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1、毛细管电泳手性分离的 傅若农“倒峰”问题( 北京理工大学1 0 0 0 8 1 ) 前言 目前人们认识到手性化合物与生物物质相互作用的重要性，所以对手性化合物的处理倍 受重视，因为不同的对映体它们在药理功能、毒性作用、药动特性上可能有很大的差别。这 一事实大大影响了政府和主管部门对手性化合物的关注，因此测定手性化合物的组成，控制 单一对映体的纯度，对药物、化学品、化妆品以及生物制品和环境保护有十分重要的意义。 对手性化合物的分离可以使用G C 、H P L C 、S F C 和c E 或C E C ，但是由于C E 的高效、简便、 省钱和易于开发，最近十年它成为手性化合物分离的优先考虑的方法。
2、在手性化合物产品的 很重要的一项鉴定就是测定无效对映体杂质的含量，按照一些主管部门的规定，对杂质的含 量要低达0 1 检测限。为此从色谱方法考虑要求被测定杂质在主体成分之前出峰，如果它 在主体成分之后山峰就会被大峰的拖尾所掩盖，因此就要想办法把杂质峰颠倒过来，色谱上 n q 做“倒峰”，为了解决这一问题，近十年在C E 的手性分离上来提出了许多办法。本文将对 这一问题作一简要综述。 C E 手性选择剂和影响出峰顺序的因素 近年C E 使用的手性选择剂主要有环糊精及其各种衍生物、大环抗生素、冠醚、蛋白质、 多糖和杯芳烃等，但是环糊精( C D ) 及其各种衍生物占全部手性选择剂的8 5 左右，在
3、所有 使刚的C D 中未衍生的a ，p ，Y - C D 占3 2 ，衍生化的C D 占6 8 。使用中性C D 的占多 数( 6 2 ) ，使用带电荷C D 的占少数( 3 8 ) 。在研究C E 手性分离的倒峰办法时，大都 使用C D 及其衍生物做手性剂心。影响出峰次序的因素有：1样品分子和手性选择剂的作用 能力，即结合常数；2自由样品分子的移动方向和大小；3 手性选择剂的移动方向和大小； 4 样品分子和手性选择剂形成络合物的移动方向和大小；5电渗流的大小和方向；6 性选 择剂的浓度。 改变环糊精种类实现倒峰 改变C D 种类是实现手性异构体峰颠倒的重要手段，2 0 世纪9 0 年代后人们
4、发现改变 C D 种类可以把手性异构体的峰颠倒过来，特别是使用全甲基一e C D 作手性选择剂可以把来 衍生化的B - C O 分离的峰倒过来1 ，例如对手性钙阻断剂药物戊脉安( V e r a p a r m i l ) ；手性抗 组织胺药二甲茚定( D i m e t h i n d e n e ) ；扑尔敏；美沙酮；安鲁米特( a m i n o g l u t e h i m i d e ) ；乘 晕宁( d i m e n h y d r i n a t e ) 和抗组织胺药( b r o m p h e n i r a m i n e ) 都是这样。例如图1 所示。图1b r o
5、m p h e n r a m j n e 手性分禹的倒嶂电泳图 当然这不是绝对规律，其他类型C D 也会有此现象，例如用氨基苯乙哌定酮的R 一( + ) 异构体在 a C D 或T M B C D 柱上先出峰，而在p C D 或D M B C D 柱上则后出峰1 4 】。二甲茚定对映 体也可以用羧甲基一B C D 和B C D 作手性选择剂实现倒峰，近年利用N M R 较好地解释了产生倒峰的、原因【5 】。 改变手性选择剂浓度实现倒峰 例如前面所述用Q C D 和8 C D 二元混合物分离氨基苯乙哌定酮的手性异构体时，手性 剂的总浓度保持不变( 1 5m m 0 1 ) ，只改变二者的浓度比
6、例，在1 0 0 Q - C D 时肛( + ) 异构体1 5 4先出峰，在1 0 1 3 一C D 和9 0 Q C D 混合手性剂时，两种对映体就完全不能分离，到二 者各为5 0 时峰倒转R ( + ) 异构体在S ( ) 异构体后面出峰1 4 1 。单一手性剂也有类似情况。 改变p H 可实现倒峰 如以1 3 一C D 作手性选择剂并在尿素的存在下，于p H2 7 时分离L L 二肽D D 二肽 ( A l a - P h e 和L u e P h e ) ，L L 二肽先出峰。而在p H3 5 时L L 二肽后山峰。用羧甲基1 3 C D 分离三肽也有类似现象【6 】。S S a b
