《粉防己碱抑制心肌细胞磷酸化减轻缺血再灌注损伤引发的炎症反应》由会员分享，可在线阅读，更多相关《粉防己碱抑制心肌细胞磷酸化减轻缺血再灌注损伤引发的炎症反应（10页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 曹雪滨 冯义柏 作者单位：解放军第 252 医院心内科（全军老年心血管病中心） 河北 保定 071000； 武汉协和医院心内科 【摘要】 目的：探讨心肌缺血/再灌注过程中粉防己碱（Tet）对核转录因子（NF）-B 的抑制因子（IB-）磷酸化及肿瘤坏死因子-(TNF-)、白细胞介素-6(IL-6)表达的影响以及机制。方法：60 只 SD 大鼠被随机分为 3 组：缺血/再灌注损伤组（I/R） 、假手术组、粉防己碱治疗组（Tet） 。I/R 组结扎大鼠左前降支造成心肌缺血 30 min 后再灌注 24 h，然后处死大鼠；假手术组只穿针不结扎，余步骤同 I/R
2、 组；Tet 组在缺血前 20 min 腹腔注射 Tet，余步骤同 I/R 组。处死大鼠 24 h 后取心肌标本，用酶联免疫吸附法（ELISA）检测心肌组织中 TNF-、IL-6 表达水平，应用免疫组织化学方法检测磷酸化 IB-（P-IB-）的表达。结果：Tet 组与I/R 组相比 TNF-、IL-6 表达水平明显减低（208.4025.12）pg/ml（306.6517.78）pg/ml, (587.40137.40）pg/ml（1003.75138.33）pg/ml, P 均0.01 ，而 Tet 组与假手术组相比表达明显增强（208.4025.12）pg/ml（61.459.20）pg/
3、ml,(587.40137.40）pg/ml（229.2590.13）pg/ml, P 均0.01 。Tet 组大鼠心肌细胞胞浆中 P-IB- 的表达明显低于 I/ R 组KKME-专业医学搜索引擎 http:/ P 均0.01 。结论：Tet 可以抑制 IB- 磷酸化，显著减少前炎症因子 TNF-、IL-6 的产生，减轻心肌缺血/再灌注损伤。【关键词】 粉防己碱;再灌注损伤;肿瘤坏死因子-;白细胞介素-6Tetrandrine inhibited IB- phosphorylation regulated the expression of TNF-、IL-6 during rat myoc
4、ardial ischemic reperfusionWANG Yuqin CAO Xuebin FENG YibaiDepartment of Cardiology， The PLA 252 Hospital,Baoding,Hebei,071000,ChinaAbstract：Objective:To investigate the effect and mechanism of tetrandrine(Tet) on the phosphorylation of IB-（P-IB-） and the expression of TNF-，IL-6 during rat myocardia
5、l ischemic/reperfusion(IR) period.Methods:A total of 60 male Sprague-Dawley rats were randomly divided into 3 groups: Sham group,I/R group, Tet group.The Sprague-Dawley rat underwent 30 min of left anterior descending (LAD) coronary occlusion and 24 h reperfusion to make ischemia/reperfusion (I/R) i
6、njury model in vivo.Sham group were not subjected to occlusion of artery.Tet group were injected with tetrandrine to abdominal cavity 20 min before ischemic starting.The other procedures were same to the I/R group.Samples were collected after 24h reperfusion.The expression level KKME-专业医学搜索引擎 http:/
7、 TNF- and IL-6 protein was detected by ELISA.The expression of P-IB- was observed by immunohistochemical stain and image analysis.Results:In Tet group the expression of TNF- 、IL-6 were significant lower compared with those of I/R group（208.4025.12）pg/ml vs.(306.6517.78）pg/ml,(587.40137.40）pg/ml vs.(
8、1003.75138.33）pg/ml, P0.01 all and significant higher than shame group respectively（208.4025.12）pg/ml vs.(61.459.20）pg/ml,(587.40137.40）pg/ml vs.(229.2590.13）pg/ml, P0.01 all).In Tet group the expression of P-IB- were significant lower than that of I/R group（0.08170.09）pg/ml vs.(0.17550.01）pg/ml, an
