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1、-淀粉酶活性的测定淀粉酶活性的测定1.-淀粉酶抑制剂对PPA 活性的抑制作用分别取浓度为0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL 的柚皮素溶液0.05mL（溶于水）与0.2 mL PPA 溶液（0.33 U/mL，溶于pH 6.8 磷酸盐缓冲液）混匀在37 水浴反应20 min。对照组溶液则以0.05 mL水与0.2 mL PPA 溶液进行反应。在反应液中加入1mL 1 %可溶性淀粉溶液，继续37 水浴10 min 后，加入1.5 mL DNS 显色剂，混匀，置于沸水浴中5 min。然后，冷却至室温，定容至25 mL，540 nm 下测定吸光。空白是1.25ml水加上1.5mlDNS
2、，定容至25ml，在A540nm下测吸光值根据下式计算柚皮素对PPA 活性的抑制率：抑制率（%）=（A 对照-A 样品）/A 对照 100%注：A 对照=A 对照-A 对照空白，A 样品=A 样品-A 样品空白按图加完药品后，在反应液中加入 1.5mL 1 %可溶性淀粉溶液继续 37 水浴 10 min 后，加入 1.5 mlDNS 显色剂，混匀，置于沸水浴中 5 min。然后，冷却至室温，定容至 25 mL，540 nm 下测定吸光。空白是 1.25ml 水加上1.5mlDNS，定容至 25ml，在 A540nm 下测吸光值编号抑制浓 度(mg/ml)抑制剂 （ml）PPA水10.20.05
3、0.2020.40.050.2030.60.050.2040.80.050.205 1,.00.050.20 对照组0.20.05-淀粉酶淀粉酶 Km 的测定的测定一、实验步骤：取试管 5 个，并分别编号，按下表加入药品Km1Km1 的测定的测定 酶催化体系反应体系底物（淀 粉）淀 粉 酶抑制剂（ml）水DNS（ml ）反应液 （ml）OD还原糖浓度（mg/ml）编号浓度体 积0.2001.51.25 10%10.2001.51.25 20.25%10.2001.51.25 30.50%10.2001.51.25 40.75%10.2001.51.25 51%10.2001.51.25 Km2
4、Km2 的测定的测定 酶催化体系反应体系底物（淀粉）淀 粉 酶0.02mg/ml 抑制剂 （ml）水DNS（m l）反应液 （ml）OD还原糖浓度（mg/ml）编号浓度体 积0.20.0501.51.25 10%10.20.0501.51.25 20.25%10.20.0501.51.25 30.50%10.20.0501.51.25 40.75%10.20.0501.51.25 51%10.20.0501.51.25 Km3Km3 的测定的测定 酶催化体系反应体系 底物（淀粉）淀粉 酶0.04mg/ml 抑制剂 （ml）水DNS（ml ）反应液（ml）OD还原糖浓度（mg/ml）编号浓度体 积0.20.0501.51.25 10%10.20.0501.51.25 20.25%10.20.0501.51.25 30.50%10.20.0501.51.25 40.75%10.20.0501.51.25 51%10.20.0501.51.25 再从标准曲线中查出还原糖的含量，以 1/V 为纵轴，1/S 为横轴做直角坐标。
