《凯特与新世纪杏及其F1代杂种自交亲和与不亲和性差异的分子机理研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《凯特与新世纪杏及其F1代杂种自交亲和与不亲和性差异的分子机理研究（100页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、山东农业大学博士学位论文凯特与新世纪杏及其F代杂种自交亲和与不亲和性差异的分 子机理研究姓名：冯建荣申请学位级别：博士专业：果树学指导教师：陈学森;束怀瑞20060601符号及缩略词表A C P ：a f t e rc r o s s - p o l l i n a t i o n ，异花授粉后A P ：A m m o n i u mp e r s u l f a t e 过硫酸胺A R C ：a r mr e p e a t - c o n t a i n i n gp r o t e i n ，臂包含重复蛋白A S P C R ：a l l e l es p e c i f i cp o
2、l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n ，等位基因特异聚合酶链式反应A S P ：a f t e rs e l f - p o l l i n a t i o n ，自花授粉后B A ：b e f o r ea n t h e s i s ，开花前B B ：b r o m o p h e n o lb l u e ，苯氨蓝B S ：a tb a l l o o ns t a g e ，气球期C H A P S ：3 - ( 3 - c h l o a m i d o p r o p l ) d i m e t h y l a m m o n i o -
3、1 一p r o p a n e s u l f o n a t e ，乙醇胺丙基二甲氨基丙磺酸盐D E P C ：d i e t h y lp y r o c a r b o n a t e 焦炭酸二乙酯D N A ：D e o x y 曲o n u c l e i ca c i d ，脱氧核糖核酸D T T ：d i t h i o t h r e i t o l ，二硫苏糖醇E B ：E t h i d i u mb r o m i d e ，溴化乙锭F Q R T - P C R ：f l u o r e s c e n c eq u a n t i f i c a t i o nr
4、e v e r s et r a n s c r i p tP C R ，荧光定量反转录聚合酶链式反应G S I ：g a m e t o p h y t i cs e l f - i n c o m p a t i b i l i t y , 配子体自交不亲和性1 2 0 K ：1 2 0 K D ag l y c o p r o t e i n ，1 2 0 K D a 的糖基化蛋白H T ：s m a l la s p a r a g i n e s r i c hp r o t e i n ，小的富含精氨酸蛋白I A M ：i o d o a c e t a m i d e ，碘代乙酰
5、胺I E F ：i s o e l e c t r i cf o c u s i n ge l e c t r o p h o r e s i s ，等电聚焦电泳L C - E S I M S M S ：l i q u i dc h r o m a t o g r a p h y - e l e c l r o s p r a yi o nt r a pt a n d e mm a s ss p e c t J o m e t r y , 液相色谱电喷雾离子肼串联质谱M L P K ：Ml o c u sp r o t e i nk i n a s e ，M 位点蛋白激酶P C P ：p i
6、s t i l s p e c i f i cc a l c i u m b i n d i n gp r o t e i n ，雌蕊特异钙结合蛋白P C R ：P o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n ，聚合酶链式反应P E L P1 I I ：p i s t i l s p e c i f i ce x t e n s i o n - l i k ep r o t e i n sI I I ，雌蕊特异的类伸展蛋白P I P ：p l a s m a - m e m b r a n e i n t r i n s i c p r o t e i
7、n ，质膜内生蛋白P M S F ：P h e n y l m e t h y lS u l f o n y lF l u o r i d e ，苯甲基磺酰氟P R 5 ：p a t h o g e n e s i s r e l a t e dp r o t e i n 5 ，抗病相关蛋白5P R P ：p r o l i n e - r i c hp r o t e i n ，富含脯氨酸蛋白P s T L ：P y r u ss e r o t i n at h a u m a t i n l i k ep r o t e i n ，梨类甜味蛋白P V P ：P l 乜，、r i n y
8、p y r r o t i d o n e ，聚乙烯吡咯烷酮R e a l - t i m eF Q P C R ：R e a l - t i m ef l u o r e s c e n c eq u a n t i f i c a t i o nP C R ，实时荧光定量P C RR N A ：R i b o n u c l e i ca c i d ，核糖核酸R T - P C R ：r e v e r s et r a n s c r i p tP o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n ，反转录聚合酶链式反应S C ：S e l fc o
