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1、中药对双歧杆菌生长的影响中药对双歧杆菌生长的影响摘要摘要: :选用选用 2323 种常用中药对双歧杆菌进行了体外生长促进实验种常用中药对双歧杆菌进行了体外生长促进实验, ,结果发现结果发现 12.5%12.5%的黄芪、芦根、桠葫芦分别对双歧杆菌有明显的促进生长作用。同一中药不同浓的黄芪、芦根、桠葫芦分别对双歧杆菌有明显的促进生长作用。同一中药不同浓度对双歧杆菌的增殖效果存在差异。度对双歧杆菌的增殖效果存在差异。关键词关键词: :中药中药; ;双歧杆菌双歧杆菌; ;影响影响微生物研究。微生物研究。中药是我国医学宝库的精髓中药是我国医学宝库的精髓, ,许多中药含有能够促进双许多中药含有能够促进双歧
2、杆菌增殖的多糖类物质。作者选用了歧杆菌增殖的多糖类物质。作者选用了 2323 种常用富含多糖种常用富含多糖类中药对双歧杆菌进行了体外培养实验类中药对双歧杆菌进行了体外培养实验, ,从中筛选出了几种从中筛选出了几种对双歧杆菌生长有明显促进作用的中药对双歧杆菌生长有明显促进作用的中药, ,本文对此作一报道。本文对此作一报道。1 1 材料与方法材料与方法1.11.1 菌种菌种: :长双歧杆菌长双歧杆菌(Bifidobacterism(Bifidobacterism longum),longum),菌种编号菌种编号BM3,BM3,为本所第十一课题组分离、保存。为本所第十一课题组分离、保存。1.21.2
3、 中药液制备中药液制备表表 1 1 不同中药对双歧杆菌生长的影响不同中药对双歧杆菌生长的影响中药中药*E1*E1 *E2*E2 中药中药*E1*E1 *E2*E2麦门冬麦门冬-0.084-0.084 -0.230-0.230 车前子车前子-0.219-0.219 -0.228-0.228五加皮五加皮-0.123-0.123 -0.161-0.161 菟丝子菟丝子-0.108-0.108 -0.113-0.113黄黄 芪芪 0.0520.052 -0.023-0.023 艹律艹律 草草-0.288-0.288 -0.268-0.268芦芦 根根 0.0230.023 -0.034-0.034 茯
4、茯 苓苓-0.096-0.096 -0.148-0.148党党 参参-0.190-0.190 -0.198-0.198 云云 芝芝-0.023-0.023 -0.108-0.108猪猪 苓苓-0.225-0.225 -0.212-0.212 灵灵 芝芝-0.127-0.127 -0.179-0.179白白 芨芨-0.190-0.190 -0.244-0.244 枸枸 杞杞-0.124-0.124 -0.240-0.240玉玉 竹竹-0.175-0.175 -0.234-0.234 莱菔子莱菔子-0.249-0.249 -0.258-0.258五味子五味子-0.070-0.070 -0.107-
5、0.107 玄玄 参参-0.223-0.223 -0.187-0.187天门冬天门冬-0.041-0.041 -0.043-0.043 桠葫芦桠葫芦 0.0110.011 -0.137-0.137半半 夏夏-0.083-0.083 -0.015-0.015 败酱草败酱草-0.132-0.132 -0.179-0.179石石 斛斛-0.175-0.175 -0.264-0.264注注:*E1:*E1 为中药浓度为中药浓度 12.5%12.5%时的时的 E E 值值;*E2;*E2 为中药浓度为中药浓度 25%25%时的时的E E 值。值。1.2.11.2.1 中草药原料中草药原料: :麦门冬、五