9、d significant higher than that of shame group(0.08170.09）pg/ml vs.(0.05130.03), P0.01 all.Conclusion:Tetrandrine can attenuate myocardial ischemia/reperfusion injury,inhibit the IB- phosphorylation and reduce the harmful cytokine TNF- and IL-6.Key words：Tetrandrine;Reperfusion injury; Tumor necrosis
10、 factoralpha; Interleukin-6肿瘤坏死因子-(TNF-)和白细胞介素-6（IL-6）是由激活的巨噬细胞或单核细胞产生的，具有多种生物学效应的细胞因子1 。心肌组织进行再灌注循环时,巨噬细胞和心肌细胞本身受刺激分泌产生前炎症因子 TNF- 和 IL-6。核转录因子（NF）B 的抑KKME-专业医学搜索引擎 http:/ NF-B 以三聚体的形式结合在一起，当IB- 磷酸化为磷酸化 IB-（P-IB-）后可以解除对 NF-B 的抑制，使之得以转位，由细胞浆进入细胞核发挥调控前炎症因子 TNF-、IL-6 的生物活性作用。TNF- 产生过程中的转录因子，在心肌缺血再灌注引发的
11、氧化应激中可以激活 NF-B2，活化的 NF-B 导致黏附分子、细胞因子和趋化因子的转录激活,促进心肌缺血再灌注后的炎症反应，活化的 NF-B 在缺血介导的心脏产生前炎症因子的过程中起重要作用3。粉防己碱（Tet）是从中药防己科植物粉防己根中提取的生物碱，为双苄基异喹啉衍生物。它具有减少缺血区炎症细胞浸润，抑制炎症介质的产生，减轻心肌缺血/再灌注损伤的药理作用4，5。本实验采用大鼠心肌缺血再灌注模型，观察 Tet 对心肌组织内 P-IB- 表达水平以及对 TNF-、IL-6 表达的影响。1 资料与方法1.1 主要试剂及仪器粉防己碱由华中科技大学同济医学院药理教研室提供（纯度98） ；TNF-、
12、IL-6 酶联免疫吸附法（ELISA）检测试剂盒由晶美公司提供;P-IB- 单克隆抗体由 SantaCruz 公司提供（sc-7977-R）, SP 试剂盒和 DAB 由武汉晶美公司提供。其余化学试剂均为国产分析纯产品。1.2 实验分组及动物模型的制备 KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 250300g SD 大鼠(由华中科技大学同济医学院医学实验动物中心提供)。用 1%戊巴比妥钠(30mg/kg)腹腔内注射麻醉，行气管插管，连接小型动物呼吸机(ModelDH-140，浙江大学医疗器械公司)，按 15 ml/kg 潮气量，频率60 次/min，呼吸比为 21 运行。在左侧 34 肋间暴露
13、心脏，于左心耳与肺动脉圆锥间穿 6/0 号丝线，进行硅胶管套扎，形成心肌缺血。当肉眼观察到结扎点远端心前壁变紫、心电图显示 ST 段抬高、T 波高耸为模型成功，抬高的 ST 回落 1/2 以上为再灌注成功的标志。实施 30min 缺血，再灌注 24 h，建立心肌缺血/再灌注模型。整个实验过程中，用多道生理记录仪连续记录标准肢体导心电图。1.3 实验方案共 60 只雄性 SD 大鼠。按随机化原则将大鼠分为以下 3 组：缺血/再灌注损伤(I/R)组：手术前 30min 腹腔注入生理盐水 1.2ml，按上述步骤进行缺血 30min，再灌注 24 h；假手术组：于缺血/再灌注前 30min 腹腔注入生
14、理盐水 1.2ml，只行假手术，即在肺动脉圆锥与左心耳间穿线，不结扎，30min 关胸，24 h 后处死大鼠；粉防己碱治疗组(Tet)：手术前 20min 腹腔内注射粉防己碱 3mg/kg（约1.2ml） ，余同 I/R 组。1.4 检测指标及方法（1）心肌细胞 TNF- 的表达:精确称取各组缺血部位心肌组织 300mg,加入冷磷酸盐缓冲液（PBS）(4),匀浆器迅速制备心肌KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 离心 5min,取上清-70温箱保存，按 TNF- ELLSA 检测试剂盒操作说明书进行；（2）心肌细胞胞浆 P-IB- 表达水平测定：石蜡切片经常规脱蜡、水化, 滴加第一抗体(P
15、-IB-) 后, 以免疫组化 SP 法对切片标本进行染色,DAB 显色, 蒸馏水洗脱水、透明、封片。每个标本在显微镜下观察 P-IB- 的活化表达, 阳性染色为胞浆显现棕色颗粒。阴性对照以 PBS 代替一抗。以 HMIAS-2000 型全自动医学彩色图像分析系统进行图像的平均光度分析来比较各组表达 P-IB- 的水平高低。1.5 统计学处理用 SPSS13.0 统计软件分析。计量资料用均数标准差(s)表示,组间比较用方差分析。多组间两两比较用最小显著差值（LSD）法。P0.05 为差异有显著性。2 结 果2.1 心肌组织 TNF-、IL-6 的表达I/R 组 TNF-、IL-6 水平显著高于假手术组和 Tet 组（P0.01） ；Tet 组 TNF-、IL-6 的表达水平明显低于 I/R 组（P0.01）见表
