《益骨胶囊含药血清在共育体系中对成骨细胞凋亡的影响》由会员分享，可在线阅读，更多相关《益骨胶囊含药血清在共育体系中对成骨细胞凋亡的影响（4页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、笙丛盗全望主堕垦竺鱼垒垩兰耋兰墨堂兰查型堕皇堡塞叁! ! !喜的j 殳采。本研究组自1 9 9 9 年起以3 T 3 - L t 脂肪细胞株、BT C 3 细胞( 胰岛B 细胞株) 和H e p G 2 细胞( 人肝癌细胞株)为模型，在已经明确小檗碱对H e p C 2 细胞和3 T 3 一L I 脂肪细胞株糖代谢具有调节作用的工作基础上“”，研究发现大黄索能明显增加胰岛蘩非敏瘪细胞( 3 T 3 一L 1 前脂肪细胞) 和胰岛素敏感细胞( 诱导分化的3 T 3 一L 1 脂肪细胞) 的葡萄糖消耗置；用2 - D e o x y - 一D - g l u c o s e 掺入法发现大黄素能显著
2、增加这两种细胞的葡萄糖转运t 其作用类似二甲双胍而区别于胰岛素和罗格列酮与此同时我们也注意到张崇本等的研究，他们发现大黄素对3 T 3 - - L I 小鼠前脂肪细胞向脂肪细胞的分化以及对脂肪酸台成酶活性有剂量依赖性抑制作用提示大黄素可能具有潜在的减肥、降脂作用大黄豢对前腊肪细胞和脂舫细胞的葡萄糖消耗耜转运均有促进作用，前脂肪细胞主要依赖G l u t 转运强萄糖，而脂肪细胞主要依赖G l u t 4 进行转运说明大黄素对糖代谢的调节可能与G l u tl 有关，也可能直接作用与G l u t 4 的转位。2 型祷尿病与肥胖高度相关但是联系耱尿病与肥脖的确切分子机制仍不十分明了。S t e p
3、 p a n 等用T Z D s 处理的脂肪细胞与正常脂肪细胞转录潜差异显示筛选法首次报道了一种脂肪细胞来源的新激素“抵抗索R e s i s t i n ”，可能作为肥儿串与j 波岛豢抵抗( I R ) 联系的中介参与I R 的发生“1 胰岛素增敏剂噻唑烷二酮类( T Z D s ) 通过脂肪细胞中丰富的过氧化物酶体增殖物檄活受体y ( P P A RY ) ，降低抵抗紊m 刖A 的表达，改善靶缃胞胰岛紊敏感性。抵抗索的发现为2 型糖屎病的治疗提供了一个新的靶点我们的实验结果裘明，大黄素显著降低r e s i s t i n 基因的表达可能由此提高机体的胰岛素敏感性参考文献 1 Z h a
4、n gC ，T e n gL ，S h iLe ta 1 E f f e c to fe m o d i no np r o l i f e r a t l o na n dd i f f e r e n t i a t i o no f3 T 3 - L Ip r e a d i p o c y t ea n dF A Sa c t i v i t y C h i nM e dJ ( E n 9 1 ) 2 0 0 2J u l ：1 1 6 ( 7 ) ：1 0 3 5 8【2 M a c D o u g a l d0 A L a n eM D T r a n s c r i p t i
5、o n a lr e g u l a t i o no fg e n ee x p r e s s i o nd u r i n ga d i p o c y t ed i f f e r e n t i a t i o n A n n uR e vB i o c h e m1 9 9 5 ：6 4 ：3 4 5 7 3 3 E D ，R o s e n M o l e c u l a rm e c h a n i s m so fa d i p o c y t ed i f f e r e n t i a t i o n A n nE n d o c r i n o l2 0 0 2 ，6
