《2017高中生物微生物的培养与应用2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课件1新人教版选修12017082346》由会员分享，可在线阅读，更多相关《2017高中生物微生物的培养与应用2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课件1新人教版选修12017082346（19页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、专题2 微生物的培养与应用【课题目标课题目标】 研究培养基对微生物的选择作用，进行微 生物数量的测定。 【研究对象研究对象】土壤中能分解尿素的细菌【达到目的达到目的】（1）从土壤中分离出能够分解尿素的细菌（2）统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌课题背景尿素是一种重要的农业氮肥。但是尿素并不 能直接被农作物吸收。只有当土壤中的细 菌将尿素分解成氮之后，才能被植物利用 。土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因 为它们能合成脲酶。尿素最初是从人的尿液中发现的。1828年，德国化学家维勒成功地通过无机 物的化学反映合成了尿素，揭开了历史上 人工合成有机物的新篇章。尿素课题2 土壤中分解尿素的细菌的分
2、离与计数【研究思路研究思路】 （一）筛选菌株 原理 ： 人为提供有利于目的菌株生长的人为提供有利于目的菌株生长的 条件（包括营养、温度、条件（包括营养、温度、PHPH等）等） ，同时抑制或阻止其他微生物生，同时抑制或阻止其他微生物生 长。长。有选择作用，回答：回答：1 1、在该配方中，为微生、在该配方中，为微生 物生长提供碳源和氮源的物生长提供碳源和氮源的 是什么物质？是什么物质？2 2、绝大多数的微生物都、绝大多数的微生物都 能利用葡萄糖，但是，只能利用葡萄糖，但是，只 有能合成脲酶的微生物才有能合成脲酶的微生物才 能分解尿素，请分析该培能分解尿素，请分析该培 养基是否对微生物有选择养基是否
3、对微生物有选择 作用？如果有，是如何进作用？如果有，是如何进 行选择的？行选择的？葡萄糖、尿素葡萄糖、尿素选择培养基：选择培养基：在微生物学中，将允许在微生物学中，将允许 特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止 其他种类微生物生长的培养基。其他种类微生物生长的培养基。【统计菌落数目统计菌落数目】常用方法：稀释涂布平板法、显微镜 直接计数法， 还可以用过滤膜法1 1、稀释涂布平板法（也叫活菌计数法、稀释涂布平板法（也叫活菌计数法 ） 原理原理：当样品的稀释度足够高时，培养基 表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液 中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数 ，就能推测出
4、样品中大约含有多少活菌。为了保证结果的准确，一般选择菌落数在30300的平板进 行计数，若设置的重复组中结果相差太远，意味着操作有误 ，需重新实验。计算公式计算公式：每克样品中的菌落数每克样品中的菌落数= =（某一稀释度下平板上生长的平均菌落（某一稀释度下平板上生长的平均菌落 数涂布平板所用稀释液体积）数涂布平板所用稀释液体积）稀释倍数稀释倍数设置重复组，目的是增强实验的说服力与准确性。将待测样 品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取 0.1ml接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂 布在整个平板表面，放在适宜的温度下培养计数菌落数。为是 结果接近真实值，可将同一稀释
5、度菌液加到三个或三个以上的 平板上，经涂布培养，计算出菌落平均数操作操作2、显微镜直接计数法（1）原理：此法利用特定细菌计数板或血细 胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品 中微生物数量。（2）方法：用计数板计数。计数板是特制的 载玻片，其上有特定的面积为1mm2，高为 0.1mm的计数室，一个计数室又被分成25个（ 或16个）中格，每个中格再被分成16个（或 25个）小格，每个计数室都由400个小格组成 。 （3）操作：将稀释的样品滴在计数板上， 盖上盖玻片，然后在显微镜下计数45个中 格中的细菌数，并求出每个小格所含的细 菌数，再按计数公式求出每毫升样品中所 含的细菌数。 （4）计算公式
6、每毫升原液所含细菌数=每小格平均细菌数 X400X10000X稀释倍数 （5）缺点：不能区分死菌与活菌。3过滤膜法以测定饮用水中大肠杆菌的数目 为例。将已知体积的水过滤后， 将滤膜放在伊红美蓝培养液基上 培养。在该培养基上，大肠杆菌 的菌落呈现黑色。可以根据培养 基上黑色菌落的数目，计算出水 样中大肠杆菌的数量。1.想一想，如何从平板上的菌落数推测出 每克样品中的菌落数？答：统计某一稀释度下平板上的菌落数， 最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平 均值，然后按课本旁栏的公式进行计算。A同学的结果与其他同学不同，可能 的解释有两种。一是由于土样不同； 二是由于培养基污染或操作失误。（三）设置对
7、照究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。另一种方案：将A同学配制的培养基在不加土样的情况 下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是 否受到污染。通过这个事例可以看出，实验结 果要有说服力，对照的设置是必不可少的。实验方案有两种一种方案：可以由其他同学用与A同学一样的土样进 行实验，如果结果与A同学一致，则证明A无 误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失 误或培养基的配制有问题。四、实验案例 实验的具体操作步骤如下:1.土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先 铲去表层土3 cm左右，再取样，将 样品装入事先准备好的信封中。土壤中某样品细菌的分离与计数2.设置重复组，目的是增强实验的说服力 与准确
8、性。将待测样品经一系列10倍稀释 ，然后选择三个稀释度的菌液，分别取 0.1ml接种到已制备好的平板上，然后用 无菌涂布器将菌液涂布在整个平板表面， 放在适宜的温度下培养计数菌落数。为是 结果接近真实值，可将同一稀释度菌液加 到三个或三个以上的平板上，经涂布培养 ，计算出菌落平均数计算公式计算公式：每克样品中的菌落数每克样品中的菌落数= =（某一稀释度下平（某一稀释度下平 板上生长的平均菌落数涂布平板所用稀板上生长的平均菌落数涂布平板所用稀 释液体积）释液体积）稀释倍数稀释倍数3.为了保证结果的准确，一般选择菌落 数在30300的平板进行计数，若设置的 重复组中结果相差太远，意味着操作有 误，需重新实验。
