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1、1.知识背景：腹主动脉瘤(abdominal aortic aneurysm,AAA)是一类死亡率极高的主动脉疾病,其确切发病机制尚未明确。为探索 AAA 的发生机制和治疗方法,必须建立AAA 的动物模型。2.研究目的：建立更为简便、稳定的 AAA 动物模型，为 AAA 疾病病机及治疗方法的研究提供与临床病例更为贴切的动物模型。3.解剖学基础腹主动脉及其分支：（参考人腹主动脉及其分支局部解剖）3.1 脏支不成对（奇数）脏支包括腹腔干、肠系膜上动脉和肠系膜下动脉。成对脏支包括肾上腺中动脉、肾动脉和睾丸（卵巢）动脉。（一）肾上腺中动脉 middlesuprarenal artery 平第 1 腰椎
2、高度发自腹主动脉侧壁，在胰后方行向外上至肾上腺。（二）肾动脉 renal artery 在平第 2 腰椎高度发自腹主动脉，横行向外，在肾静脉后方经肾门入肾，在进入肾窦前分为前、后两干。右肾动脉从下腔静脉、胰头和 12 指肠降部的后方横过；左肾动脉则经胰体、脾静脉和肠系膜下静脉的后方。肾动脉在入肾前发出肾上腺下动脉。有时一侧可有两条或两条以上的肾动脉，不经肾门直接空入肾的上极或下极，叫做肾副动脉。（三）睾丸（卵巢）动脉 testicular(ovarian) artery 在第二腰椎高度起自腹主动脉前壁，细而长，沿腰大肌前面行向外下，依次跨过输尿管和髂外动、静脉的前方，睾丸动脉至腹股沟管腹环处和
3、输精管伴行入腹股沟管，参加精索的构成，并迂曲下行至睾丸后缘上端处，分支至睾丸和附睾。在精索内睾丸动脉前方有蔓状静脉丛，后方为输精管。行程中还发出细支至输尿管和提睾肌。卵巢动脉在小骨盆上缘进入卵巢悬韧带内，继续下行于子宫阔韧带内，分支至卵巢、输卵管和输尿管。3.2 壁支（一）膈下动脉 inferior phrenic artery 在主动脉裂孔稍下起于腹主动脉，右侧者在下腔静脉后方，左侧者位于食管末段的后方，至中心腱处分为前、后支，分布于膈。膈下动脉还发出肾上腺上动脉（二）腰动脉 lumbar arteries 共 4 对，分别在平第 1-4 腰椎体高度起自腹主动脉后壁，向外侧横过腰椎体的前面和
4、侧面，经腰大肌与腰方肌背面，进入腹外侧肌群内。沿途分支供给腰背部、腹部的肌肉和皮肤，以及椎管、脊髓下段和被膜等。4.实验器材：剪毛剪（弯剪刀） ，手术刀，手术剪，止血钳，辅料镊，组织镊，眼科剪，眼科镊，显微手术镊，动脉夹，电凝器，玻璃分针，3-0 号手术缝合线，2.5%碘酒棉球，75%酒精棉球，干棉球，无菌纱布块，无菌棉签，10%水合氯醛，生理盐水，弯盘，无菌手术洞巾，透明胶带，PE-10 导管， （2-4 倍眼镜式放大镜）等等。5.实验准备：实验前将手术器械和玻璃分针用棉布包裹好，干棉球以牛皮纸袋包装，纱布块用铝制饭盒盛放。以上物品均在 121,高压灭菌 30min，然后移至烤箱中，60烘烤