7、b a h1 7J 比较系统地研究了用B C D 、P M B C D 、D M 1 3 一C D 、T M - 1 3 - C D 、H P 1 3 C D 作手性选择剂分离三肽的流出顺序，在p H2 5 和p H3 5 的 缓冲溶液中出现很多倒峰现象。 使用带电荷的C D 的手性选择剂变化缓冲液酸度实现倒峰 这一方法早在9 3 年S c h m i t t 等就使用了哺1 ，他们用了三种带电荷的C D 手性选择剂( 羧 甲基一- 1 3 C D 、羧乙基一B C D 、月桂基1 3 C D ) ，分离7 种手性药物( 抗敏安、麻黄素、茶 心安、二甲茚定、海索比妥、联萘酚、o x a z o
8、 l i d i n o n ) 。使用这一类手性选择剂并改变缓冲液的 p H ( 如低于p H4 或高于p H5 ) ，使其带电荷或不带电荷，可以对映体分离峰颠倒。例如使J j ；I2 的羧甲基一1 3 C D ，在p H2 7 时分离麻黄素，( + ) 麻黄素在前：如果使用1 5 的羧甲基一1 3 C D ，在p H7 2 时分离麻黄素，( + ) 麻黄素在后。 改变电渗流方向或使用非手性胶束M E K C 实现倒峰 K a t a y a m a 使用适当的离子型聚合物涂渍毛细管柱，可以有效地控制电肾流的方向和大小， 结合C D 一改性的M E K C 可以使手性异够体的分离倒蜂旧。同一
9、作者在定量测定乙酰胆碱酯酶抑 制剂E 2 0 2 0 的有害微量对映体时，使用S D S 控制被测样品的淌度，阳离子型样品E 2 0 2 0 包 含在S D S 的胶束中，即在C D - M E K C 模式下使低含量异构体首先出峰( 而在C D C Z E 模式下 低含量异构体在主体成分异构体之后出峰) u0 。参考文献 1 GB l a s c h k ee t a l ，J C h r o m a t o g r A ，2 0 0 0 ，8 7 5 ： - 2 5 2 G K E S c r i b a ，e ta l ，J P h a r m aB i o m e d i cA n a
10、 l y s i s ，2 0 0 2 ，2 7 ：3 7 3 _ 3 9 9【3 1BC h a n k v e t a d z ee ta 1 ，JC h r o m a t o g rA ，2 0 0 0 8 7 5 ：4 7 l _ 4 8 4【4 】X Z h ue ta 1 ，J C h r o m a t o g r A 2 0 0 0 ，8 8 8 ：2 4 l 一2 5 0【5 1BC h a n k v e t a d z ec ta 1 J C h r o m a t o g r A ，1 9 9 8 ，7 9 8 ：3 1 5 3 2 3【6 】AM R i z z i
11、e ta 1 E l e 圮t r o a h o r e s i s ，1 9 9 9 。2 0 ：2 7 1 5 2 7 2 2【7 1S S a b b a h 。e ta l J C h r o m a t o g rA ，2 0 0 0 。8 9 4 ：2 6 7 - 2 7 2【8 】TS c h m i t te ta 1 ，C h m m a t o g m p h i s , 1 9 9 3 ，3 7 ( 9 l O ) ：4 7 5 - 4 8 1【9 1 9H K a t a y a m a e t a I J C h r o m a t o g r A 。2 0 0 0 ，8 7 5 ：3 1 5 - 3 2 2【l H K a t a y a m a e ta l ，j C h r o m a t o g r A1 9 9 7 ，7 “：1 5 I - 1 5 61 5 5
