博士论文-鲢鱼背肌组织蛋白酶B、L的纯化鉴定及水解肌球蛋白的研究

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1、中国农业大学博士学位论文鲢鱼背肌组织蛋白酶B、L的纯化鉴定及水解肌球蛋白的研究姓名:李树红申请学位级别:博士专业:食品科学指导教师:马长伟20040601A b s t r a c tT h er e s o u r c e so fs i l v e rc a r p ( H y p o p h t h a l m i h t h y sm o l i t r i x ) i sv e r yr i c hi no u rc o u n t r y S oi ti sn e c e s s a r yt ou t i l i z i n gi t P r o c e s s i n gt h

2、 es l i v e rc a r pm e a ti n t os u r i m ip r o d u c t si so fv a s tr a n g eo fp r o s p e c l s 。H o w e v e r s i l v e rc a r pi sv e r yh a r dt os u w a r i ( s e t t i n g ) a n de a s yt om o d o r i ( h e a t - i n d u c e ds o f t e n i n ga t5 0 - 7 0 “ C ) 。w h i c hl i m i t e dt h

3、 ee x p l o i t a t i o na n du t i l i z a t i o no fs i l v e rc a r pr e s o u r c e s A c c o r d i n gt oag r e a td e a lo f r e s e a r c h e s ,e n d o g e n o u sh e a t - s t a b l ec a t h e p s i n sB 、H 、Li nt h ef i s hm u s c l el y s o s o m ew e r ei m p l i e di nt h em o d o dp h

4、e n o m e n o n S of a r , w h e t h e rt h ee n d o g e n o u sc a t h e p s i n si ns i l v e rc a r pm u s c l ep a r t i c i p a t e di nt h eh e a t - i n d u c e dm o d o r io rn o ti ss t i l lu n k n o w n T h e r e f o r e ,t h er u d i m e n t a la c t i v i t i e so f e a t h e p s i nB 、

5、H 、Li nt h es i l v e rc a r pm i n c eb e f o r ea n da f t e rw a s h i n go f t h em e a t w e r es t u d i e d a n dt h er e s u l ts h o w e dt h a tt h ea c t i v i t i e so f c a t h e p s i nB 、H 、Lw e r er e m n a n t A n db o t ho ft h er e m a i n i n ga c t i v i t ya n dr e m a i n i n

6、gp e r c e n t a g eo fc a t h e p s i nLa r et h eh i g h e s ta m o n gt h r e ec a t h e p t i ca c t i v i t i e s T h ea u t o l y s i sd e g r e eo fm y o f i b r i l l a rp r o t e i n so fs i l v e rc a r pd o r s a lm u s c l ew i t ha n dw i t h o u tE - 6 4w e r ei n v e s t i g a t e dr

7、e s p e c t i v e l y , a n dt h er e s u l t si n d i c a t e dt h a tw h e nw i t h o u tE - 6 4 。t h ec h a n g i n gt r e n do f t h er e l a t i v eq u a n t i t yo f m y o s i nh e a v yc h a i n ( M H C ) w a sc o n s i s t e n tw i t ht h a to ft h er u d i m e n t a r yc a t h e p t i ca c

8、t i v i t i e si nt h em y o f i b r i l l a rp r o t e i n s ,m o r e o v e re i t h e rE - 6 4i n d i v i d u a l l yo rE 6 4a n dP M S Ft o g e t h e rd i dn o ti n h i b i tt h ea u t o l y s i so fm y o s i nh e a v yc h a i n ( M H C )t h o r o u g h l y , s u g g e s t i n gt h a tt h em o d

9、o ds i m u l a t eb yt h ea u t o l y s i so fm y o f i b r i l l a rp r o t e i n sa t5 0 “ 1 2m i g h tb ep a r t l yc a u s e db yt h i o lc a t h e p s i n si nm u s c l el y s o s o m e ,a sw e l la sb yo t h e rt y p eo fs e r i n ep r o t e i n a s e sb i n d i n gt ot h em y o f i b r i lp r

10、 o b a b ly J u d g i n gf r o mt h er e s u l t sa b o v e ,i tc o m e st ot h ep r i m a r yc o n c l u s i o nt h a tt h e r ew a st h ep o s s i b i l i t yt h a tc a t h e p s i nB 、H 、Lp a r t i c i p a t e di nt h es i l v e rc a r ps u r i m is o f t e n i n g I no r d e rt oi l l u m i n a

11、t et h ee s s e n t i a lr e l a t i o n s h i pb e t w e e nc a t h e p s i nB 、La n dm o d o r is p e c i f i c a l l y ,c a t h e p s i nBa n dc a t h e p s i nLw e r ep u r i f i e da n dc h a r a c t e r i z e df r o mt h es i l v e rc a r pd o r s a lm u s c l e ,a n dt h er e s u l t si n d i

12、 c a t e dt h a tb o t ho ft h et w oc a t h e p s i n sm i g h te x i s ti nt h ef o r mo fp r o e a t h e p s i na n ds o m ep r o c e s s i n gi n t e r m e d i a t e ,a sw e l la sm a t u r em o n o m e ro f t h el o w e s tm o l e c u l a rw e i I g h t A d d i n gt h es a m ea m o u n t ( c o

13、u n t e da c c o r d i n gt ot h eu n i to fa c t i v i t y ) o fp u r i f i e dc a t h e p s i nLa n dc a t h e p s i nBr e s p e c t i v e l yt ot h es i l v e rc a r pm y o s i ns o l u t i o n ,b o t hl e dt ot h ed e g r a d a t i o no fM H Ca tp H 6 5a n da t5 0 “ Co r6 0 “ C ,a sw e l la sa t

14、3 5 “ Ca p p r o x i m a t et ot h es e x i n gt e m p e r a t u r ei np r o c e s s i n g D u r i n gt h er e a c t i o nt i m eo f 0 2 4 h ,t h ed e g r a d a t i o no f M H Cc a u s e db ye a t b e p s i nLi sm o r ee v i d e n tt h a nt h a tc a u s e db yc a t h e p s i nB W h e nt h ep Hv a l

15、u es h i f t e dt op H5 0a n dp H5 5 t h ep r o t e o l y t i ca c t i o no fc a t h e p s i nLo nM H Ci sm u c hh i g h e rt h a nt h a ta tp H6 5 ,w h i l ec a t h e p s i nBs t i l lh y d r o l y z e dt h eM H Cs l i g h t l y A l lt h ef i n d i n g ss h o w e dt h a tt h ee n d o g e n o u sl y

16、 s o s o m a lc a t h e p s i nLi ns i l v e rc a r pm u s c l ei st h em o r ec r i t i c a lp r o t e i n a s eh y d r o l y z i n gt h es u r i m ip r o t e i n ,a n dc o n t r i b u t e sm o r et ot h eh e a t - i n d u c e ds o f t e n i n go fs i l v e rc a r ps u r i m ig e l s A tt h es a m et i m e ,t h ep r o t e o l y t i ca c t i o no fc a t h e p s i nLo nM H Cm i g h tb ea na g e n tt od i f f i c u l t - s e t t i n ga tt h es e x i n gt e m p e r a t u r e

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