《20S蛋白酶体对SVZ神经干细胞增殖潜能的调控作用》由会员分享，可在线阅读，更多相关《20S蛋白酶体对SVZ神经干细胞增殖潜能的调控作用（36页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、山两医科人学硕： ：学位论文2 0 S 蛋白酶体对S V Z 神经干细胞增殖潜能的调控作用摘要目的：观察小鼠室管膜下区( S u b v e I l t r i c u l a rz o n e ，S V z ) 神经干细胞州e u r a ls t e mc e l l s ，N S C s ) 2 0 S 蛋白酶体的表达，以及机体老化进程中S V Z2 0 S 蛋白酶体的活性变化，旨在揭示蛋白酶体活性改变对N S C s 增殖潜能的影响，为延缓机体衰老进程提供新的突破方向。方法：将小鼠分为胚胎( E m b 驴I l i c1 4d a y s ，E 1 4 ) 、新生( P o s t
2、n a t a ld a y ，P 0 ) 、幼年( P o s t n a t a l3 0d a y s ，P 3 0 ) 、成年( P o s 缸l a t a l6 0d a y s ，P 6 0 ) 、老年( P o s t n a t a l5 4 0d a y s ，P 5 4 0 ) 5 组。1 应用2 0 S 蛋白酶体n e s t i n ( 神经干细胞标志物) 免疫荧光双标法观察S V ZN S C s2 0 S 蛋白酶体的表达。2 提取E 1 4 、P O 、P 3 0 、P 6 0 、P 5 4 0 小鼠S V Z 蛋白，通过W e s t e n lB l o t
3、半定量分析不同年龄阶段小鼠2 0 S 蛋白酶体的表达变化。3 提取E 1 4 、P O 、P 3 0 、P 6 0 、P 5 4 0 小鼠S V Z蛋白，应用荧光分光光度法检测不同年龄阶段小鼠2 0 S 蛋白酶体的活性。4 将l p lM G l 3 2( 3 0 m 眺g ) 注入成年小鼠侧脑室，分别在3 d 、7 d 后腹腔注射B r d U ( 5 m g l 【g ) ，通过免疫荧光染色观察B r d U 阳性细胞数，检测蛋白酶体抑制剂对N S C s 增殖潜能的影响。结果：1 2 0 S 蛋白酶体免疫阳性细胞沿侧脑室侧壁分布，阳性细胞呈圆形，胞浆与胞核内均可见阳性表达，并且2 0 s
4、 蛋白酶体阳性表达与N S C s 标志物n e s t i I l 共存，提示2 0 S 蛋白酶体可能对N S C s 具有调控作用。2 W e s t 锄B l o t 结果表明随年龄增加2 0 S 蛋白酶体表达水平逐渐降低，其中胚胎小鼠S V Z2 0 s 蛋白酶体表达量最高( 1 2 2 士0 1 ) ，老年小鼠2 0 S 蛋白酶体表达量最低( O 6 士0 0 5 ) ，二者相比差异有统计学意义( P O 0 5 ) 。4 M G l 3 2 干预实验结果显示注入M G l 3 23 d 、7 d 后脑室S V ZB r d U 阳性细胞减少，统计分析结果显示注入M G l 3 23
5、 d 后B r d u 阳性细胞数减少( 2 士O 1 ) ，与溶剂对照D M S O 组( 2 2 士3 ) 相比差异有统计学意义( P 0 0 5 ) 4 M G l 3 2i n t e e n t i o nr e s u l t ss h o w e dm a ta R e r 蜘e c t i o no f M G l 3 23 d a y S锄d7d a y s ，T h en u n 曲e ro fB r d 旷c e l l sa r ed e c r e a S e di nS V Z A R e r e c t i o no fM G l3 23 d a y s ，T h
6、 em 础e ro f B 甜c e l l sa r ed e c r e a S e d ( 2 士0 1 ) ，c o m p a r e dw i mm eD M S Og r o u p ( 2 2 士3 ) ，i th 鹊as t a t i s t i c a l l ys i 鲥f i c a n td i 妇F e r e I l c e ( 薛O 0 5 ) A R e r 岫e c t i o no fM G l 3 27 d a y s ，T h en 啪b e ro f B r d 旷c e l l sa r ed e c r e 硒e d ( 3 士1 ) ，c o
7、 m p 删w i t l l 恤D M S og r o u p ( 8 士3 ) ，i th a Sas t a t i s t i c a l l ys i 班f i c a n td i c e ( F O 0 5 ) w h i C hi n d i c a t e 吐l ed e c r e 嬲e da c t i V 时o f2 0 S p r o t e a S o m el e dt om ed e c r e a u s eo fp r o l i f 打a t i v ep o t e l l t i a li nN S C s C o n c l u s i 伽：( 1
