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1、V E G F 注射在闭塞的血管周围肌肉内发现可生成密如织网的细小血管，替代闭塞的血管承担供血功能，实现血液循环。相信这一技术具有广阔的临床应用前景。3 2 病毒刘玉成在研究I I 型糖尿病病人血管病变与人巨细胞病毒感染的关系时发现：I I 型糖尿病患者活动性感染率明显提高，可能与机体抵抗力降低易感性增高，提示I I 型糖尿病人体内存在活动性人巨细胞病毒感染，其血管病变特别是大血管病变的发生与活动性人巨细胞病毒感染有关。 3 3 微血管病变微血管病变是在持续高血 糖作用下，体内糖化蛋白合成加速并沉积在微血管壁上，以及免疫复合物对血管内皮细胞的损伤等，使微血管通透性增加。基底膜增厚，内皮细胞增生
2、，导致微血管管径缩小，内膜租糙，体液渗透压增高，血管弹力和收缩力降低，从而使血流通过不畅，血液粘度性增高，红细胞聚集，血小板粘附和聚集在内皮损伤处，最后微血栓形成和或微血管闭塞，称之为“血栓性微血管病”。 3 4 生物力学改变一项前瞻性研究显示，足底静E 压 1 2 3 k g c m 2 ( 用婴儿体重计目测) 者，有3 3 发生足底溃疡；而 1 2 3 k g c m 2 者无一例发生溃疡。糖尿病病人足压增加的原因有：体重增加，骨及结缔组织的结构改变，关节活动受限，皮肤改变，体态和步态发生变化。足压增加者常伴有骨畸 形。有报道认为多达一半的糖尿病病人有“杵锤”足或“鹰爪足”畸形。都是由运动
3、神经病变引起的骨间肌和蚓状肌萎缩所致，可造成顽固性趾过伸。这种过伸畸形使跖骨头承受的足压增大，因此导致溃疡的发生率增加，特别是第一跖骨头和拇趾的掌面，大约占所有溃疡的5 0 。A n s t r o n g 等根据3 6 0例糖尿病伴足溃疡患者总结了足溃疡发生部位的频率为：拇趾掌面，占3 0 ；第一跖骨头掌面，占2 2 ；各趾背面，占1 3 ；2 - 5 趾掌面，占1 0 ；第五趾关节掌面，占9 ：第二跖趾掌面，占6 ；足底中部外侧缘，占4 ：第三及第四跖趾关节掌面分别占2 ，跟底占1 。因此国外已经开始研究为糖尿病足患者和有糖尿病足危险性的患者根据患者的情况定制治疗鞋子，以减轻患者足底的压力
4、，减少足坏疽的发生危险因素。实践证明，治疗性鞋子能有效的预防高危人群足溃疡的发生率，但这种鞋均需按足订做，价格昂贵，广泛推广有很大困难。 4 结语为提高对该病的预防和治疗水平，掌握内科、外科等各学科的知识是十分重要的，并且需要基础研究者和临床工作者共同努力，不断深入地研究，提高对该病的防治水平，降低病死率、致残率，提高治愈率。生肌液体外诱导成纤维细胞成骨作用的研究天津市天津医院骨研所( 3 0 0 2 I I )李秀兰张杨王增立师宜健本研究旨在对外用中药生肌膏的基础和临床研究成果的基础上，研究生肌膏提取液对诱导F B 向成骨方向分化以及表型表达，探讨F B 成骨的诱发机制。为体外获得大量的成骨
5、表型细胞提供依据。方法：从家兔肉芽组织分离F B ，选传代培养第3 代细胞作无血清培养；在培养瓶中加入条件培养液D M 肼培养液( 1 0 胎牛血清，生肌液2 0 、4 0 、6 0 、8 0 、1 2 0 m g m l ，纤维结合蛋白1 0 、2 0 、4 0 、6 0 u g m l ，青霉素l O O u m 1 链霉素l O O u g m 1 ) ，置3 7 、5 C 0 2培养箱连续培养2 周，每3 天换条件培养液一次，对照组仅加无血清培养液。观察细胞形态，四环素荧光标记检测钙化结节形成，啊一T D R 标记检测细胞增殖，”5 I 标记检测骨钙素分泌，3 l 一脯氨酸标记检测胶原
6、形成。实验结果显示：1 F B 增殖：体外培养F B 在诱导因素的作用下，3 H - T d R 掺入量明显提高，生肌液4 0 6 0 m g m l ，F N 2 0 - 4 0u g m l 组，胞内D N A 合成量最多，与对照组比较有显著性差异。2 显微变化：传代培养的F B 2 小时开始贴壁，2 4 小时全部贴壁生长并伸出生长突。非条件培养液培养的细胞呈梭形，3 天铺满瓶底指纹状排列明显，随着培养时间延长增殖速度减弱并有膜片状脱落，至2 周时无明显结节形成。F N 4 0 u g m l 条件培养液，F B 增殖活跃，核分裂相明显，核仁清晰，细胞亦呈指纹状排列并2 7形成多层结构，细
