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1、中医杂志2 0 0 6 年6 旦筮! ! 鲞塑型与对照组相比，食量分别提高2 8 5 7 、2 6 3 9 、2 2 0 3 ，消化率分别提高4 6 7 1 、2 7 3 1 。( 2 ) 显著提高小鼠的日增重( 特别是饲喂初期的日增重) 。服用本品j 天，高、中、低剂量组日增重比对照组分别提高8 3 8 4 、7 2 7 3 、2 8 2 8 ；服用本品1 0 天，高、中、低剂量组日增重比对照组分别提高5 0 o o 、4 1 2 5 、1 5 0 0 。( 3 ) 显著提高小鼠饲喂初期的食物利用率。在服用本品第5 天，高、中、低剂量组分别比对照组的食物利用率提高5 8 7 1 、5 5 4
2、 0 、2 6 7 1 ；在服用本品第l o 天，高、中、低剂量组的食物利用率分别比对照组提高3 1 。8 3 、2 7 5 7 、1 5 1 9 。灵芝药茶能显著提高小鼠的性功能。本试验表明，灵芝药茶不仅能显著缩短小鼠的交配潜伏期，并且能显著提高小鼠2 0 分钟内的交配次数。灵芝药茶能显著延长小鼠负重游泳的游泳时间，具有增强小鼠抗运动性疲劳的功能。灵芝药茶可以显著延长小鼠在缺氧条件下的存活时间，具有耐缺氧的作用。1 重庆市药物种植研究所( 4 0 8 4 3 5 )2 西南农业大学药用资源化学研究所石斛合剂对胰岛细胞活性的影响施红+杨秀珍。石斛合剂是由石斛等四味中药组成，该方降糖疗效稳定，病
3、情不易反复，且可预防、减轻糖尿病并发症。本实验观察了石斛合剂对胰岛细胞活性的影响，以进一步探讨其机理。1 材料与方法主要试剂：R P M I 一1 6 4 0 培养基( G i b c o 公司) ，V型胶原酶( S i g m a 公司) ，胎牛血清( F B S ，杭州四季青公司) ，优降糖( 中国医药研究院) ，核糖核酸酶A ( R N a s eA ，华美生物工程公司) ，碘化吡啶( P I ，S i g m a 公司) ， M T T 试剂( 美国B I C M O L 公司) ，双硫腙( S i g m a 公司) ，胰岛素放免测定试剂盒( 中国原子能科学研究院同位素研究所) ，S
4、 D 大鼠( 福建医科大学实验动物中心，闽字0 0 0 0 0 3 9 号) 。胰岛细胞的制备和培养：取出生1 周的S D 大鼠，脱颈椎处死，无菌取出胰腺，清除胰腺网膜、脂肪组织后，4C H a n k s 液中清洗3 次。于培养皿中，用眼科剪将胰腺剪成0 5 m m 3 大小组织碎块，加入l g I ，V 型胶原酶混匀，3 7 ，5 C O z 的培养箱中，消化1 5 分钟，至消化液浑浊时，终止消化，吸取上层消化浊液，剩余未消化组织补加消化液，继续消化1 0 分钟，收集两次消化浊液，2 0 0 目滤网过滤后，8 0 0 转分，离心5 分钟。弃去上清液，沉淀细胞加入含1 0 的胎牛血清的R P
5、 M I 一1 6 4 0 培养液，接种于5 0 m l 的培养瓶中。3 7 ，5 C 0 2的培养箱中进行培养2 4 小时后，转入新的培养瓶，用新鲜配制的2 5 p g m l 碘乙酸处理5 6 小时，继续培养7 1 4 天，细胞充分铺开形成良好的胰岛单层细胞( 图略) 。D T Z 染色显示，胰岛细胞占8 0 。石斛合剂含药血清的制备：石斛合剂各药按标准工艺制备成含生药量l g m l 。取正常S D 大鼠1 6 只，雌雄各半，体重( 1 2 0 + 1 0 ) g 。按体重随机分为正常组及给药组，每组4 只，给药组给予石斛合剂灌胃，正常组灌蒸馏水，上述每组按l m l 1 0 0 9 灌
6、胃，各组每天给药1次，第六天禁食后1 、3 、5 小时，无菌条件下腹主动脉取血，静置3 小时后，3 0 0 0 转分离心1 0 分钟，取上清液，同组混匀。分别将在末次灌胃后1 小时、3 小时、5小时采血所得血清用R P M I 一1 6 4 0 培养基配成5 、1 0 、2 0 的含药血清培养液。 M T T 法筛选最佳浓度：取第7 天生长良好的胰岛细胞，制成细胞悬液，接种于9 6 孔培养板中，分为1 1 组。用含l O 胎牛血清的培养液培养2 4 小时，使细胞同步化。吸去培养液，将各石斛合剂1 小时5 、1 0 、2 0 ，3 h5 、1 0 、2 0 ，5 h5 、1 0 、2 0 的含药
7、血清、5 n m o l L 优降糖及正常大鼠血清的培养液分别加入培养板内，每一组均接种8 孔。6 天后，加入5 m g m l 的M T T2 0 m l 孔，培养箱孵育4 小时后，吸去 上清液后，加入D M S O2 0 0 m l 孑L ，l O 分钟后于全自动酶标仪上以波长4 5 0 n m 测O D 值。F C M 检测胰岛细胞：取第7 天生长良好的胰岛细胞，制成细胞悬液，接种于3 个6 孑L 培养板中，1 0 胎牛血清培养液培养2 4 小时，使细胞同步化。然后，8 0 0转分，离心5 分钟，吸去培养上清液( 放射免疫法测定胰岛素含量) ，将5 小时1 0 的石斛合剂含药血清的培养液
