基因工程基本原理基因工程基本原理：基因工程基本原理：一个完整的基因克隆过程应包括：目的基因的获取，克隆基因载体的选择与改造，目的基因与载体的连接，重组 DNA 分子导入受体细胞，筛选出含感兴趣基因的重组 DNA 转化细胞。实现上述过程需要一些重要的工具酶，如限制性内切核酸酶连接酶等。限制性内切核酸酶是一类识别 DNA 特意序列的内切核酸酶。 目的基因的获取：外源基因又称目的基因，来源于几种途径：化学合成、酶促合成 cDNA，制备的基因组 DNA 及 PCR 技术。细菌质粒、噬菌体和一些病毒 DNA 均可被改造成基因克隆的载体。 基因载体的选择与构建：可作为基因载体的 DN

2、A 分子有质粒 DNA、噬菌体 DNA 和病毒 DNA，它们经适当改造后仍具有自我复制能力，或兼有表达外源基因的能力。 外源基因与载体的连接：连接方式有：黏性末端连接、平端连接和人工接头连接等。 重组 DNA 导入宿主细胞：-2-外源 DNA 与载体在体外连接成重组 DNA 分子，需将其导入宿主细胞。随受体细胞生长、增殖，重组 DNA 分子得以复制、扩增。重组体的筛选：鉴定哪一菌落或嗜菌斑所含重组 DNA 分子确实带有目的基因，即可得到目的基因的克隆，这一过程即为筛选或选择。 克隆基因的表达：在原核或真核表达体系中进行表达，获得所需要的蛋白质。 例题（单选）：在分子生物学领域中，分子克隆主要是指： A.DNA 的大量复制B.DNA 的大量剪切C.RNA 的大量复制D.RNA 的大量剪切E.反转录酶