6、3 ：7 9 - 8 2C 4 L u oJ F o r t 诫C a r l s o nT J N o a m e s iB K ，e ta 1 C r y p t o l e p i ss a n g u i n o l e n t a ：a ne t h n o b o t a n i c a la p p r o a c ht od r u gd i s c o v e r ya n dt h ei s o l a t i o no fap o t e n t i a l l yu s e f u la e wa n t i h y p e r g l y c a e i ca g e
7、 n t D i a b e tM e d1 9 9 8 ：1 5 ( 5 ) ：3 6 7 - 7 4 5 高雅萍，焦东海王梅莉等大黄提取片对单纯性肥胖大鼠高胰岛豢血症的 6 作用中国实验方剂学杂志2 0 0 28 ( 6 ) c3 2 7 - - n 7 Y i nJ ，H uR ，C h e aM e ta 1 E f f e c t so fb e r h e r i n eo ng l u c o s em e t a b o l i s mi av i t r oM e t a b o l i s m2 0 0 25 l ( 1 1 ) ：1 4 3 9 - 4 3 8 小桨碱对脂
8、肪细胞糖代谢的影响周龋斌扬颖陈名道等，上海第二医科大学学报2 0 0 2 5 ：4 1 2 - - 4 1 4c 9 S t e p p a nC M 。L a z a r 姒R e s i s t i na n do b e s i t y - a m m o s i a t e di n s u l i nr e s i s t a n s e T r e n d sE n d o c r i n o lM e t a b 2 0 0 2 ：1 3 ( 1 ) ：1 8 2 3 益骨胶囊含药血清在共育体系中对成骨细胞凋亡的影响暨南大学附属第一医院暨南大学药学院( 5 10 6 3 2 )傅
9、淑平张荣华徐立群有研究显示O B 数置减少或O B 捌亡进程加速，使骨形成少于骨吸收可导致骨质疏松的发生。T N F 一口作为一种强有力的破骨吸收因子在去势丈艘或绝经后骨质琉捡患考骨组织中呈赢表达；在体外可刺激O B 捌亡“I 。因此我们根据文献。“设计了更符合骨代谢微环境的平面式的成骨一破骨细胞共育体系，观察T N F a 对成骨一破骨细胞共育! ! !堡垒姿全璺主翌垦笙鱼塞至兰耋兰垦兰兰查! 旦立墨堕苎壅一体系中( 0 8 ) 凋亡的影响及盏骨腔囊含药血清对其的保护作用。1 材料和方法1 1 材料11 1 实验动物清洁级1 0 月龄雌性S D 大鼠2 0 只，体重3 8 4 7 5 - -
10、 - - 4 8 5 9 5 9 由广东省动物实验中心提供，台格证孕：2 0 0 3 A 0 1 3 。普通级1 日龄S p r a n g e D a w l e y ( s D ) 新生大鼠和5 日龄s D 新生大鼠，由南方医科大学实验动物中心提供，台格证号：2 0 0 3 8 0 2 9 1 1 2 实验药物参照益骨胶囊制各工艺，取淫羊藿、当归等7 味中药免煎颗粒( 由深圳三九医药股份有限公司提供) 溶于1 5 2 0 倍燕馏水中然后离心弃去沉淀，上清液浓缩至2 ：h 加等体积9 5 7 , 醇t 并搅拌提匀。4冷藏静置4 8 小时，以4 5 0 0 r p m 速度离心1 5 m i
11、n ，取上清，然后再一次A n9 5 E 醇入沉淀物；冷藏静暨一夜，击沉淀，离心赶滤，游液与上一次乙醇滤液合并，浓缩( 挥去乙醇) 并进一步浓缩至每毫升台相当于8g 原生药的药液( 浓稠度接近流浸膏) 。1 1 3 主要试；f I 嘶E l I 培养基( G i b c o ) ，胎牛血清( 杭州曲季青) 0 2 5 胰酶( H y c l o n e ) ，I i 型胶原酶( I n v i t o g e n ) ，吖啶橙( S i g m a ) t N 卜O f ( R O C K YH i l ”，碘化丙啶( S i g m a ) ，E B ( 上海申能博彩有限公司) 。动物细胞凋
