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1、KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 罗 丁， 马根顺 作者单位：(成都军区昆明总医院肝胆外科 成都军区肝胆外科中心， 云南 昆明 650032)【摘要】 目的： 探讨胃饲红景天预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响及其对肝功能的保护作用。方法： 48只健康成年雄性 SD 大鼠随机分为生理盐水对照组和红景天预处理组，两组分别予与等量生理盐水、红景天水煎剂(5 gkg-1d-1 生药材)灌胃 5 d，末次灌胃 2 h 后经第一肝门阻断入肝血流 30 min 而后松开无创动脉夹，恢复入肝血流，分别于缺血 30 min 及再灌注后1 h、6 h 及 24 h 各时相点活杀动物取材，检测血
2、清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肝组织丙二醛(MDA)，并用 TUNEL 染色及图像分析法检测肝细胞凋亡率的变化。结果： 与生理盐水对照组比较，红景天预处理组 ALT、MDA、肝细胞凋亡率在上述多个时相点显著降低(P0.05);再灌注 1 h 比较，B 组较 A 组显著降低，差异有统计学意义(P0.05);再灌注 6 h， B 组较 A 组明显降低，差异有统计学意义(P0.05);再灌注 24 h，B 组较 A 组明显降低，差异有统计学意义(P0.05)。见表KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 肝组织 MDA 含量检测结果B 组与 A 组比较，缺血 30 min、再灌注 1 h、6 h 及
3、 24 h 4个时相点均明显降低，差异有统计学意义(P0.05)。见表 2。2.3 TUNEL 法细胞凋亡的检测结果A 组:各时相点均可见散在凋亡细胞并以再灌注后更为明显，再灌注 6 h 又较再灌注 1 h 明显增加并达到峰值，但再灌注 24 h 组较再灌注 6 h 减少。B 组:各时相点均可见散在凋亡细胞，但和 A 组相比较，凋亡细胞明显减少(见图 1、图 2)。进一步应用计算机图像处理系统(LEICA 计算机图像分析系统)分析切片表明，B 组肝组织凋亡指数在缺血 30 min、再灌注 1 h、6 h 及再灌注 24 h 4 个时相点均明显降低，差异有统计学意义(P0.05)。见表 3。表
4、1 两组缺血再灌注后不同时相点血清 ALT 活性的比较表 2 两组缺血再灌注后不同时点肝组织 MDA 活性的比较(mol/g，n=6，xs)表 3 两组缺血再灌注后不同时点肝组织凋亡指数3 讨论众所周知，肝细胞缺血再灌注损伤时，随着肝细胞的坏死破裂，大量的 ALT 即被释放到血中因而可被检测，并且已成为临床肝细胞破坏最灵敏的检测指标之一。本实验中，ALT 除在缺血 30 min 这一时相点两组间差异无统计学意义外，其余各时相点均显示红景天预处理组显著低于生理盐水对照组(P0.05)，提示红景天预处理可能通过某种机制减少了肝细胞的破裂，使得 ALT 的释放得以减KKME-专业医学搜索引擎 htt
5、p:/ MDA 的检测发现，生理盐水对照组在再灌注后，MDA 明显升高，随着时间的延长分别在再灌注 6 h 达到最高点，同时 ALT 明显升高，提示再灌注后有大量氧自由基的产生并造成肝功能损害。而红景天预处理组各时相点与生理盐水对照组对比，MDA 均显著减少 (P0.05)，反映出红景天不但在缺血期能有效提高细胞耐缺氧能力而降低脂质过氧化，而且在再灌注各时相点也有继续发挥抗脂质过氧化的能力，同时 ALT 升高幅度也较生理盐水对照组低。MDA 与 ALT 此种平行关系从一个侧面印证了前述自由基在肝脏缺血再灌注损伤的过程中起着重要作用的观点，同时由于MDA 在红景天预处理组的相对低含量也从另一个侧
6、面表明了红景天可能通过抑制自由基在肝脏缺血再灌注期的生成和释放而增加了肝脏对缺血再灌注损伤的耐受性。但红景天预处理是否也能通过激活体内抗氧化系统而降低脂质过氧化并减轻肝脏的缺血再灌注损伤尚KKME-专业医学搜索引擎 http:/ G 等6研究发现，肝细胞凋亡数目和移植后肝存活率显著相关。移植后凋亡细胞数量愈多，肝移植后移植肝的存活率就愈低，原发性无功能的发生率也愈高。Schiosbsger等7研究也发现，肝缺血再灌注时细胞凋亡现象是一个不断发生的动态过程，与缺血程度、再灌注时限以及肝组织的血流分布和血中正常营养成分的梯度变化有关，肝细胞凋亡和再灌注损伤造成的生化和病理学参数改变平行。本实验采用
7、先进的凋亡细胞检测技术TUNEL 法,并对凋亡细胞进行原位定性、定量分析，结果发现肝缺血再灌注时细胞凋亡有上述动态的变化，尤其在生理盐水对照组较为显著，再灌注后各时相点凋亡细胞较缺血 30 min 明显增多，再灌注 6 h 又较再灌注 1 h 更多并达到峰值，而再灌注 24 h 组虽仍可见大量的凋亡细胞，但较 6 h 减少。这一变化趋势与大鼠血清 ALT 的变化趋势极为近似，提示细胞凋亡程度与肝脏组织损伤程度可能存在某种平行关系。而应用红景天预处理后，肝组织凋亡指数在缺血 30 min、再灌注 1 h、6 h 及再灌注 24 h 4 个时相点均明显降低，差异有统计学意义(P0.05)，血清 A
8、LT 也较生理盐水对照组明显下降，显示了红景天良好的抗凋亡并保护肝功能的效应。总之，肝脏缺血再灌注损伤在导致明显肝脏损伤的同时，伴有脂质过氧化损伤及肝细胞凋亡的增加。肝脏缺血再灌注前给予KKME-专业医学搜索引擎 http:/ MDA 的含量，减少肝细胞凋亡，从而达到保护肝脏功能的目的。【参考文献】1Oshiro T, Shiraishi M, Muto Y. Adenovirus mediated gene transfer of antiapoptotic protein in hepatic ischemiareperfusion injury: the paradoxical effe
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10、, Tsukamoto S, et al. Tumor necrosis factorinduced, superoxidemediated neutrophil accumulation in cold ischemic/reperfused rat liverJ.Hepatology,1997(1):113-120.5汤劲松，肖兆勇，陈平，等.银杏叶提取物对大鼠、肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及对凋亡的影响J.实用临床医药杂志，2008(11)：9.6BorghiScoazec G, Scoazec JY, Durand F ,et al. Apoptosis after isehemiareperfusion in human liver allograftsJ.Liver Transpl Surg, 1997(4):407-415.7Schlossberg H，Zhang Y, Dudus L，et al. Expression of KKME-专业医学搜索引擎 http:/ and cjun during Hepatocellular remodeling of following ischemia/reperfusion in mouse liverJ.Hepatology，1996(6):1546-1555.论文查重检测论文查重检测