9、m p a t i b i l i t y , 自交亲和性S C R S P l1 ：S - l o c u sc y s t e i n e - r i c hp r o t e i n ，S - 位点富含色氨酸蛋白S F B ：S - l o c u sF ，B o xp r o t e i n ，S - 位点含F B o x 蛋自S I ：S e l f i n c o m p a t i b i l i t y , 自交不亲和性S L F ：S - l o c u sF B o xp r o t e i n ，S - 位点含F B o x 蛋白S L G ：Sl o c u sg l
10、y c o p r o t e i n ，S - 位点糖基化蛋白S R K ：S - l o c u sr e c e p t o rk i n a s e ，S - 位点受体激酶S S I ：s p o r o p h y t i cs e l f - i n c o m p a t i b i l i t y , 孢子体自交不亲和性S S P ：Sl o c u sl i n k e dp r o t e i n ，S 位点连锁蛋白T A E ：T f i s H C I a c e t i ca c i d - - E D T Ab u f f e r T d s 一乙酸E D T A
11、缓冲液T B E ：T r i s B o r i ca c i d E D T Ab u f f e r ，“ I r i s 硼酸E D T A 缓冲液T E ：T f i s H C l - - E D T Ab u f f e r , T r i s E D T A 缓冲液T E M E D ：N ，N ，N ，N - t e t r a m e t h y l e t h y l e n e d i a m i n e ，N ，N ，N ，N 四甲基已二胺T F A ：t r i f l o u r o a c e t i ca c i d ，三氟乙酸2 - D E ：T w o d
12、 i m e n s i o n a lg e le l e c t r o p h o r e s i s ，双向凝胶电泳关于学位论文原创性和使用授权的声明本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所取得的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人或集体，均在文中明确说明。本声明的法律责任由本人承担。本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定，同意学校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论
13、文。保密论文在解密后应遵守此规定。论文作者签名：。二鱼鳞导师签名：日期：鲻丝堑：f 山东农业大学博士学位论文中文摘要本文为研究杏自交不亲和性强度差异的机理，以自交亲和( S e l f - c o m p a t i b i l i t y ：S C )品种凯特( P r u n u s a r m e n i a c a L C V K a t y ) 与自交不亲和( S e l f - i n c o m p a t i b i l i t y ：S I ) 品种新世纪( P r u n u sa r m e n i a c aL C V X i n s h i j i ) 及其杂交F 1
14、 代部分杂种为试材，从生理及S - R N a s e基因D N A 、R N A 和蛋白水平比较了自交亲和与自交不亲和两种类型差异：对自交亲和和不亲和性杂种后代授粉后花柱蛋白质组进行了比较研究。主要研究结果如下：1 授粉后初期，凯特与新世纪的花粉都能正常萌发、生长，但是在花粉管生长延伸到花柱1 2 以后，凯特的花粉管能顺利进入子房，而新世纪的花粉管多数停止向下生长，并发现有花粉管顶端膨大现象，只有极个别能正常生长到达子房；花粉管生长速度受外界环境温度影响较大，在活体中花粉从柱头萌发到花粉管进入子房，时间可以从2 4 7 2h不等，生长速度越快，不亲和花粉管在花柱中生长受抑制程度越弱。2 检测
15、出三个新的S - R N a s e 基因片段，余名为P a 品( 来自凯特) 、P a 岛与户盘口( 来自新世纪) ，已经在G e n B a n k 中注册( 注册号分别为：A Y 8 6 4 8 2 6 、A Y 8 6 4 8 2 5 、A Y 8 8 4 2 1 2 、A Y 8 5 3 5 9 4 、A Y 8 4 6 8 7 2 ) ；进一步对3 个S R N a s e 基因的D N A 和其相应的c D N A 序列进行比对，发现在第二、第三保守区之间的高变区中，存在有一段内含子jS 8 、S 9 、S l o基因的内含子长度分别为4 0 6 b p 、4 7 1 b p 、
16、1 0 4 b p ：结合G e n B a n k 中B l a s t 的结果，对蔷薇科李属( R o s a c e a eP r u n u s ) 果树5 5 个S - R N a s e 基因构建系统进化树，显示李属果树S - R N a s e 基因的种内相似性并不高于种问相似性。3 凯特和新世纪中S 。基因的m R N A 在气球期花柱中都表达：自交亲和与白交不亲和杏的S - R N a s e 基因在授粉前后的发育进程中不仅表达模式不同，而且在决定亲和性的关键时期即授粉后2 4h 存在表达量的明显差异，新世纪中表达丰度比凯特明显要高；在带柱头的花柱上部、花柱下部及子房各部位中，S - R N a s e 的表达分布不均匀，以花柱上部表达量最丰富；异花授粉后S - R N a s e 基因表达维持在较高水平不继续下调，而自花授粉与不授粉的表达模式无明显差异，均显示持续下降趋势。4 检测没有发现凯特新世纪F l 代杂种的S - R N a s e 基因出现任何形式的碱
