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1、实验三实验三 红细胞脆性试验红细胞脆性试验实验目的实验目的测定红细胞细胞膜对不同低渗溶液的渗透抵抗力。亦即测定正常动物红细胞的渗透脆性。实验原理实验原理正常的红细胞系混悬于等渗的血浆中,若置于高渗溶液内,则红细胞因失去内部液体而皱缩;反之,置于低渗溶液内,则水分进入红细胞,使红细胞两面凹陷的圆盘形变为球形,如继续膨大,即发生破裂溶解,形成溶血。红细胞脆性试验就是测定红细胞对低于0.9 NaCl 溶液的耐受能力。耐受力高者,红细胞不易破裂,即脆性低。反之,耐受力低者,红细胞易于破裂,即脆性高。凡上层液开始微呈淡红色,而极大部分红细胞下沉,称开始溶血或最小抗力(红细胞的最小抵抗力) 。凡液体呈均匀
2、红色,管底无红细胞下沉,则称完全溶血或最大抗力 (红细胞的最大抵抗力) 。正常红细胞的最小渗透抵抗力为 0.40.5NaCl%溶液,最大渗透抵抗力为0.30.35%NaCl 溶液。一般说,刚成熟的红细胞膜的渗透脆性较小,而衰老的红细胞膜的渗透脆性较大。生理学上将与血浆渗透压相等的溶液称为等渗溶液;而将能维持红细胞正常形态、大小和悬浮于其中的溶液称为等张溶液。等渗溶液不一定是等张溶液(如 1.99%的尿素溶液),但等张溶液一定是等渗溶。实验动物实验动物鸡器材及药品器材及药品试管,试管架,吸管,新鲜血(或去纤维蛋白血) ,1NaCl,蒸馏水。方法与步骤方法与步骤1先将试管分别排列在试管架上,按下表
3、把 1%NaCl 稀释成不同浓度的低渗溶液,每管溶液均为 2 毫升。 试管号稀释度123456789101%NaCl (毫升)蒸馏水(毫升)NaCl ()l.400.600.701.300.700.651.200.800.601.100.900.55l.001.000.500.901.100.450.801.200.400.70l .300.350.601.400.300.501.500.252采取血液,并在上列各管中各加入大小相等的血液 l 滴,然后用拇指堵住试管口,将试管慢慢倒置一、二次,使血液与管内盐水混合均匀。3在室温下静置21 小时,观察结果。4依下列标准判定出有无溶血、不完全溶血或
4、完全溶血的氯化钠百分比浓度。(1)试管内液体下层为浑浊红色,上层为无色或极淡色的液体,说明红细胞没有溶解。(2)小试管内液体下层为浑浊红色,说明有未溶解的红细胞,而上层出现透明红色,说明有部分红细胞破坏和溶解,称为不完全溶血。开始出现部分溶血的盐溶液浓度,既为红细胞的最小抵抗力(表示红细胞的最大脆性) 。(3)小试管内液体完全变成透明红色,管底无红细胞沉积,说明红细胞完全溶解,称为完全溶血。引起红细胞最先全部溶解的盐溶液的浓度,既为红细胞的最大抵抗力(表示红细胞的最小脆性) 。(4)记录被检红细胞脆性范围,既开始溶解时的盐溶液浓度与全部溶解时的盐溶液浓度。注意事项注意事项1配制的各种 NaCl 溶液必须准确。2各管中加入的血滴大小应尽量相等。3混匀时轻轻倾倒 12 次,减少机械震动,避免人为溶血。4 应在光线明亮处判定结果。