《汉防已甲素调控青光眼术区纤维化的实验研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《汉防已甲素调控青光眼术区纤维化的实验研究（85页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、中山大学博士后学位论文汉防已甲素调控青光眼术区纤维化的实验研究姓名：李岱申请学位级别：博士后专业：临床医学眼科学指导教师：胡世兴20051201汉防已甲素调控青光眼术区纤维化的实验研究中山大学博上后研究上作报告本文中的英文缩写词表( T a b l eo fE n g l i s hA b b r e v i a t i o n )R G Cr e t i n a lg a n g l i o nc e l l s5 F u5 - f l u o r o u r a c i l M M Cm i t o m y c i nC 甩R Gf l a s he l e c t r o r e t i
2、 n o g r a m sT L J f E Lt e r m i n a ld e o x y n u d e o f l d y It r a n s f e r a s em c d i m e dd U T Pn i c ke n dl a b e l i n gI F Ni n t e r f e r o nT G F B 2t r a n s f o r m i n gg r o w t hf a c t o r - b e t a2 C s Ac y c l o s p o r i n eAt - p At i s s u ep l a s m i n o g e na c t
3、 i v a t o rT e tt e t r a n d r i n e E C Me x t r a c e l l u l a rm a t r i xF bf i b r o b l a s t V S M CV a s c u l a rS m o o t hm u s c l ec e l l sT C F ST e n o nSc a p s u l ef i b r o b l a s t sP D G Fp l a t e l e t d e r i v e dg r o w t hf a c t o rT G F Bt r a n s f o r m i n gg r o
4、 w t hf a c t o r pI L 1i n t e r l e u k i n lT N F t u m o rn e c r o s i sf a c t o r I L 6i r i t e r l e u k i n - 6M - C S Fm a c r o p h a g e c 0 1 0 n y s t i m u l a t i n gt h c t o rT G F c tt r a n s f o r m i n gg r o w t hf a c t o r aE G Fe p i d e r m a lg r o w t hf a c t o rI G F
5、一1i n s u l i n 1 i k eg r o w t hf a c t o r - lF G F 2f i b e rg r o w t hf a c t o r - 2F Nf i b r o n e c t i nH P L Ch i 曲p r e s s u r i z e dl i q u o rc h r o m a t o g r a p h yE D l _ As o d i u me t h y l e n e d i a m i n e t e t r a a c e t a t eS A B Cs t r e p ta v i d i n - b i o t i
6、 np e r o x i d o s ec o m p l e x t e c h n i q u eR T _ P C Rt e a lt i m e - p o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o nF C Mf l o wc y t o m e t e r M T T 3 - ( 4 ，5 - d i m e t h y l - 2 t h i a z 0 1 ) 一2 ，5 - d i p h e n y l - 2 H -t e t r a z o l i u mb r e m i d 】D M S Od i m e t h y ls u l
7、 f o x i d e B S Ab o v i n es e r u ma l b u m i n视网膜神经节细胞5 氟尿嘧啶丝裂霉素C闪光视网膜电图末端脱氧核营酸转移酶介导d U T P缺口末段标记干扰素转化生长因子6 z 环胞霉素A组织纤溶酶原激活剂汉防己甲素细胞外基质成纤维细胞瓶管平滑肌细胞T e n o n 囊成纤维细胞血小板衍生生长冈子转化生长因子B白细胞介素1肿瘤坏死冈子自细胞介素6巨噬细胞集落刺激因子转化生K 因于表皮生长网子胰岛素样生长因子- 1成纤维生长冈子一2纤维结合蛋白高压液相色谱法依地酸二钠链酶亲和素生物素- 过氧化物酶复合物技术适时定量聚台酶链式反应流式细胞计数仪
8、噻唑兰二甲亚砜牛血清白蛋白汉防已甲素调控青光眼术区纤维化的实验研究中山大学博十后研究T 作报告汉防已甲素调控青光眼术区纤维化的实验研究中山大学中山眼科中心，博士后：李岱合作导师：胡世兴教授中文摘要青光眼是常见的致盲眼病，居不可逆致盲眼病的第2 位，严重危害人类健康，给家庭、社会带来严重的负担，因此，青光眼的防治问题是防盲治盲及公共卫生工作的重点之一，具有重大的社会意义。青光眼滤过手术是青光眼治疗的主要手段之一，但由于术后滤过区的纤维瘢痕化可致1 0 3 0 的手术失败率，在难治性青光眼则高达4 9 8 9 。而滤过术后滤过泡瘢痕形成的病因复杂，发病机制尚未完全阐明，治疗手段不尽人意，己成为当前