7、胞表面有云雾状物形成：随着培养时间延长云雾状集落最多，2 周收获时未见不透 光结节。含6 0 m g m l 生肌液条件培养液组F B 分裂增殖旺盛，出现多突形和圆形细胞，细胞内外可见 大量分泌颗粒，3 天时F B 呈多层结构，至培养5 天时多层细胞出现云雾状物，随时间延长云雾状集落体积增大、密度加深，逐渐形成不透光黑色结节，随后结节相互连接形成小梁样结构。3 趋骨性四环素荧光标记：经趋骨性四环素标记，黑色不透光结节和小梁样结构呈明亮的金黄色强荧光。表明金黄 色荧光的结节及结节问的连接条状物是新生骨组纵。4 骨钙素分泌量变化：条件培养液组F B 分泌的骨钙素水平明显高于非条件培养液组，且随培养
8、时问延长骨钙素分泌升高，生肌液与F N 组比较亦有显著差异。5 胶原分泌变化：3 H _ 脯氨酸掺入F B 胶原 合成过程，其c p m 数代表F B 胶原合成量。观察F N和生肌液，3 天时合成胶原能力明显提高，与对照组比较呈显著差异。条件培养液组间比较亦有显著差异。小结：本文以生肌膏提取液和F N 作为诱导剂，观察对创面肉芽组织中F B 的成骨作用，发现生肌液 和F N 可促进F B 增殖，生肌液可使增殖的F 8 由长梭形向多角形和圆形演变。合成和分泌蛋白质功能增强，细胞外基质中胶原纤维由杂乱排列趋于定向排列，与细胞一起形成重叠交织的多层结构在其表面钙颗粒、基质小泡及分泌的胶原物质聚集形成
9、云雾状结晶，并不断融合扩大、密度加深成为黑色结节。经组织化学显示结晶内含有骨性成分，趋骨性 四环素荧光标记证实为新生的骨组织。而州组不能形成骨结节。培养上清中骨钙素水平明显高于对照组和F N 组，胞内胶原分泌活性亦同于骨钙素。因此，生肌膏加速感染性开放骨折修复与诱导成纤维细胞成骨有关。但F B 向成骨型细胞定向分化是一个极其复杂的调控体系，它的触发机制是其中的关键。生肌膏可能是一个重要的触发因素，其触发机制尚待深入研究。偎脓长肉“ 促进感染创面修复作用机制的研究天津市天津医院骨研所( 3 0 0 2 1 1 )李秀兰师宜健徐尔真张杨目的探讨外用中药“偎脓长肉”作用之脓的 米源，脓液的细胞成分和
10、活性物质，以及脓液中的细胞因子对创面修复的调节作用。研究“偎脓长肉”作用的实质及其对感染创面修复的促进作用。方法采用先进的细胞、免疫、生化和分子生物学实验技术，创面修复动态观察手段，建立“偎脓长肉”标准模型。观察外用中药对急慢性炎症的抑制作用和对巨噬细胞功能的影响：改良S a b a 毛细血管通透性实验方法，观察创面修复中局部和全身毛细血管的动态改变。改良S c h i l l i n g 方法收集和纯化创面脓液和创面细胞；荧光免疫和酶化学方法观察创面活性细胞形态和功能：创面渗出液的成分和活性状态；化学发光法观察创丽活性细胞的氧化代谢功能和脓液对其免疫调节作用；用斑点杂交定量分子生物学技术观察
11、创面细胞因子对创面细胞的调节作用以及纤维结合蛋白与外用中药协同作用加速创面修复的作用机制。2 8结果l _ 外用中药对急慢性炎症模型有抑制作用，抑菌实验阴性，对巨噬细胞有明显的激活、吞噬和趋化作用。2 外用中药使创面局部毛细血管通透性明显增强，构成创面脓液重要来源。3 创面脓液中含有大量形态和功能活跃的巨噬细胞，且细胞内酶活性极强。4 刨面脓液可以作为细胞激活园子，具有与酵母多糖、刀豆球蛋白雷同的对剖面巨噬细胞、中性粒细胞和淋巴细胞的激活作用。5 刨面渗出液中含有多种细胞因子，纤维结台蛋白含量最多，且与创面修复状态密切相关。6 纤维结合蛋白与外用中药联合修复感染创面，与单纯的纤维结合蛋白组和外用中药组比较可提高刨面修复进程2 0 。7 纤维结台蛋白和外用中药联合应用的作用在于提高了创面局部抗感染能力和加速新血管和肉芽