6、加皮、黄芪、芦根、党参、猪苓、白麦门冬、五加皮、黄芪、芦根、党参、猪苓、白芨、玉竹、五味子、天门冬、半夏、石斛、车前子、菟丝子、律草、芨、玉竹、五味子、天门冬、半夏、石斛、车前子、菟丝子、律草、茯苓、云芝、灵芝、枸杞、莱菔子、玄参、桠葫芦、败酱草茯苓、云芝、灵芝、枸杞、莱菔子、玄参、桠葫芦、败酱草, ,均为植均为植物药成品物药成品, ,购自于无锡荣康药店。购自于无锡荣康药店。1.2.21.2.2 中药液制备中药液制备: :取各中药取各中药 20g20g , ,加水浸泡过夜后加水浸泡过夜后, ,煮沸煮沸 454560min,60min,浓缩至浓缩至 20mL,20mL,成为含药液成为含药液 1g
7、1g /mL/mL 的浓液。的浓液。1.31.3 培养基培养基1.3.11.3.1 空白培养基空白培养基:BL:BL 液体培养基液体培养基, ,本所自制。本所自制。1.3.21.3.2 含中药培养基配制含中药培养基配制: :取取 BLBL 培养基培养基 2 2 倍浓液和药液浓倍浓液和药液浓液液, ,按一定的配比配制成中药浓度分别为按一定的配比配制成中药浓度分别为 6.25%6.25%、12.5%12.5%、25%25%、50%50%的培养基。的培养基。1.41.4 仪器仪器:721:721 分光光度计分光光度计( (上海分析仪器厂上海分析仪器厂),),超净工作台超净工作台, ,冷冻离心机冷冻离
8、心机( (上海离心机研究所上海离心机研究所) )。1.51.5 方法方法1.5.11.5.1 双歧杆菌的液体培养双歧杆菌的液体培养: :取冰箱保存的双歧杆菌取冰箱保存的双歧杆菌 BM3BM3 接接种至种至 BLBL 液体培养基中液体培养基中,37e,37e 厌氧培养厌氧培养 20h,20h,再取生长好的菌液再取生长好的菌液以以 5%5%的接种量转接新鲜配制的的接种量转接新鲜配制的 BLBL 液体培养基中液体培养基中, ,同上培养。同上培养。1.5.21.5.2 含中药的培养基接种及培养含中药的培养基接种及培养: :取生长良好的取生长良好的 BM3BM3 液液体体, ,倒入无菌离心管中倒入无菌离
9、心管中,4000r/min,4000r/min 离心离心 10min,10min,倾去上清液倾去上清液, ,加加入入 3mL3mL 无菌生理盐水无菌生理盐水, ,混匀后血球计数混匀后血球计数, ,再将此液适当稀释再将此液适当稀释, ,调整菌液浓度调整菌液浓度 108108 个个/mL,/mL,取取 0.10.1 mLmL 转接入各含中药的转接入各含中药的 10mL10mL培养基中培养基中,37e,37e 厌氧培养厌氧培养 20h20h。1.5.31.5.3 各中药对双歧杆菌增殖效果的判定方法各中药对双歧杆菌增殖效果的判定方法: :将接种好的将接种好的含中药的培养基和不含中药的培养基含中药的培养
10、基和不含中药的培养基, ,稀释稀释 1010 倍倍, ,分别检测分别检测其在波长其在波长 600nm600nm 处的吸光度处的吸光度 ODOD 对照对照, ,再取同样的接种后的培养再取同样的接种后的培养基基,37e,37e 厌氧培养厌氧培养 20h20h 后后, ,同上稀释同上稀释 1010 倍并检测其在波长倍并检测其在波长600nm600nm 处的吸光度处的吸光度 ODOD 样品样品, ,求出各培养基求出各培养基 ODOD 的增殖的增殖$OD,$OD,令令 E E=$OD=$OD 样品样品-$OD-$OD 对照对照, ,若若 E0,E0,说明该中药品种对双歧杆菌有说明该中药品种对双歧杆菌有增
11、殖作用增殖作用, ,若若 E0,E0,说明该中药品种对双歧杆菌无明显的增殖说明该中药品种对双歧杆菌无明显的增殖作用。作用。2 2 结果结果2.12.1 不同中药对双歧杆菌的增殖效果比较不同中药对双歧杆菌的增殖效果比较将培养液分别配制成含各中药分别为将培养液分别配制成含各中药分别为 12.5%12.5%和和 25%25%两种两种浓度浓度, ,按每按每 10mL10mL 培养液中接入菌悬液培养液中接入菌悬液( (浓度为浓度为 108108 个个/mL)0./mL)0.1mL1mL 方法接种后方法接种后,37e,37e 厌氧培养厌氧培养 20h20h 后后, ,稀释稀释 1010 倍测吸光度倍测吸光