12、亡梯子提取试剂盒( 北京鼎国生物技术有限公司) ，1 ，1 4 主要仪器c Q 培养箱( S I i E L I 土E ) 超挣工作台( 苏州净化设备有限公司 倒鬣相差显徽镜( 重庆光学仪器厂) 培养板( C o s t a r ) ，穆压稳流电泳仪( 上海医用分析仪器厂) - 高速台式离心机( 上海安婷科学仪器厂) 。凝酸成像系统( S y e g e n e ) 。流式细胞仪( B E C K t 5 A N - C O U L T E R ) ，倒置荧光显微镜( L e i c a ) 。1 2 方法1 2 1 成骨细胞的分离与培养参照文献1 2 2 破骨细胞的分离与培养参照文献”1 2
13、 3 大鼠血清的制各参照文献“11 2 ，4 成骨一破骨细胞共育体系的建立参照文献将6 孔细胞培养扳进行改造，在距孔底3 胁处打一直径约6 锄的通道孔，然后将太小适中的中0 ，4 5p m 的微孔膜置于培养板问隔问，将培养扳分成0 B 培养室与o c 培养皇，并用吸管吸取已融化的质量分数为3 的琼脂凝胶，滴于隔膜与培养板接触处，使之固定并密封-I 2 5T N F - O f 添加量及诱导时问的确定取第二代o B 以2 l 旷个孔的密度接种于6 孔共育培莽板的0 B 培养室3 h 后，待0 B 已贴壁将新分离的0 c 以2 X1 0 5 个孔密度按种于0 c 培养室：特细胞周期同步化后，加入D
14、 I I 聃完全培养基3 7 C 5 仉适宜湿度下培养7 2 h ，当细胞相互措连铺满孔底后。弃去培养液，P B S 洗2 次，换入无血清培养基。井加入T N F 一口馒其终浓度分别为2 0n g m l 、3 0n g m 1 、4 0n g m l 、5 0n g m l 、6 0n g m l ，分别于培养l d 、2 d 、7 2 h 后，弃去上清，0 2 5 胰酶消化0 B ，制成细胞悬液并计数收集5 x 1 0 6 或以上的，用动物细胞揭亡试剂盒提取D N A 并徽渊A 电泳以观察其弱亡情况并根据其结果确定后续实验中o B 蠲亡的最佳诱导方案1 26 荧光显徽镜观察将0 B 与0
15、c 按上述方法接种培养。待细胞周期同步化后，将细胞分为凋亡组、禽药纽、空白组和正常组，分别加入喇酬培养液、2 5 含药血清培养液、2 5 空白血清培养液、D M E M 培养液培养7 2 h ，随后加入T N 尸- 口按最佳诱导方案诱导0 B 商亡后，弃圭上清渡P B S 洗2 次。进行吖啶橙( A o ) 染色“1 ，用激发滤片B G - 1 2 ：阻断滤片波长5 1 5 n m 荧光显微镜下观察井掇相。1 2 7 凋亡细胞D N A 电泳将0 B 与0 c 按上述实验分组进行培养，并加入T N F 一口诱导0 B 强亡后，弃去上漶液P B s 洗2 次，0 2 礴胰酶消化0 B 制成细脆悬
16、液并计数，收集5 l 旷或以上的0 B ，用动物细胞凋亡试剂盒提取D N A 进行D N A 凝胶电泳分析。印染色以观察各实验组中D N A 电泳条带的改变，并摄相1 ，28 流式细施倥检最j 按上述实验分组方法培养细胞，并加入T N F - 口诱导0 B 凋亡后。弃去上清液。P B S洗2 次，0 2 5 胰酶消化0 B 。制成细胞悬液并计数，收集( 1 - 5 ) 1 0 O B 用预冷的7 5 乙醇固定1 h 后，1 0 0 0 r m p ，l O m i n 离心弃去固定液。并用P B S 清洗两次，弃击上清加入3 0 0 u lP I 染液( 内宙P I1 0 0ug m l 和R N A 酶2 0 单位m 1 ) ，室湿3 0 m i n