9、青光眼研究的九大难题之一。传统的中药具有作用广泛，副作用少等优点，因此，有针对性的开发新药、新剂型来防治青光眼术后滤过区纤维化，有望为解决这一难题带来契机，而由防已科植物提取的生物碱一汉防己甲素己广泛应用于治疗全身疾病，其中抗矽肺纤维化等作用，无疑为我们进一步研究和应用其防治青光眼滤过手术区瘢痕形成提供了有益启示，目前己有报道T e t 可抑制体外培养的兔结膜成纤维细胞的生长，但尚缺乏对人眼成纤维细胞及相关在体实验的研究，为此，本研究分以下四部分首次探讨中药单体汉防己甲素抗滤过术区纤维化的可行性、安全性、有效性及作用机制。第一部分汉防己甲素抑制人眼T e n o n 囊成纤维细胞增殖的实验研究
10、目的：观察汉防己甲素( T e t ) 对体外培养的人目E T e n o n 囊成纤维细胞( T e n o n Sc a p s u l e汉防已甲素凋控青光眼术区纤维化的实验研究中山大学博士后研究工作报告f i b r o b l a s t s ，T C F S ) 生长的抑制作用，探讨其可能的作用机制。方法：1 ) M T T 法测定不同浓度的T e t 对T C F S 的抑制作用；2 ) 电镜观察T C F S 细胞形态的改变；3 ) 流式细胞仪分析细胞周期及凋亡；4 ) 末端脱氧核苷酸转移酶介导d U T P缺口末段标 己法( t e r m i n a ld e o x y
11、n u c l e o t i d y lt r a n s f e r a s em e d i a t e dd U T Pn i c ke n dl a b e l i n g ，T U N E L ) 检测细胞凋亡；5 ) 链酶亲和素一生物素一过氧化物酶复合物技术( s t r e p t a v i d i n b i o t i np e r o x i d o s ec o m p l e x t e c h n i q u e ，S A B C ) 平I J 适时定量聚合酶链式反应( r e a lt i m e - p o l y m e r a s ec h a i nr
12、e a c t i o n ，R T - P C R ) 检测细胞b a x 、b c t 一2 , n 转化生长因子- 1 3 f f t r a n s f o r m i n gg r o w t hf a c t o r - b e t a 2 ，T G F j 2 ) 蛋白和m R N A 表达改变。结果：1 ) 终浓度为1o 4 、1 0 、1 0 矗、1 0 - 7 M 的T e t 对T C F s 的生长均有明显抑制作用：2 )经1 0 。M T e t 处N 4 8 h 后，T C F S 出现凋亡早期形态学改变：3 ) 流式细胞仪结果显示，G o G l 期细胞F 降了2
13、 2 2 ，s 期细胞增加了2 0 5 3 ，G 2 M 期细胞增加了1 6 。实验组凋亡率明显高于1 6 4 0 对照组：4 ) T U N E L 法检测揭示有D N A 断裂；5 ) A B C法和R 1 二P C R 检测出细胞中b c l 2 、T G F 3 2 水平降低，b a x 的水平升高。结论：T e t 抑青0 T C F S 细胞的生长，呈剂量依赖性，并可诱导细胞凋亡。第二部分汉防己甲素滴眼液f l l J 9 1 齐, 研究目的：研究汉防己甲素滴眼液的处方及制备工艺，建立其含量测定方法。方法：1 ) 以特定的制备方法将主药溶解于盐酸溶液中，通过考察制剂在室温、光照、高
14、温条件下的稳定性确定处方。2 ) 用高效液相法测定制剂的含量，并进行方法学研究。结果：1 ) 汉防己甲素在盐酸溶液中溶解效果较好，制剂性质较稳定。2 ) 高效液相法测定制剂在2 6 2 0 8 t t t g m l 1 范围内线性关系良好，回收率为1 0 1 4 一1 0 2 ，6 ，n 内精密度( r e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o n ，R S D ) 为2 ，6 0 。型翌堕! ! ! 塑笙童垄里查堕堑堡些塑塞丝堕塞生些叁堂堕亘堑壅三堡塑堂结论：汉防己甲素滴眼液质量稳定、可靠，各方面指标达到设计要求。第三部分汉防己甲素滴眼液抗兔眼
15、滤过术区纤维化的实验研究目的：观察汉防己甲素滴眼液抑制兔眼滤过术区纤维化的疗效。方法：采用兔眼全层巩膜切除滤过术动物模型。实验动物共2 0 只，随机分为单纯手术组、O 2 9 L 丝裂霉素C 组、0 1 1 e t 组、赋形剂组。用T o n o P e n 眼压计、裂隙灯、光镜、电镜、免疫组织化学方法分别检测眼压、滤过泡形念改变、兔眼滤过区病理改变及T G F 8 2 受体蛋白表达。结果：汉防己甲素滴眼液可维持兔眼术后较长时间的良好滤过泡形态、较高滤过泡分值及低眼压状态：电镜、光镜下可见结膜下局限性胶原纤维减少、变细、紊乱和存在大小不同、形态各异的腔隙等；T G F 8 2 受体蛋白表达下降
16、。结论：汉防己甲素滴眼液能提高兔眼滤过手术的成功率，可作为抑制滤过泡瘢痕形成的辅助药物之。第四部分汉防己甲素滴眼液对眼组织毒副作用的实验研究目的：观察汉防己甲素滴眼液对兔眼的刺激反应及氏期滴眼的毒性作用。方法：1 ) 2 0 只家兔( 4 0 眼) 随机分为0 1 T e t 、0 2 T e t 、0 5 T e t 、1 T e t 、赋形剂五组，每只家兔右眼分别滴上述各组滴眼液O 1m l ，左眼滴等体积的生理盐水做对照，每天4 次，连续1 周，观察药物对眼的刺激性。2 ) 2 5 只家兔( 5 0 眼) 随机分为0 1 Y e t 、0 5 T e t 、1 T e t 、生理盐水组及赋形剂五组，每只家兔双眼分别滴相应的滴眼液O 1m l ，共3 月，通过活体检查、组织切片、视网膜电幽3汉防已甲素调控青光眼术区纤维化的实验研究中山大学博士i 彳研究工作报告( e l e c t r o r e t i n o g
