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1、一氧化氮在吗啡后处理对心肌缺血再灌注损伤保护中的作用一氧化氮在吗啡后处理对心肌缺血再灌注损伤保护中的作用 医学护理论文网 【摘要】 【目的】 探讨吗啡后处理对急性心肌缺血/再灌注损伤的保护作用以及对信号 通路 eNOS/NO 的影响。 【方法】 SD 大鼠 56 只随机分成 4 组，每组 14 只： S 组(假手术， 只穿线，不结扎)， I/R 组(单纯缺血再灌注)， M 组(吗啡后处理 + 缺血再灌注)，L + M 组(L-NAME + 吗啡后处理 + 缺血再灌注)。除 S 组外，所有大鼠心脏都经历 45 min 缺血 和 120 min 再灌注。观察血流动力学指标，于再灌注 120 mi
2、n 时，各组随机取 9 只大鼠， 用 TTC 法染色，计算心肌缺血梗死区(IA/AR);其余 5 只大鼠，取心肌，用 Western Blot 技 术分析总 eNOS 和磷酸化 eNOS 的蛋白表达，硝酸盐还原酶法测定心肌 NO 含量。运用 SPSS 12.0 统计软件，统计学分析采用方差分析及 SNK 检验。 【结果】 与 I/R 组比较，M 组梗死面积明显缩小，(32 2.8) % vs (49 2.9) % (P 0.05)。再灌注 120 min 时，与各自平衡点相比，I/R 组、M 组和 L + M 组，MAP 和 RPP 明显降低(P 0.05，图 1A)。与 I/R 组比较，M
3、组心肌梗死面积明显缩小，梗死区占缺血区(IA/AR)的百分比为(32 2.8)% vs (49 2.9)% (P 0.05)。以各组磷酸化 eNOS 与总 eNOS 的比值进行比较，吗啡后处理使磷酸化 eNOS 增高。与 I/R 组比较， M 组磷酸化 eNOS 的增高有统计学意义(P 0.05)，l-NAME 没有抑制吗啡后处理所诱导的磷酸化 eNOS 蛋白表达的增加(图 2，3)。2.4 吗啡后处理对心肌组织 NO 含量的影响与假手术的对照组比较，缺血/再灌注损伤组心肌组织内 NOx 含量明显减少 (P 0.05)， 吗啡后处理明显增加心肌组织内 NOx 含量，而非选择性一氧化氮合成酶抑制
4、剂，l-NAME 明显降低心肌组织内 NOx 含量(表 2)。3 讨 论目前已知的保护心脏，减少心肌缺血/再灌注损伤最有力的方法是缺血预适应或缺血后 适应。但因伦理道德及使用不便等原因限制其临床运用4。用药物代替缺血，采用更为合 理的诱导方法来调动这种内源性保护机制成为目前心血管领域研究重点。麻醉药对心脏保 护作用的研究由来已久。作用于中枢神经系统阿片受体产生镇痛作用的吗啡，具有明显的 抗心肌缺血/再灌注损伤作用。研究发现5，吗啡预处理可以对抗大鼠心肌的缺血/再灌注 损伤，这种保护作用是通过心肌局部的阿片受体及心肌细胞的 KATP 通道介导产生的。毛 张凡等2研究显示，运用 Langendor
5、ff 心脏离体灌流模型，吗啡后处理对心肌缺血/再灌注 损伤有保护作用。运用心脏在体缺血模型，我们的研究结果显示，吗啡后处理明显降低心 肌梗死面积。本实验中，选用非选择性一氧化氮合成酶抑制剂，l-NAME 完全消除吗啡后 处理对心肌的保护作用，说明一氧化氮参与了吗啡后处理的心肌保护作用。持续基础的 NO 释放，对维持血管内皮细胞的完整性起着重要作用。NO 化学性质不 稳定，生理状态下半衰期为 3 5 s，在细胞内很快代谢为硝酸盐和亚硝酸盐，通过硝酸 还原酶法检测出所有的硝酸盐和亚硝酸盐的量，就可以推算出总的一氧化氮的量。NO 除 了能调节血管平滑肌张力外，还有抗氧化、抗氧自由基、保护血管内皮细胞
6、等复杂的生理 病理作用6。NO 能激活蛋白激酶 C (PKC)，后者被认为是内源性活性物质介导心脏保护 作用时细胞内信号转导的共同通路，故 NO 可能在缺血预适应心脏保护中起着重要作用7。 NO 由 NO 合酶(NOS)催化左旋精氨酸生成，迄今为止，已知有三种 NOS 参与 NO 的生物 合成：内皮型(eNOS)、诱导型(iNOS)和神经元型(nNOS)，已知与缺血预处理有关的物质如 腺苷8、乙酰胆碱9和缓激肽10等均可促进 eNOS 诱导的一氧化氮合成，提示 NO 可能 参与了缺血预处理。本研究通过蛋白质印迹技术及硝酸盐还原酶法测定发现，吗啡后处理使磷酸化 eNOS 表达明显增加和心肌组织内
7、 NO 含量明显增加，这与吗啡后处理引起的心肌梗死面积减小 相一致。非选择性一氧化氮合成酶抑制剂，l-NAME 完全消除吗啡后处理对心肌的保护作 用，明显降低吗啡后处理所诱导的心肌组织内 NO 含量的增加。提示 eNOS/NO 信号通路 参与了吗啡后处理对心肌缺血/再灌注损伤的保护作用。本研究中，l-NAME 没有抑制吗啡 后处理所诱导的磷酸化 eNOS 蛋白表达的增加。内源性 NO 是由 NO 合酶催化 l-精氨酸末 端胍基中的一个氨原子氧化而生成，l-NAME 是 l-精氨酸竞争性拮抗剂，虽然对磷酸化 eNOS 蛋白表达没有影响，却显著降低了内源性 NO 的产量。大量的实验证明，eNOS
8、是 Akt 下游的一个信号分子。研究显示，磷酸化 eNOS 可改 变酶的活性，增加由切力应激所诱导的 NO 产生11-12。1999 年，有两个实验室报道， Akt 磷酸化 eNOS 通过 PI3K 依赖途径13-14。胰岛素和雌激素均可通过 PI3K/Akt 信号通 路激活 eNOS 产生 NO。我们的实验证实，吗啡后处理通过磷酸化 eNOS 明显增加 NO 的量。 至于 Akt 与 NO 这两个信号分子间的具体联系及机制仍有待进一步阐明。【参考文献】Zhao ZQ， Corvera JS， Halkos ME， et al. Inhibition of myocardial injury
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