红细胞渗透脆性的测定

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1、红细胞渗透脆性的测定红细胞渗透脆性的测定目的与原理 掌握测定红细胞渗透脆性的方法，测定不同鱼类红细胞渗透脆性 并理解细胞外液渗透压对维持细胞正常形态与功能的重要性。 正常情况下，动 物红细胞内的渗透压与血浆的渗透压相等，哺乳动物约相当于 0.9NaC1 溶液 的渗透压，鱼类的等渗溶液为 0.851.0NaC1 溶 液。将红细 目的与原理目的与原理 掌握测定红细胞渗透脆性的方法，测定不同鱼类红细胞渗透脆性并理解细胞外 液渗透压对维持细胞正常形态与功能的重要性。 正 常情况下，动物红细胞内的渗透压与血浆的渗透压相等，哺乳动物约相当于 0.9NaC1 溶液的渗透压，鱼类的等渗溶液为 0.851.0N

2、aC1 溶 液。将红 细胞置于等渗溶液中， 其形态和容积可保持不变。若将红细胞悬浮于低渗的 NaC1 溶液中，则水分进入红细胞使之膨胀甚至破裂溶解，但红细胞对低渗溶液 具有一定的抵抗力，其抵抗力 大小与红细胞膜脆性有关。通常用不同浓度的 NaC1 溶液来测定红细胞膜的渗透脆性，红细胞膜渗透脆性大的，则对低渗 NaC1 溶液的抵抗力小，NaC1 溶液 的渗透压稍有降低，此类红细胞便发生破裂而溶 血。反之，脆性小的则对 NaC1 溶液的抵抗力大，Nac1 溶液的渗透压降到很低 时才使这些红细胞破裂溶血。刚 能引起一部分红细胞溶解的低渗 NaCl 的浓度 可以代表最小抵抗值；使全部红细胞溶解的 Na

3、Cl 浓度为最大抵抗值。通常就以 抵抗值表示红细胞的渗透脆性。在 刚成熟的红细胞，其膜的渗透脆性较小，而 衰老的红细胞膜的渗透脆性较大。 实验对象实验对象 鲤、鲫或草鱼。 试剂试剂与器材与器材 5 毫升无菌注射器，消毒棉球，中试管，小试管，试管架，滴管，1%NaCl， 蒸馏水，75%酒精，碘酒，凹瓷盘，1%肝素钠或 10%草酸钾溶液，3.8% 枸橼酸 钠。 实验步骤实验步骤 1、 取小试管 10 支，编号后，按下表制成不同浓度的 NaCl 溶液。 试管号12345678910 1%NaCl (ml)0.900.650.60 0.550.50.45 0.40 0.35 0.30 0.25 蒸馏水

4、（ml）0.10.350.40 0.450.50.550.60.65 0.70 0.75 NaCl 溶液浓度 （%）0.90.650.60 0.550.50.45 0.40 0.35 0.30 0.252、用润湿过抗凝剂的注射器 从鱼尾静脉采 1 毫升血，立即向每一试管中各加 一滴血，将试管夹在两掌心中迅速搓动，使血液与管内 NaCl 溶液混匀（切勿用 力震荡），室温下放置 2 小时后观 察结果。多余血液注入盛有 0.1 毫升 3.8% 枸橼酸钠的试管内。加以混合，以备重复实验使用。 3、观察结果：记录开始溶血和完全溶血的两管 NaCl 溶液浓度。 按下列标准判断有无溶血、不完全溶血或完全溶血

5、。 （1）上清液无色，管底为混浊红色或有沉淀的红细胞，表示没有溶血。 （2）上清液呈淡红色，管底为混浊红色表示只有部分红细胞破裂溶解，为不完 全溶血。开始出现部分溶血的 NaCl 溶液浓度，即为红细胞的最小抵抗值，也是红细胞的最大脆性。 （3）管内液体完全变成透明的红色，管底无细胞沉积，为完全溶血。引起红细 胞完全溶解的最低 NaCl 溶液浓度，即为红细胞的最大抵抗值，即红细胞的最小 脆性。 方法评估方法评估 该方法筒单实用，但应严格控制血量（血液和 NaCl 溶液之比约为 1:25）和防 止血标本在体外溶血，否则易影响试验的准确度。本试验敏感性较差，需结合 其他实验室检查结果进行分析。 应用意义应用意义 渗透脆性指标对于掌握细胞膜的特性、形态和生理功能具有一定意义，如膜的 特性、流动性、结构、组成成分等的改变，均使膜的脆性发生改变。 注意事项注意事项 1、配制 1.0%NaCl 溶液，称量必须准确。 2、取血时一定要避免溶血。 3、滴加血液时要靠近液面，使血滴轻轻滴入溶液以免血滴冲击力太大，使红细 胞破损而造成溶血的假象。 4、加入血滴后，轻轻摇匀溶液，切勿剧烈振荡。5、应在光线明亮处观察结果。如对完全溶血管有疑问，可用离心机离心后，取 试管底部液体一滴，在显微镜下观察是否有红细胞存在。