《化妆品中7 种常见抗生素的》由会员分享,可在线阅读,更多相关《化妆品中7 种常见抗生素的(5页珍藏版)》请在金锄头文库上搜索。
1、 - 1 -化妆品中 7 种常见抗生素的超快速液相色谱测定法抗生素属于处方药,我国化妆品卫生规范1( 以下简称规范 )规定此类物质为禁用成分,然而市场抽检往往会有检出2-4。国内对化妆品中7 种常见抗生素(盐酸米诺环素、盐酸土霉素、盐酸四环素、盐酸金霉素、盐酸多西环素、氯霉素及甲硝唑)的检测方法多采用高效液相色谱法(HPLC)5-7,2007 版规范也是采用HPLC 法。超快速液相色谱(UFLC)是近2 年来新发展的液相色谱技术,代表了液相色谱发展方向。本研究建立了UFLC 法同时测定化妆品中7 种常见抗生素的方法。1 材料与方法1.1 仪器与试剂LC7000(海能仪器股份有限公司);盐酸四环
2、素(97.5%) 、盐酸金霉素(99.0%) 、氯霉素(98.5%)及甲硝唑(99.4%)标准品,盐酸米诺环素(85.1%) 、盐酸土霉素(88.2%) 、盐酸多西环素(86.0%);甲醇、乙腈和甲酸均为色谱纯;超纯水。1.2 方法1.2.1 色谱条件色谱柱为 C18 柱(2.1 mm50 mm,1.7 m);流动相A 为甲醇-乙腈(体积比为12) ,流动相B 为1%甲酸水溶液,采用梯度洗脱,初始时流动相A 体积分数为10%,至3.5 min 线性增长至30%,然后保持1.5 min,5.0 min后恢复初始流动相,平衡1.5 min 结束,流量为0.2 ml/min;检测波长为268 nm;
3、进样量为2 l。1.2.2 标准溶液的配制单标储备溶液:准确称取各种标准物质约10 mg 分别至10.0 ml 容量瓶中,用1 ml 甲醇及1 ml 1%甲酸水溶液溶解,甲醇定容至刻度,- 2 -各单标浓度约为1 mg/ml。校准曲线:根据所需标样浓度,移取适量各单标中间液于10.0 ml 容量瓶中,流动相定容,标准系列为1、2、5、10、50 mg/L,临用现配。以标准系列质量(ng)为横坐标,峰面积为纵坐标绘制校准曲线。1.2.3 样品前处理提取方法借鉴规范1,但考虑到氯离子对仪器有一定的腐蚀性,用甲酸替代盐酸。即:称取化妆品样品1.00 g 于10 ml 具塞比色管中,加入甲醇和甲酸(1
4、%)等体积混合溶液至刻度,摇匀,超声提取20 min,必要时于离心机上以1610 离心5 min,经0.22 m 滤膜过滤得到待测液,在设定色谱条件下上机分析。2 结果与讨论2.1 流动相及洗脱条件的选择流动相优化:流动相中的有机相选择借鉴了规范1。四环素类化合物属于两性化合物,从色谱理论上讲,流动相可以是酸性或碱性,但由于盐酸四环素和盐酸土霉素在碱性条件下易破坏失效8,所以选择酸性流动相。随着改变流动相中甲酸含量分别为0.1%,0.2%,0.5%和1.0%,发现甲硝唑的保留时间逐步变化,当甲酸含量为1.0%时,保留时间逐步达到稳定,方法的重现性和耐用性最佳。由于7 种化合物的极性差别大,所以
5、宜采用梯度洗脱方式。另外,试验显示采用梯度洗脱比等度洗脱更能提高目标物质的检测灵敏度。图1 为7 种抗生素的标准色谱图,各化合物在5 min 内得到分离,其保留时间见表1。- 3 -2.2 方法的线性范围和检出限在设定色谱条件下,标准系列溶液的绝对质量与色谱峰面积呈线性相关。检测下限以噪音的3 倍计算。7 种抗生素的回归方程、相关系数、线性范围及仪器检出限见表l。2.3 准确度与精密度- 4 -向不含待测7 种物质的祛痘除螨类样品中分别加入高低两种浓度的混合标准溶液,使加标量分别为5 和20 mg/kg,混匀过夜,依照前述样品处理方法提取测定,每个添加水平平行测定6份。7 种抗生素的平均回收率
6、为82.5%105.0%,RSD 为0.4%4.8%(n=6) 。7 种抗生素的精密度及准确度结果见表2。2.4 实际样品测定对11 份市售祛痘除螨类化妆品的分析表明,2 份检出氯霉素,检出质量分数分别为0.37% 和0.19%;1 份检出甲硝唑,质量分数为1.02%;盐酸米诺环素、盐酸土霉素、盐酸四环素、盐酸金霉素、盐酸多西环素未检出。图2 为同时检出甲硝唑和氯霉素的某阳性样品色谱图,峰2 保留时间为1.35 min,为杂质出峰,不影响对峰1 甲硝唑的定性。- 5 -3 小结本研究建立了化妆品中7 种常见抗生素的UFLC 检测方法,与已报道的HPLC 方法比较,该方法检验速度更快,检出限更低,废液排放少,其他方法学参数都能达到要求。