5、至干燥。实验动物在手术前 24 小时应放置在无垫料的铁丝笼中禁食但不禁水饲养，手术前 4 小时禁水。6.实验动物的麻醉：麻醉药选用 10%水合氯醛，剂量为 0.3ml/100g 体重，给药途径为腹腔内注射，待大鼠给予刺激后无体动，眼睑反射消失等体征出现（手术麻醉期）即可进行手术。7.实验动物的固定：将大鼠仰卧位放置于手术台上，四肢用狭窄的透明胶带捆绑并固定于玻璃手术台上。8.备皮：用弯剪刀将大鼠剑突以下腹部被毛去除，尽量去除干净。9.手术术式：腹部常规碘酒棉球消毒，然后以 75%酒精棉球脱碘。用手术刀在腹部正中切口，长约 3cm，切开皮肤后，沿腹白线切开肌层（若有出血，用电凝器止血） ，暴露内
6、脏，用生理盐水湿润的纱布块填塞的方法，将肠管推向右侧腹腔，在腹主动脉前方切开后腹膜，用两根棉签分别向两侧推开腹主动脉前壁及侧壁脂肪组织，显露腹主动脉。此时要由助手协助佩戴眼镜式放大镜，并调节焦距，使视野清晰。以显微镊和玻璃分针分离腹主动脉与下腔静脉，游离出肾动脉水平以下腹主动脉 1cm（以游标卡尺测量此段腹主动脉直径并记录） ，用 6-0 号丝线活结结扎由此段腹主动脉发出的 1-2 对腰动脉及肠系膜下动脉，以动脉夹在肾动脉下阻断腹主动脉。分离左侧髂总动脉约 1cm，并将远端用 3-0 号丝线结扎，近端插入 PE-10 导管，使其尖端达到肾下腹主动脉，距离动脉夹阻断处 0.3-0.5cm，在近腹
7、主动脉分叉处以 0 号丝线活结结扎腹主动脉，固定 PE 导管，以微量注射泵加压灌注猪胰弹力蛋白酶（浓度 25U/ml，速度 4ml/h，时间 30min） 。灌注结束后，回吸胰弹力蛋白酶，松开腹主动脉远端近分叉处结扎线的活结，拔除 PE 导管，结扎左侧髂总动脉，取下腹主动脉近端动脉夹，松开腰动脉及肠系膜下动脉处结扎线的活结，恢复腹主动脉及其分支的血流。逐层关腹缝合。皮层缝合后再次以 75%酒精棉球消毒创口，并经腹腔注射青霉素 20 万单位。10.模型评价：术后两周，进行模型成功与否的评估。每组随机抽取一只大鼠，首先进行肉眼观察，观察腹主动脉的扩张情况，并以游标卡尺测量腹主动脉直径的最大值，计算
8、扩张率，扩张率一般在 150%-200%。然后截取灌注段腹主动脉进行病理切片观察，病理改变为腹主动脉明显粘连，局部变硬，且明显扩张呈瘤样改变。腹主动脉中膜弹力组织严重受损，外膜炎性细胞浸润明显。出现上述表现和形态学变化的大鼠为 AAA 模型复制成功大鼠。11.关键技术及应注意的问题：11.1 肌层的切开，应沿腹白线切开，否则止血难度会增大。11.2 用纱布填塞的方法将肠管推向右侧腹腔时，要事先将纱布用生理盐水润湿，否则大鼠术后肠管非常易发生粘连，甚至梗阻。11.3 用棉签分离腹主动脉前壁及侧壁脂肪组织时，用力要轻，并且注意分布在脂肪组织中的细小血管分支，遇到细小分支应用电凝器熔断，不要轻易拉断这些小分支，以免造成不必要的麻烦。11.4 腹主动脉灌注段的封闭，尽量使不同的大鼠腹主动脉封闭长度相同（1cm） ，这样才能保证灌注程度是相同的。11.5 腰动脉和肠系膜下动脉血流的阻断，阻断这两条小动脉时，尽量不要熔断或结扎死，应以活结结扎，术后再重新打开恢复血流，以免造成大鼠双下肢瘫痪等手术后遗症。11.6 根据文献报道加之我们的实践，该模型的成功率与实验动物体内的雌激素水平关系较为密切，雌激素对腹主动脉瘤的成因具有一定的对抗作用。因此，雄性大鼠较雌性大鼠更易复制 AAA 模型；卵巢摘除后的雌性大鼠 AAA 成模率会大大提高。
