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1、KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 作者单位：1.第四军医大学口腔医院 修复科，陕西 西安 710032；2.解放军南京军区机关医院 口腔科，江苏 南京 210016 【摘要】 目的 研究 3 种不同形貌氧化锌（ZnO）对复合树脂抗菌性能的影响。方法 液体稀释法测试纳米级 ZnO 粉、四针状氧化锌晶须（T-ZnOw）和微米级 ZnO 粉对变异链球菌的最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC） 。然后按 5的比例分别将 3种 ZnO 添加于化学固化型复合树脂粉剂中，用薄膜覆盖法测定老化处理前后树脂的抗菌率，并比较其差异。结果 纳米级 ZnO 粉、T-ZnOw 和微米级 ZnO 粉的 M
2、IC 分别为 78.13、312.50、1 250.00 g/mL；MBC 分别为 156.25、625.00、1 250.00 g/mL。添加了纳米级 ZnO 粉、T-ZnOw 和微米级 ZnO 粉的复合树脂老化处理前的抗菌率分别为（93.585.95）、 （89.424.11）、 （78.973.90）；老化处理后的抗菌率分别为（89.017.91）、 （84.634.72）、 （72.273.89）。结论 添加 3 种不同形貌的 ZnO 均能增强复合树脂的抗菌活性，其中纳米级 ZnO 的抗菌性最强，微米级 ZnO 最弱，而 T-ZnOw 在比表面积较小的情况下仍表现出较强的抗菌作用。【关
3、键词】 复合树脂,四针状氧化锌晶须,氧化锌,变异链KKME-专业医学搜索引擎 http:/ of three different zinc oxide incorporation on the antibacterial activity against Streptococcus mutans of omposite resin NIU Li-na1, CHEN Ji-hua1, FANG Ming1, YANG Ju-cai1, XIAO Yu-hong1, NI Feng2. （1. Dept. of Prosthodontics, College of Stomatology, The
4、 Fourth Military Medical University, Xian 710032, China; 2. Dept. of Stomatology, PLA Organ Hospital of Nanjing Military Region, Nanjing 210016, China）Abstract Objective To investigate the effects of incorporating three different zinc oxide（ZnO） on the antibac-terial activity of composite resin. Met
5、hods The minimal inhibitory concentration（MIC） and minimal bactericidal concentration（MBC） of nano-ZnO, tetrapod-like zinc oxide whiskers（T-ZnOw）, micro-ZnO against Streptococcus mutans were examined by the broth dilution test. Then the three different ZnO were added to the powder of one kind of bic
6、omponent self-cured composite resin at 5% respectively, and the antibacterial activities of the resin specimens were evaluated using the membrane covering method before and after 3-month accelerating aging. Results The MIC values of the three different ZnO against Streptococcus mutans were 78.13, 31
7、2.50 and 1 250.00 g/mL respectively and the MBC values were 156.25, 625.00, 1 250.00 g/mL respectively. The antibacterial ratios of the resin KKME-专业医学搜索引擎 http:/ incorporating with 5% of the three different ZnO were （93.585.95）, （89.424.11） and （78.973.90） respectively, while after 3-month accelera
8、ting aging those were （89.017.91）, （84.634.72） and （72.273.89）. Conclusion The three different ZnO could improve the antibacterial activity of the composite resin. The nano-ZnO exhibit the strongest antibacterial activity, while the micro-ZnO weakest. The T-ZnOw presents comparatively strong antibac
