四种鲜果抗突变及致突变性的实验研究

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1、中国免疫学会中医药免疫分会I L 一1 2 p 4 0 的拮抗剂可能是最有效的治疗皮肤免疫性疾病如银屑病的药物。K a u f f m a n 等“刮用I L 一1 2 p 4 0抗体采取非随机、双盲的方法对寻常型银屑病受试者作了药物安全性、药代动力学和临床疗效的观察,1 8 例皮损面积在3 以上的银屑病患者采用静脉注射的方法,依据病情严重程度将I L 一1 2 p 4 0 剂量分成四组( 0 1 、0 3 、1 0 、5 0m g k g ) ,1 2 例( 6 7 ) 患者使用8 - 1 6 周内P A S I 评分至少降低了7 5 ,无严重不良反应。张字【1 叫报道C e n t o c

2、 o r 公司的新生物药物C N T O1 2 7 5 是一种细胞激酶白细胞介素- 1 2 ( I L - 1 2 )和I L - 2 3 拮抗剂,此药在治疗银屑病I I 期临床试验中取得令人鼓舞的结果。坚尚“刨报道美国犹他州大学的G e r a l dGK r u e g e r 及其同事在NE n g lJM e d 上报告的一项I I 期研究结果表明,皮下使用人白介素1 L - 1 2 和I L - 2 3 单克隆抗体治疗银屑病,可提供显著的长期改善。几乎所有患者有临床意义的改善,银屑病范围和严重性指数改善5 0 。4结语目前大量的临床及实验研究证明,I L - 2 3 T h l 7

3、I L - 1 7 在慢性炎症如银屑病的发病中处于关键地位,T h l 7 细胞的发现为自身免疫性疾病和与其相关的炎性疾病的发病机制及防治对策开辟了新的研究思路和方向。然而,在T h l 7 调节自身免疫和机体防御反应中,仍有许多问题有待解决,如天然免疫和适应性免疫的相互作用? T h l 7 分化途径是否参与或接受T h l T h 2 途径的调控,T h l 7 与T h l T h 2 免疫反应是否具有拮抗或者互补效应? T h l 7 与T r e g 分化途径是否可逆,它们如何影响T h l T h 2 的平衡? 随着深入了解T h l 7 细胞的分化、生理病理的作用和调控机制,必将

4、进一步丰富免疫病理调控机制理论,同时有助于探索建立新的免疫相关疾瘸的治疗途径和方法。四种鲜果抗突变及致突变性的实验研究魏丽珍1 ,牛庆国2 ,温登瑰1 ,粱文杰,单保恩 ( 1 河北省肿瘤医院石家庄0 5 0 0 11 ,2 石家庄市职业病防治所石家庄0 5 0 0 1 7 )环境污染己成为促使肿瘤发病率上升的重要因素。环境中的某些致癌致突变物常通过饮食进入人体,因此人们在减少环境污染的同时,提高饮食中的抗癌因素越来越受到专家学者的关注。可通过饮食来摄入一些天然抗突变物抗癌物。n 天然水果具有低禧、低骀,誊髫维生索及擞鬟受露并攘藏卷诤多苟抗突变铂;磺幻物矮,是源受爨巍夕 人嚣霞豹食趣。毽懑嚣学

5、霄菇药禽髑滔”圆嚣论,静骜食菇霹作为药;暴食用。欤天然禽物t 扣寻我:毙瓣敬突变、抗落物对改受发食绐 :i ;j 、强糖翳癯发生有着瑗寓意义。c j 日前随着临床抗肿瘤化疗药物的广泛使用,医源性致癌因素亦逐渐增多,丝裂霉素( M i t o m y c m ,M M C ) 是临床常用的抗肿瘤化疗药物之一。故在本室以往研究的基础上,又筛选了该四种检品应用S O S抗突变和致突变同步试验技术做了加与不加S 9 系统抑制M M C 的抗突变与致突变作用的试验及重复试验。l材料与方法I I 标准试验菌株:遇到诱变剂能产生S O S 反应致细胞突变后释放噬菌体的菌株为大肠杆菌溶源性菌株G Y 5 0

