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1、1苦参方成分分析及配伍机制研究苦参方成分分析及配伍机制研究彭程，车慧，胡晋红* (第二军医大学长海医院药学部，上海 200433)摘要目的：对中医治疗过敏性皮肤病的传统方剂苦参方有效部位成分进行定性定量分析，研究方剂配伍对有效成份的影响。方法：采用 LC/MS、GC/MS 联用技术确定苦参方的有效成分；采用 HPLC 色谱法对苦参方生物碱含量进行定量分析，考察方剂配伍后的成分变化。结果：苦参方挥发油中的主要成分有：胡薄荷酮、薄荷酮等，所含苦参生物碱主要有苦参碱（Mat） 、氧化苦参碱（Omt） 、槐果碱（Sop） 、氧化槐果碱（Osp） ；苦参方的方剂配伍后有效成分发生了转化，氧化苦参碱部份转
2、化成苦参碱，氧化槐果碱部位转化为槐果碱，挥发油在配伍后成分及含量也有所变化。结论：确定了苦参方的有效成份及各成分的含量，明确了该方剂配伍后的成分改变。关键词苦参方；苦参；荆芥；苦参碱；氧化苦参碱；槐果碱；氧化槐果碱；挥发油；含量测定；配伍变化Composition Analysis And Transformation Mechanism Study Due To Compatibility Of The Recipe Of Kushen. PENG Cheng, HU Jin-hong*, ZHU Quan-gang , LIU Ji-yong, QIN Zhuo, GAO Li-hong,
3、 WANG Jing （Dept. of Pharmacy, Changhai Hospital, the Second Military Medical University, Shanghai 200433, China）ABSTRACT Objective：Qualitative and quantitative analysis for effective components in a traditional anti-anaphylaxis Chinese medicine of Kushen was established, and the contents change of
4、the active composition was testified, which was due to compatibility between Sophora flavescens Ait. and Schizonepeta tenuifolia Briq. Methods： The effective components were confirmed by LC/MS and GC/MS. HPLC was utilized to quantitate the alkaloids, so as to investigate the change of active composi
5、tions content. Results：The main components of Schizonepeta tenuifolia Briq. volatile oil were l- menthone and (+)-pulegone, etc.The alkaloids extracting from the recipe included matrine, oxymatrine, sophocarpine and oxysophocarpine. The content of alkaloids changed because of compatibility, oxymatri
6、ne transformed to matrine and oxysophocarpine transformed to sophocarpine partly, the ingredients and content of volatile oil were different before and after compatibility. Conclusion：The ingredients, content and transformation were identified, so the 基金项目：上海市科委中药现代化重大专项基金（04DZ19846） ；上海市卫生局科研课题基金（0
7、54099） ； 上海市科委基础研究重点项目（05JC14046） 作者简介：彭 程（1971） ，女，主管药师，硕士研究生。E-mail：。 *通讯作者：胡晋红2traditional recipe would be applied more definite, reasonable and scientific.KEY WORDS Recipe of Kushen；Sophora flavescens Ait.；Schizonepeta tenuifolia Briq.；Matrine；Oxymatrine；Sophocarpine； Oxysophocarpine；Volatile oi
8、l；Assay；Compatibility；Transformation苦参方由苦参、荆芥两味药组成，始见于太平惠民和剂局方 ，原方为治疗疥癣、湿疹和皮肤瘙痒的有效方剂。现代药理研究证明，苦参中苦参型生物碱和荆芥中荆芥挥发油均具有良好的调节免疫和抗过敏作用12。但长期以来，该方剂有效部位成分及含量未能明确，本研究采用多种分析手段，确定了该方剂有效部位的具体成分及含量，并证实了方剂中挥发油和生物碱在苦参与荆芥配伍后发生了成分的改变和转化，使这一中药传统方剂的含义更加明确、科学、合理。1 仪器和材料仪器和材料挥发油测定器（上海盛惠玻璃仪器厂） 、10AVP 高效液相色谱仪（日本岛津） 、1100
