《缺氧you导因子1α(hif-1α)与肾上腺髓质素(adm)在子痫前期胎盘、血浆中的表达及意义》由会员分享，可在线阅读，更多相关《缺氧you导因子1α(hif-1α)与肾上腺髓质素(adm)在子痫前期胎盘、血浆中的表达及意义（39页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 6 缺氧诱导因子缺氧诱导因子 1（HIF-1）与肾上腺髓质素（）与肾上腺髓质素（ADM）在子痫前期胎盘、血浆中的表达及意义）在子痫前期胎盘、血浆中的表达及意义 中中 文文 摘摘 要要 目的目的：1、研究子痫前期患者胎盘中 HIF-1及其靶基因 ADM 的表达及二者的相关性，从而探讨二者与子痫前期的关系； 2、研究子痫前期患者胎盘中 ADMmRNA 的表达与孕妇平均动脉压、孕妇并发症、围产儿不良结局及新生儿出生体重等临床资料的关系；并分析两组胎盘组织及血浆中 ADM 表达的相关性。 方法方法：选择子痫前期患者 31 例和正常妊娠组 27 例。 1、应用免疫组化链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶连接法
2、（SP 法）和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）对两组妊娠妇女胎盘组织中 HIF-1、ADM 的表达分别进行定位、定性及半定量检测； 2、应用放射免疫方法对两组妊娠妇女血浆中 ADM 的表达分别进行定量检测。 结果：结果： 1、免疫组化结果显示： HIF- 1、ADM 蛋白均主要表达于胎盘组织滋养细胞、血管内皮细胞的胞浆及少量胞核中； 子痫前期组患者胎盘组织中 HIF- 1、ADM 蛋白表达均明显强于正常组，且差异有显著性（P0.05） ； 2、RT-PCR 结果显示： 子痫前期患者胎盘组织中 HIF-1、ADMmRNA 表达均明显强于正常组，且差异有显著性（P0.05） ； 两组间 HIF-
3、1、ADM 的 mRNA 表达水平呈正相关（r=0.826，P0.01） ； 两组间 ADMmRNA 的表达水平与孕妇平均动脉压（r=0.662，P10%细胞核染色或细胞质染成棕褐色；（-）（+）为阴性表达， （+）（+）为阳性表达。记录各组阴性、阳性表达的个数，并列四格表及对结果进行统计学处理。 4、数据统计和分析 采用 SPSS18.0 软件进行统计学分析。所有数据用 xs 表示，组间比较采用 t 检验和 2检验，显著性水平为=0.05。 三、免疫组织化学结果显示 HIF-1 蛋白主要表达在合体滋养细胞、细胞滋养细胞、血管内皮细胞胞浆及少量胞核中。病例组胎盘组织中 HIF-1 蛋白阳性染色
4、明显增强，棕黄色颗粒主要分布在合体滋养细胞中，阳性表达率明显高于对照组，且两组比较差异有显著性（P0.05） ， （见表 1，图 1-3） 。 ADM 蛋白主要表达在合体滋养细胞、细胞滋养细胞、血管内皮细胞胞浆及少量胞核中，绒毛间质细胞中少见。病例组胎盘组织中 ADM 阳性表达率明显高于对照组，且两组比较差异有显著性（P0.05） ， （见表 1，图 4,5） 。 15 图 1 PBS 阴性对照 （免疫组化通用二步法，DAB 染色，苏木素复染，400） 图 2 正常组胎盘组织中 HIF-1的表达 （免疫组化通用二步法，DAB 染色，苏木素复染，400） 图 3 子痫前期组胎盘组织中 HIF-1
5、的表达 （免疫组化通用二步法，DAB 染色，苏木素复染，400） 16 图 4 正常组胎盘组织中 ADM 的表达 （免疫组化通用二步法，DAB 染色，苏木素复染，400） 图 5 子痫前期组胎盘组织中 ADM 的表达 （免疫组化通用二步法，DAB 染色，苏木素复染，400） 表 1表 1 两组胎盘组织 HIF-1 与 ADM 蛋白表达水平的比较两组胎盘组织 HIF-1 与 ADM 蛋白表达水平的比较 组别 例数 HIF-1 ADM - + - + 正常组 27 20 7 18 9 子痫前期组 31 5 26* 8 23* 2 值 19.758 9.742 注：*与正常妊娠组比较，P0.05 1
6、7 四、相关临床资料结果显示： 两组研究对象在年龄、 终止孕周方面比较， 差异均无统计学意义 （P0.05） ；但在收缩压、舒张压、平均动脉压、新生儿出生体重及是否定期产检方面比较，两组差异均有统计学意义（P0.05）(见表 2、3)。 两组研究对象在子痫前期相关并发症（P0.01）及围产儿不良结局（P0.05）方面比较差异均有统计学意义（见表 3） 。其中，子痫前期组孕妇发生 14例并发症及 11 例围产儿不良结局，包括肝损害 2 例，肾损害 4 例，血小板减少3 例，胎盘早剥 1 例，胸、腹水 1 例，心功能不全 2 例，眼底病变 1 例；胎儿宫内缺氧 1 例，胎死宫内 2 例，新生儿窒息