6、2 7 , 对该噬菌体敏感的指示菌株为G Y 4 0 1 5 两菌株均由第二军医大学生物教研室提供,经鉴定符合原生物学特性。1 2 试验原理:当G Y 5 0 2 7 菌接触到致突变物致癌物即发生S O S 反应造成基因突变释放出噬菌体,导致对该噬菌体敏感的G D J 5 菌体溶解,出现肉眼可见的噬菌斑。1 3 标本来源:四种水果均购自石家庄北国超市鲜品。1 5 2第五届全国免疫学术会议论文汇编1 4 标本制备:芒果、火龙果彻底清洗后沥去水珠,用7 5 酒精棉球消毒表面,用无菌手术刀去皮后直接切成长2 5 c m 、宽及厚0 5 c m 的鲜肉果条。猕猴桃、柠檬彻底清洗后沥去水滴,用7 5 酒

7、精棉球消毒表皮,用无菌手术刀切开露出液汁,待用无菌滤纸条沾取。1 5 对照剂:抗突变阳性对照剂为1 0 0 m g m l 维生素c ( v i t C ) 石家庄制药集团生产;致突变阳性对照剂为0 1 m g m l 丝裂霉素( M i t o m y c i n ,M M C ) 浙江海正药业股份公司生产;既不致也不抗突变对照剂为0 8 5 生理盐水州S ) 。1 6S 9 混合液:S 9 混合液中含2 份S 9 原液和3 份使用液,每皿加0 5 m l 。使用液由1 5 m m o l LP H7 5 的磷酸盐缓冲液、3 m m o l L 的辅酶I I 及1 0 m m o l LM

8、g C l 2 组成。1 7 培养基:L B 液体、半固体顶层和固体底层营养琼脂培养基和配制均按抗突变和致突变同步实验常规进行。3 ,4 1 8 试验菌种活化、处理:将G Y 4 0 1 5 及G Y 5 0 2 7 分别接种于l m l 的L B 液体培养基中,3 7 “ C 恒温水浴振荡( 18 0 次m i n ,) 培养1 5 h ,将G Y 4 0 1 5 及G Y 5 0 2 7 倒入无菌小离心管中,1 0 0 0 0 r r a m 离心3 r a i n ,弃去上清液,加入l m l 的N S ,混匀再次离心弃去上清液,再补充N S 至l m l 混匀,取其1 0ul 加到0

9、9 9 m l的N S 中混匀。将5 0 m l 半固体顶琼脂加热融化后放4 8 恒温水浴中,3 0 r a i n 后加入己处理的G Y 5 0 2 7菌液5 0p1 和G Y 4 0 1 5 菌液0 5 m l ,迅速振荡混匀,取其3 m l 注入到营养琼脂底平皿上,铺匀待凝。加S 9 的试验即在加入3 m l 顶琼脂的同时加0 5 m lS 9 混合液,并在冰盘上快速操作。1 9 加检品及对照剂:用无菌镊子取长7 c m ,宽O 5 c m 的灭菌滤纸条沾M M C 液贴于已含菌的平皿半固体表面直径线,取长2 5 c m ,宽0 5 e r a 的无菌滤纸条分别沾N S 、V i t C

10、 、M M C 对照剂及标本水溶液垂直 贴于M M C 条上,“卅”状。每皿贴三个检品条,每检品设平行样。1 1 0 培养3 7 1 2 培养6 1 2 h 观察结果。2结果2 1 判断标准:试验平皿半固体表面菌苔背景生长良好并有自然分布均匀的噬菌斑;M M C 的长、短条周围呈密集的噬菌斑,并超过自然背景一倍以上;V i t C 条周围噬菌斑减至一半或消失,与M M C 相交处尤为明显;阴性对照N S 周围无明显变化。同时具备以上4 条标准为试验成功。2 2 检品与v i t C 条反应一致则为抗突变阳性,与M M C 条反应一致则为致突变阳性,与N S 发应一致则为阴性。M M C 滤纸条

11、周围出现密集的噬菌斑超过背景l 倍以上判为致突变阳性,2 倍以上判为中度阳性,3 倍以上判为强阳性;V i c C 滤纸条与M M C 长条相交处噬菌斑减少l 倍以上判为抗突变阳性,减少2 倍以上判为中度阳性,减少3 倍以上或完全消失则判为强阳性;在培养8 小时后,平皿上V 记C 、N S 、M M C三种对照剂均符合结果判断标准,出现典型结果,4 种检品均未发现致突变阳性。除芒果在加与不加s 9 的试验中均未显示抗突变作用外,其它三种检品均显示有不同程度的抗突变阳性。柠檬和猕猴桃显 示强阳性( 卅) ,火龙果为弱阳性( + ) 。见附表3 讨论本研究在加和不加S 9 的两种试验及重复试验中,

