《植物组织中游离脯氨酸含量的测定》由会员分享，可在线阅读，更多相关《植物组织中游离脯氨酸含量的测定（2页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、植物体内游离脯氨酸含量的测定一、原理一、原理当植物缺水时体内的脯氨酸含量增加。植株体内脯氨酸含量在一定程度上 反映了植株体内的水分情况。因而可以作为植物缺水情况的参考性生理指标。用人造沸石在 pH l7 范围内振荡溶液，可除去干扰的氨基酸或使不与茚 三酮反应(如甘氨酸、谷氦酸、天冬氨酸、丙氨酸、绩氨酸、肮氨酸、苯丙氨酸、 精氨酸等)，脯氨酸与茚三酮试剂呈显色反应，其含量与颜色深浅成正相关，可 用分光光度计测定。此法有专一性。 二、实验材料、试剂与仪器设备二、实验材料、试剂与仪器设备 1 1实验材料实验材料 植物叶片。 2 2试剂试剂 (1)80乙醇。 (2)人造沸石。 (3)活性炭。 (4)茚
2、三酮试剂：将 2.50 g 茚三酮于 60ml 冰醋酸和 40ml 6mol/L 磷酸中, 加热(70)溶解。试剂至少在 24h 内稳定。 (5)脯氨酸标准液：准确称取 25mg 脯氨酸溶于少量 80乙醇中，再用蒸馏 水定容至 250ml，其浓度为 100g/ml。再取此液 10ml，用蒸馏水稀释至 100ml，即成 l0g/ml 的脯氨酸标准液。 3 3仪器设备仪器设备分光光度计，水浴锅,移液管，容量瓶，冰醋酸，仪器药品，离心机，烧杯， 试管，恒温水浴。 1 1绘制标准曲线绘制标准曲线 吸取脯氨酸标准母液 0、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml 分别放入 7 支 具塞刻度试管
3、，分别加入蒸馏水至 2.0ml，其脯氨酸含量分别为 O、2.0、40、80、12.0、16.0、20.0g。分别吸取上述标准溶液 2ml，加 冰醋酸 2ml，茚三酮试剂 2ml 加入试管中，混匀后加玻璃球塞，在沸水浴中加 热 15min。用分光光度计于波长 515nm 下进行比色测定，以零浓度为空白对照。 将测定结果以脯氨酸浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标作标准曲线.2植核样品液的提取选取植株功能叶片 2g，用 3ml 80乙醇研磨(放少许石英砂)成浆状。用 80乙醇洗研体，将提取物和洗液置于试管中。80乙醇总量为 10ml。加盖置 于黑暗中室温下提取 24h，或 80%恒温水浴中提取 20mi
4、n。将提取液在放有活性炭的滤纸上进行过滤，重复过滤一次，除去色素和残 渣。将滤液置于试管中，加其重量 1/5 的人造沸石强烈振荡 5min。将上层液在 离心机上离心 10min，上清液备用。3样品溶液的测定取 2ml 上清液置于试管中，再加入 2ml 的冰醋酸和 2ml 茚三酮试剂，加盖 密封，在沸水浴上加热 15mln。用 3ml 80乙醇代替样品液作为对照。在分光 光度计上测 515nm 处各样品的吸光度，从标准曲线上求出样品溶液中脯氨酸含 量。 四、结果计算四、结果计算样品中脯氨酸含量的计算： 脯氨酸含量（g/g）=CVT/WV1 式中：C由标准曲线上查得的脯氨酸的质量，g。VT提取液总体积，ml。W样品质量，g。V1测定液体积，ml。