7、 3 例，新生儿死亡 1 例，新生儿并发症4 例。而正常妊娠组孕妇发生 3 例围产儿不良结局，均为胎儿宫内缺氧。 表 2 两组研究对象相关临床资料比较 表 2 两组研究对象相关临床资料比较 组别 孕妇年龄（岁） 终止孕周 （周） 收缩压（mmHg） 舒张压（mmHg） 平均动脉压（mmHg） 新生儿体重（kg） 正常妊娠组 27.5193.756 37.9740.662 114.88910.063 72.0747.937 86.2227.444 3.4560.400 子痫前期组 28.7103.900 36.5813.553 159.22615.762* 102.2589.592*121.22
8、69.935* 2.3770.860*注：*与正常妊娠组比较，P0.05 表 3 两组研究对象相关临床资料比较 表 3 两组研究对象相关临床资料比较 组别 孕妇并发症的发生 （%） 围产儿不良结局发率（%） 定期产检率 （%） 正常妊娠组（27） 0 11.11 92.60 子痫前期组（31） 45.16* 35.48* 48.39* 2值 16.073 4.681 13.176 注：*与正常妊娠组比较，P0.05；*与正常妊娠组比较，P0.01 18 实 验 二 RT-PCR 方法检测 HIF-1 及 ADM 在子痫前期患者胎盘的表达及其相关性 实验材料与方法 实 验 二 RT-PCR 方法
9、检测 HIF-1 及 ADM 在子痫前期患者胎盘的表达及其相关性 实验材料与方法 一、实验材料 （一）研究对象 所选取对象与免疫组化相同。 （二）实验试剂 1、TRIZOL 美国 invotrogen 公司 2、DEPC 北京天根生化科技有限公司 3、氯仿 浙江迪耳药业有限公司 4、异丙醇 浙江杭州双林化工试剂厂 5、ReverAid First Strand cDNA 天根生物科技有限公司 Synthesis Kit 逆转录试剂盒 6、 无水乙醇 杭州长征化工厂 7、2Taq PCR Master Mix 北京天根生物科技有限公司 8、100bp DNA Ladder Marker 北京天根
10、生物科技有限公司 9、琼脂糖 厦门泰京生物公司 10、10ul、200ul、1000ul 吸头、 Axygen 公司 200ulPCR 管、1.5ml 离心管 11、HIF-1引物：上海生工生物工程技术服务有限公司设计合成，经 Genebank检索为 HIF-1特异性引物。序列为： 正义链：5-TGCATCTCCACCTTCTACCC-3 反义链：5-CTGCTCCATTCCATCCTGTT-3 扩增片段长度为 385bp ADM 引物：上海生工生物工程技术服务有限公司设计合成，经 Genebank 检索为 ADM 特异性引物。序列为： 正义链：5-AAGAAGTGGAATAAGTGGGCT-
11、3 19 反义链：5-TGGCTTAGAAGACACCAGAGT-3 扩增片段长度为 410bp 内参-actin 引物：上海生工生物工程技术服务有限公司设计合成，经Genebank 检索特异性引物。序列为： 正义链：5-TGACGTGGACATCCGCAAAG-3 反义链：5-CTGGAAGGTGGACAGCGAGG-3 扩增片段长度为 205bp （三）仪器 1、微量移液器 Finnpipette0.2-2ul， 美国 Thermo 公司 2-20ul，10-100ul，100-1000ul 2、 计时器 福州迈新生物技术开发有限公司 3、 -70电冰箱 美国 REVCO 公司 4、 4电
12、冰箱 中国海尔集团 5、生物洁净工作台 AIR TECH，苏净集团安泰公司 6、 台式高速冷冻离心机 德国 Heraeus 公司 Kendro Bifuge stratos D3720 7、常温台式离心机 LDZ5-2 北京医用离心机厂 8、稳压稳流电泳仪 DYY-8 北京市六一仪器厂 9、紫外可见分光光度仪 ULTROSPEC2100 Biochrom Ltd 公司 10、PCR 仪 9700 Biosystems 公司 11、 隔水式电热恒温器 中国苏州仪器设备公司 12、凝胶成像及分析系统 Gel Doc2000 美国 Bio-Rad 公司 二、实验方法 （一）焦炭酸二乙酯（DEPC）配
13、制及其它试剂的准备 1、DEPC 水：吸出 1ml 放在 1000ml 双蒸水中配成 1DEPC 水，放在 1000ml 容量瓶静置 4 小时备用。 2、 75%乙醇： 用无水乙醇+DEPC 水配， 然后放-20保存 （其中 DEPC 水需先高压） 。 3、电泳缓冲液配制 10TBE 液 1000ml Tris 108g 20 硼酸 55g 0.5Mol/EDTA(PH8.0) 4ml 先加入 800mlDEPCH2O，微波炉加热 1min 溶解后再定容至 1000ml。 4、溴化乙锭（EB）配制 溴化乙锭 1g DEPCH2O 100ml 磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，分装至棕色瓶或锡箔纸包裹容器，室温保存备用。 5、1%非变性琼脂糖凝胶 Agarose 0.2g 1TBE 20ml 微波煮溶，待冷却至 70左右时加入溴化乙锭 2.5ul，混匀并将其倒入制胶板，待自然冷却。 6、实验器皿准备 实验用的