9、terial activity although with smaller specific surface area.Key words composite resin； tetrapod-like zinc oxide whiskers； zinc oxide； Streptococcus mutans复合树脂由于众多的优越性而在临床上得到广泛的应用，但是因其聚合收缩而引发的微渗漏及继发龋问题仍未能得到根本解决1。学者们尝试将各种抗菌剂如季铵盐、洗必泰2、载银抗菌剂3等添加到复合树脂中，取得了一定的抗菌效果，但还是存在如抗菌寿命短、变色、机械性能下等问题。近期有报道指出氧化钙、氧化镁、氧化
10、锌（zinc oxide，ZnO）具有较强的抗菌性，其中 ZnO 具有更多优点：在中性环境中无需光照即表现出显著的抗菌性，颜色和化学稳定性好，同时锌还是一种人体所必需的矿物元素4。本实验拟将 3 种不同形貌的 ZnO，即纳米级 ZnO 粉、四针状氧化锌晶须（tetrapodlike zincoxide whiskers，T-ZnOw） 、微米级 ZnO 粉添加到化学固化型复合树脂中，KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 材料和方法1.1 材料和仪器T-ZnOw（成都交大晶宇科技有限公司） ，纳米级 ZnO 粉、微米级 ZnO 粉（陕西省师范大学化学与材料科学学院） ，化学固化型复合树脂（粉
11、液型）由第四军医大学口腔材料实验室提供，变异链球菌 ATCC 25175 由第四军医大学口腔医院检验科提供，比表面积测试仪（北京精微高博科学技术有限公司） ，脑心浸出液（brain-heart infusion，BHI） （Sigma 公司，美国） ，人工唾液（第四军医大学口腔医院药剂科） ，聚乙烯薄膜（Interscience 公司，法国） 。1.2 最小抑菌浓度和最小杀菌浓度的检测 将 3 种 ZnO 粉用无菌 BHI 液体培养基按二倍稀释法制成10 个浓度梯度的抗菌剂应用液。将传代培养的变异链球菌 ATCC 25175 配制成 1.5107 CFU/mL 的菌悬液。每个试管中加入抗菌剂应
12、用液 1 mL、菌液 100 L 及无菌 BHI 液体培养基 900 L 后，置于 37 培养箱中厌氧培养 2448 h。试管内液体清亮的抗菌剂最低浓度为该抗菌剂的最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration，MIC） 。接种环挑取清亮试管中的培养物，划线接种于 BHI 琼脂平板上，孵育 48 h，无细菌生长的最低抗菌剂浓度为该抗菌剂的最小杀菌浓度（minimal bactericidal concentration，MBC） 。重复 3 次，同时设阴性、阳性对照。阳性对照即不加实验药液，只加入等量的 BHI 培养液和稀释后的菌悬液；阴性对照即只加入等量KKM
13、E-专业医学搜索引擎 http:/ BHI 培养液而不加菌悬液。1.3 树脂抗菌率的检测1.3.1 样本的制备 按 5的添加比将 3 种不同形貌的ZnO 分别加于复合树脂中作为实验组，未添加 ZnO 的复合树脂为空白对照组，聚乙烯薄膜为阳性对照组。按上述比例将抗菌剂添加到复合树脂的粉剂中，手工混匀后按 73 的粉液比进行调拌，充填于内径 10 mm、厚 2 mm 的聚四氟乙烯模具中，覆盖聚乙烯薄膜，并用玻璃板加压。每组 3 个试件，均新鲜使用，并于实验前用 70%乙醇溶液擦拭样品表面，1 min 后用无菌水冲洗，无菌环境下干燥备用。将阳性对照组的聚乙烯薄膜制备成直径为 10 mm 的圆片，紫外
14、光消毒 2 h 后备用。1.3.2 样本的抗菌率检测 将样本置于无菌琼脂 平板上，稍加压使样品嵌入琼脂中，并保持其上表面高于琼脂平面，以固定样品，防止其在实验过程中移动。制备浓度约为 1106 CFU/mL 的菌悬液，分别取 15 L 滴加在样品表面（阳性对照组将菌液加于聚乙烯薄膜上） ，覆盖聚乙烯薄膜，铺平，使细菌均匀接触样品，同时防止菌液挥发5。37 厌氧孵育 24 h 后用无菌生理盐水充分洗脱附于样本及覆盖膜表面的细菌。混匀洗脱液，倍比稀释后取 100 L 接种至 BHI 琼脂平板上，厌氧孵育 2448h 后行菌落计数。以平板上菌落数为 30300 的平板为准进行活菌计数，并根据稀释倍数
15、计算样品及对照组的回收菌数。以上实验重复 3 次，取平均值。将测定的菌落数按如下公式计算抗细菌率：r（%）=（bc）KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 为抗细菌率（%） ；b 为空白对照样品平均回收菌数；c为添加抗菌剂的树脂样品平均回收菌数。1.3.3 抗菌长效性实验 实验分组同 1.3.1，每组制备 3 个试样，消毒后浸泡于 2 mL 无菌人工唾液中。所有试样在 37 恒温水浴箱内老化处理 3 个月，每 3 d 更换 1 次人工唾液。抗菌率的测试同 1.3.2。本实验重复 3 次，实验结果与未经老化处理的试件相比较。1.4 统计学分析 抗菌率及长效性实验数据用 xs 表示，采用 SPSS 11.5 软件进行方差分析及组间 SNK-q 检验。2 结果 纳米级 ZnO 粉、T-ZnOw、微米级 ZnO 粉对变异链球菌的MIC 分别为 78.13、312.50、1 250.00 g/mL；MBC 分别为156.25、625.00、1 250.00 g/mL。抗菌率及长效性实验中，空白对照组和阳性对照组未表现出任何抗菌作用。添加了纳