8、、5 n m o l L 优降糖溶液及正常大鼠血清的培养液分别加入培养板内，每组均接种6 孔。待测细胞培养6 天后，8 0 0 转分，离心5 分钟，收集各孔培养上清液，放射免疫法测定胰岛素含量；H a n k s 液洗涤两次后，将预冷的7 0 乙醇沿壁缘滴入，4 固定2 4 小时后，吸弃乙醇后，用H a n k s 液洗涤两次后，加入1m g m lR N a s eA3 0m l ，3 7 恒温水浴锅中孵育3 0 分钟。再加入P l 染色液8 0 0 m l ，4 避光染色3 0 分钟，弃上清。加入l m lH a n k s 液，轻轻吹打。用流式细胞仪分析细胞周期。统计学方法：先行F 检验
9、，再行t 或t 检验，采用均数标准差( ；士s ) 表示；使用S P S S l l 5 软件包进行数据处理。2结果3 个采血时间点不同血清浓度的比较：结果显示，石斛合剂含药血清各采血时间点O D 值均高于空白对照组。其中，5 小时采血时间点的l o 的含药血清( ( 7 5 1 1 ) 组0 D 值最高，优于其它组( 尸0 0 5 ) 。因此，最佳采血时间点确定为末次灌胃后5 小时，而培养液中含药血清浓度确定为1 0 。3 组胰岛素含量的比较：加药前，空白对照组、石斛合剂含药血清组和优降糖组3 组培养液间胰岛素水平均无显著性差异( P 0 0 1 ) ；加药6 天后，3 组培养液间胰岛素水平
10、比较显示：石斛合剂含药血清组和西药优降糖阳性对照组两组间胰岛素的分泌量均比正常对照组高( 差异显著，P 0 0 5 ) 。结果提示石斛合剂有促进胰岛细胞增殖的作用，疗效与优降糖相当。3 讨论磺脲类降糖药优降糖，临床报道有明显的促胰岛素分泌的作用，进一步的研究表明，其促进胰岛紊的分泌，主要是与胰岛B 细胞膜上的特异性受体结合而发挥作用的，进一步的发展将耗竭胰岛细胞的贮备功能，进而导致胰岛细胞的凋亡，这可能优降糖继发失效的主要原因之一。本实验将临床上治疗糖尿病确有疗效的石斛合剂作用于体外培养的胰岛细胞后显示：( 1 ) 石斛合剂各含药血清能提高胰岛细胞的活性；( 2 ) 5 小时1 0 的含药血清
11、疗效最显著，与优降糖相当。因此，在后面的实验中，选用5 小时1 0 的含药血清，实验结果显示：石斛合剂含药血清能促进胰岛细胞增殖及胰岛素的分泌。据此推论，石斛合剂降低血糖的作用可能与其促进胰岛细胞( 主要是p 细胞) 增殖、调节内分泌激素的分泌有关，其细胞学基础可能是胰岛细胞的增殖。因而推设，中医药防治糖尿病可能通过促进胰岛细胞增殖、抑制凋亡，调节胰岛细胞内平衡来实现的，至于其促进细胞增殖的具体机制，在今后的实验中，将继续进行深入的研究。*福建中医学院中西医结合系( 3 5 0 0 0 3 )欢迎订阅中医杂志中医杂志( 月刊) 是由中华中医药学会和中国中医研究院联合主办的国家级中医药学术期刊。
12、创刊于1 9 5 5 年，是建国以后我国中医药界创刊最早、发行量最大、最具权威和影响的中医药学术刊物。特色栏目：( 1 ) 专家论坛：每期将约请有关专家就中医药学术发展的热点问题发表见解。( 2 ) 学术争鸣：将定期刊载内容选题广泛的争鸣文章，增加作者读者间的交流。( 3 ) 当代名医：主要介绍2 0 世纪9 0 年代以来由国家两部一局认定的名老中医的学术思想和经验。( 4 ) 医经研读：中国古代医学经典研讨。( 5 ) 海外中医：海外中医学者研究成果及发展信息。( 6 ) 验案采撷：中医临床疑难验案解析。( 7 ) 经验方荟萃：经方及个人验方的应用体会。( 8 ) 中医与写作：约请名家分析中
13、医科技论文的写作技巧。( 9 ) 理论探讨：内容为中医现代化研究、中医病证研究、中医现代医家的学术思想研究等。( 1 0 ) 针灸推拿：内容为针灸推拿临床经验总结、理论研究等。( 1 1 ) 临证心得：老中医经验或普通作者个人临床经验总结。( 1 2 ) 专题笔谈：除中药应用专题以外，将陆续推出中医病证专题、中医治法专题等。本刊全国各地邮局( 所) 均可订阅，邮局代号：2 6 9 8 ，2 0 0 6 年每册7 3 0 元。本刊地址：北京东直门内南小街1 6 号，邮编：1 0 0 7 0 0 ，电话：( 0 1 0 ) 6 4 0 3 5 6 3 2 。稿件查询电话：( 0 1 0 ) 6 4 0 1 4 4 1 1 转3 0 3 6 。中医杂志( 英文版) 为季刊，本刊自办发行，每册2 2 0 0 元，欢迎订阅。