12、度OD600,OD600,计算计算 E E 值值, ,结果见表结果见表 1 1。如表如表 1 1 所示所示,E,E 值大于值大于 0,0,即在体外培养的情况下对双歧即在体外培养的情况下对双歧杆菌有增殖效果的依次为浓度杆菌有增殖效果的依次为浓度 12.5%12.5%黄芪、芦根、桠葫芦。同黄芪、芦根、桠葫芦。同一中药在不同浓度情况下一中药在不同浓度情况下 E E 值不同值不同, ,表明对双歧杆菌的增殖表明对双歧杆菌的增殖效果存在明显差异。效果存在明显差异。2.22.2 中药浓度对双歧杆菌生长的影响中药浓度对双歧杆菌生长的影响取对双歧杆菌有增殖效果的中药品种黄芪取对双歧杆菌有增殖效果的中药品种黄芪,
13、 ,配制成配制成 6.6.25%25%、12.5%12.5%、25%25%、50%50%的浓度的浓度, ,检测各浓度对双歧杆菌生长检测各浓度对双歧杆菌生长的影响的影响, ,结果见表结果见表 2 2。表表 2 2 中药浓度对双歧杆菌生长的影响中药浓度对双歧杆菌生长的影响黄芪浓度黄芪浓度(%)(%)培养前培养前 OD600OD600 培养后培养后 OD600$ODOD600$OD E E 值增殖作用值增殖作用0 0 0.0330.033 0.0850.085 0.0520.0526.256.25 0.1360.136 0.2180.218 0.0820.082 0.0300.030 有有12.51
14、2.5 0.2050.205 0.3050.305 0.1000.100 0.0480.048 有有25.025.0 0.3410.341 0.3700.370 0.0290.029 -0.023-0.023 无无50.050.0 0.5500.550 0.5520.552 0.0020.002 -0.050-0.050 无无如表如表 2 2 所示所示, ,黄芪浓度达黄芪浓度达 12.5%12.5%对双歧杆菌的增殖效果对双歧杆菌的增殖效果最明显最明显, ,而浓度大于而浓度大于 25%25%时时, ,已无法表现增殖效果已无法表现增殖效果, ,药物对双药物对双歧杆菌生长繁殖的影响与药物浓度密切相关
15、。歧杆菌生长繁殖的影响与药物浓度密切相关。2.32.3 接种量对实验结果的影响接种量对实验结果的影响取在取在 BLBL 液体培样基中培养液体培样基中培养 20h20h 的的 BM3BM3 菌液菌液 10mL,4000r/10mL,4000r/minmin 离心离心 10min,10min,倾去上清液倾去上清液, ,加入加入 3mL3mL 无菌生理盐水无菌生理盐水, ,进行血进行血球计数后球计数后,10,10 倍系列稀释倍系列稀释, ,取取 108108、106106、104104 个个/mL/mL 各菌液各菌液 0.1mL0.1mL转接入含黄芪浓度为转接入含黄芪浓度为 12.5%12.5%的各
16、培养液中的各培养液中,37e,37e 厌氧培养厌氧培养20h,20h,观察其对双歧杆菌的增殖作用观察其对双歧杆菌的增殖作用, ,结果见表结果见表 3 3。表表 3 3 接种量对实验结果的影响接种量对实验结果的影响接种菌液浓度接种菌液浓度( (个个/mL)/mL) E E 值增殖作用值增殖作用1080.0971080.097 有有1060.0481060.048 有有10401040 无无如表如表 3 3 所示所示,10mL,10mL 培养液中接入培养液中接入 108108 个个/mL/mL 菌悬液菌悬液 0.0.1mL,E1mL,E 值最高值最高, ,增值效果最明显。当增值效果最明显。当 10mL10mL 培养液中仅接入培养液中仅接入104104 个个/mL/mL 菌悬液菌悬液 0.1mL0.1mL 时时, ,培养培养 20h,20h,双歧杆菌几乎未生长。双歧杆菌几乎未生长。说明