9、Series LC/MSD（美国 Aglient） 、6890N GC-5973N MSD（美国 Agilent） 。苦参、荆芥饮片（经第二军医大学长海医院药学部王忠壮教授鉴定符合中国药典2005 年版要求） ；苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110780-200402） ；氧化苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110805-200306） ；氧化槐果碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111652-200301） ；槐果碱纯品（含量98%，上海倍翔生物科技公司） ；甲醇（色谱纯，Sigma） ；乙腈(色谱纯，Merck)；乙醇（药用，上海永玖实业有限公司） ；其他试
10、剂为分析纯；水为重蒸水。2 方法方法2.1 苦参方有效部位的提取及样品制备苦参方有效部位的提取及样品制备称取苦参单味药或荆芥单味药或苦参、荆芥（重量比为 2:1）配伍，加入药材 8 倍量于药材的水，按 2005 年版中国药典的挥发油测定法（附录 XD） ，进行水蒸气蒸馏，收集挥发油，为淡黄色油状液体，得率为 0.6mL/100g（以荆芥饮片质量记） ，用于 GC/MS 检测。水提液过滤，60%乙醇醇沉过液以除去蛋白质及多糖等杂质，抽滤取上清；水蒸汽蒸馏后的药材残渣加 8 倍量的 60%的乙醇回流 33小时，提取 2 次，将提取液抽滤，所得滤液与醇沉液合并，浓缩回收乙醇，浓缩液用蒸馏水适当稀释，
11、5000 rpm 离心 10 min，过滤，得HPLC、LC/MS 待测样品。2.2 GC/MS 鉴定挥发油主要成份鉴定挥发油主要成份3气相色谱条件及质谱检测条件：色谱柱：HP-5MS 柱（29.8 m0.25 mm0.25 m，Agilent 19091J-433） ；柱温：初始温度 60 ，以 5min-1升至 250，恒温 10 min，载气：He（99.999%） ，恒流：1 mLmin-1，进样口温度 230，进样量：1 L，分流比 501，四极管温度 150，离子源温度：230，EI 源，电子能量：70 eV，接口温度 280。2.3 LC/MS 鉴定苦参方生物碱成分鉴定苦参方生物
12、碱成分液相色谱条件：色谱柱：Diamosal C18TM 柱（250 mm4.6 mm5 m） ；流动相:乙腈:水（甲酸调 pH 2.6）= 2:98；流速：1 mLmin-1，检测温度：25；检测波长：220 nm；进样量：20 L。质谱检测条件：电喷雾离子化（ESI）方式，检测离子为正离子，质量扫描范围 m/z 150500，传输/裂解电压为70 V。干燥气体（N2）流速：10 Lmin-1，雾化压力：40 psi。2.4 HPLC定量测定苦参生物碱定量测定苦参生物碱2.4.1 色谱条件色谱柱：Diamosal C18TM柱；流动相：乙腈:水（0.05%三乙胺，磷酸调pH 3.5） = 2
13、:984；流速：1.2 mLmin-1，检测温度：25；检测波长：220 nm；进样量：20 L。2.4.2 标准曲线的制备精密称取苦参碱（Mat） 、氧化苦参碱（Omt） 、槐果碱（Sop） 、氧化槐果碱（Osp）对照品适量，以蒸馏水制备含Mat、Omt、Sop、Osp各为200 gmL-1的储备液；精密量取0.5 mL、1.0 mL、2.5 mL、5.0 mL、10.0 mL、20.0 mL、30.0 mL、40.0 mL、50.0 mL贮备液用蒸馏水定容于100ml容量瓶中，得浓度范围为1100 gmL-1的Mat、Omt、Sop、Osp标准溶液。在上述色谱条件下，依次进样测定。以峰面积
14、（A）对浓度（C）作线性回归，得Mat的回归方程为：A= 11188C- 1871.6，r = 0.9999；Omt的回归方程为：A = 11167C+ 2459.6，r = 0.9999；Sop的回归方程为：A = 29409C - 29141，r = 0.9999；Osp的回归方程为：A= 25737C - 1901.7，r = 0.9999，四种生物碱在 1100 g mL-1浓度范围内，线性关系良好。最低检测限为10 ng mL-1（S/N3）。3 结果结果3.1 荆芥挥发油主要成分分析及配伍变化荆芥挥发油主要成分分析及配伍变化由 GC/MS 分析荆芥单味药、苦参方（苦参、荆芥两味药）
15、水蒸汽蒸馏法提取的挥发油成分，荆芥在与苦参配伍前后挥发油成分及各成份比例都有所改变，含量最高的成分为来自荆芥的薄荷酮、胡薄荷酮、右旋柠檬烯等5，苦参挥发油成份6所占比例较少。3.2 苦参方提取物生物碱成份分析及配伍变化苦参方提取物生物碱成份分析及配伍变化43.2.1 苦参方生物碱成份的确定苦参方提取物的 HPLC 色谱图显示其中主要含 4 种生物碱成分。经 LC/MS 分析，质谱图显示 4 个峰分别为苦参碱M+H+ 249.1、M+K+ 287.1；槐果碱M+H+ 247.1、M+K+ 285.1；氧化槐果碱M+H+ 263.1、M+K+ 301.1；氧化苦参碱M+H+ 265. 1、M+K+
16、 303.1。经标准品 HPLC 图谱对照，可确定四种苦参类生物碱成分为苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱、氧化槐果碱。3.2.2 苦参方配伍生物碱成分变化分析比较苦参单味药和苦参方（苦参和荆芥两味药）的提取样品 HPLC 色谱图，见图 1，并对各生物碱含量进行分析比较，结果见表 1，发现苦参与荆芥配伍后 Omt 和 Osp 成分明显减少，而 Mat 和 Sop 含量显著增加。图图 1：HPLC 色谱图色谱图 A：标准品；：标准品；B：苦参提取物；：苦参提取物；C：苦参荆芥提取物：苦参荆芥提取物 1：苦参碱；：苦参碱；2：槐果碱；：槐果碱；3：氧化槐果碱；：氧化槐果碱；4：氧化苦参碱。：氧化苦参碱。 Fig. 1 HPLC chromatogram. A: standard preparation, B: extract of Radix Sophorae