12、4 种检品均显示对M M C 的致突变性有一定的抑制作用,尤其柠檬、猕猴桃出现强阳性发应。提示该检品可能有减少肿瘤化疗药物的远期潜在毒副反应及预防肿瘤的作用,并为开发新型的保健食品提供了参考依据。唐莉莉等应用M T T 法发现柠檬苦素类似物对乳腺癌细胞M C F 7 生长明显抑制作用,( 5 ) 本研究柠檬显示强抗突变作用可能与含有柠檬苦素和大量的维生素C 有关。1 5 3中国免疫学拿中医药免痰分会S O S 发应属噬菌体诱导原理,适合检测复杂营养哎分检品的遗传毒物和抗突变物,而A m s s 试验原理是用组氨酸缺陷型的沙门氏菌回复突变,所以测定组氨酸丰富的水果的致突变或抗突变物会受到影响,此

13、实验应用G Y 4 0 1 5 及G Y 5 0 2 7 菌株有效避免了组氨酸的干扰。且S O S 发应系歹U 试验假阳性率低,抗突变物一般可认为是抗癌剂:6 7 )附表四种天然热带水果S O S 反应试验结果注+ :弱阳性:+ + + :强阳性:一:阴性加味玉屏风散对利什曼原虫感染模型免疫调节机制的影响刘丹2 ,王莉新,杨秋美,缪珠雷,陈圣敏,王易2 ( 上海中医药大学免疫学与病原生物学教研室,上海2 0 1 2 0 3 )利什曼原虫感染模型是T h l T h 2 免疫偏离的经典模型,也是研究保护性抗寄生虫免疫机理的经典模型。B A L B ,c 鼠系对硕大利什曼原虫高度易感,其存在严重T

14、 h 2 偏离,可能是导致其不能有效清除感染的原因【l 】。近年报道,C D 4 + C D 2 5 + 调节性T 细胞( C D 4 + C D 2 5 + r e g u l a t o r yTc e l l ,T r e g ) 可协调利什曼原虫与感染宿主间的相互关系,参与维持伴随免疫或带虫免疫( c o n c o m i t a n tO rp r e m u n i t i o n ) 状态【2 】。同样,在其它多种感染性疾病慢性化衍变过程中,T h l T h 2 平衡机制以及T r e g 都具有重要的调控作用。免疫学干预是感染性疾病治疗的常用辅助手段,中医药抗感染也可能通过

15、免疫干预来实现。玉屏风散出自丹溪心法,系中医扶正固本的经典方。临床多在此方基础上加味,来治疗和预防体质虚弱导致的反复感冒和上呼吸道感染,显示了其具有的抗感染作用。并且,现代药理研究发现其具有双向免疫调节作用。基于此,本研究推测T h l r l l d 平衡和T r e g 可能是加味玉屏风免疫调节的作用靶点,敏建立亚马逊利什曼原虫( L e i s h m a n i aa m a z o n e n s i s ,L A ) 感染的动物模型,并用复方加味玉屏风散及其两味单味主药黄芪和党参进行干预,探讨该中药复方对利什曼原虫感染模型免疫调节机制的影响。一、材料和方法:基金项目:本课题由上海高

16、校选拔培养优秀青年教师科研专项基金:上海市教委高水平特色发展项B l i p 教委财( 2 0 0 5 ) 8 1 号1 :上海市教委重点学科建设项目( J 5 0 3 0 ) 资助。 1 作者简介:刘丹( 1 9 7 6 ) ,女,山东省郓城复人讲师? 博士。主要从事中医药与抗感染免疫方向研究t e l :0 2 1 5 1 3 2 2 1 4 8 ;e m a i l :L d a n 6 6 6 s l n a e o m 2 通讯作者简介:王易( 1 9 5 5 ,1 1 ) , t e l :0 2 1 - 5 1 3 2 2 1 4 8 :e m a i l :w a n g y i l 9 5 5 s m m a i l c n

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