8、 ) t l l ee X p r e s s i o na I l da c t i t yo f2 0 Sp r o t e a s o m e 黟a d u a l l yr e d u c e d a n di nS V ZI IN S C sw i ma g e ；w h ic _ hs u g g e s tt h ed e c r e a s e da c t i v i 够o f2 0 Sp r o t e a S o m em a yr e s u l ti I l 廿1 es 跚e s c e l l c eo fN S C sa I l dt h ea 百n go ft
9、h eb o d y ( 2 ) P r o t e a s o m ei I l l l i b i t o r sc a I ls i 弘i f i c 觚t l yi 1 1 l l i b i tm ep r o l i 向a t i o np o t c n t i a lo fN S C s ，i 1 1 d i c a t i n g m a ta 西n go ft 1 1 eb o d ym a ym a l ( ep r o t e a S o m ed y s f h n c t i o nw h i c hi n d u c et ot l l ed 印l e t i o
10、 no fN S C sl i b r a 巧肌da 百n g - r e l a t e dd i s e a L s e s b y K e yw o r d s ：2 0 Sp r o t e a S o m eS V ZN S C sI I I山西医科人学硕I ：学位论义缩略词 D M S oN S C sP B SU P PB r d UD A P IS V ZS C ZP FS G ZD GR bD T TS D ST E M E D缩略语表英文全称D i m e t h y ls u l f o x i d eN e u r a lS t e mC e U sP h o s p
11、h a t eb u 仃e r e ds a l i n eU b i q u i t i l l 呻r o t e a s o m ep a t h w a y5 b r o m o 2 一d e o x y u r i d i n e4 ，6 一d i a I I l i d i n o 一2 - p h e n y l i n d o l eS u b v e n t r i c u l a rz o n eS u b c a U o s a lz o n eP a r a f b r n l a l d e h y d eS u b g r a n u l a rz o n eD e
12、n t a t eG y l l I sR e t i n o b l a s t o m ap m t e i nD i t h i o t h r e i t o lS o d i u md o d e c y Is u l p h a t eT e t 豫m e t h y I e t h y l e n e d i a m i n eI V中文全称二甲基亚砜神经干细胞磷酸盐缓冲液泛素一蛋白酶体通路5 一溴一2 一脱氧尿嘧啶4 ，铲二脒基一2 一苯基吲哚室管膜下区侧脑室后角尾侧多聚甲醛海马齿状回的亚颗粒区海马齿状回视网膜胚细胞瘤蛋白二硫苏糖醇十二烷基硫酸钠四甲基乙二胺学位论文独创性声明本
13、人声明，所呈交的学位论文系在导师指导下本文独立完成的研究成果。文中任何引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人己用于其他学位申请的论文或成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本文如违反上述声明，愿意承担以下责任和后果：l 、交回学校授予的学位证书；2 、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报；3 、本文按照学校规定的方式，对因不当取得学位给学校造成的名誉损害，进行公开道歉。4 、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。论文作者签名：学位论文版权使用授权书本人完全了解山西医科大
14、学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山西医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为山西医科大学。( 保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日 日期：年月日( 本声明的版权归山西医科大学所有，未经许可，任何单位及任何个人不得擅自使用)山两医科人学硕：l = 学位论文上- - J 一 刚吾神经干细胞不仅存在于发育中的哺乳动物神
15、经系统，而且还存在于成年哺乳类动物神经系统中，一般认为，它位于室管膜下区( S u b v e l l t r i c u l a rz o n e ，S V Z ) ，海马齿状回和嗅回，其中，位于侧脑室附近的室管膜下区是目前公认的成年个体神经干细胞最为集中的地方，因此，S v Z 神经干细胞成为研究神经发育的理想模型之一【l 】【2 】。近年来的研究发现【3 】，成年神经干细胞在细胞替代疗法的研究和应用中具有极大的价值。例如，利用成年神经干细胞进行移植有诸多优势。如果能从病人身上分离出成年神经干细胞，对它们进行诱导定向分化或者进行基因操作，然后将它们移植回病人体内，可避免发生免疫排斥反应。同
16、时可避免使用来源于人体胚胎或人体胎儿的干细胞进行细胞替代治疗所带来的伦理问题。但目前仍有一些问题限制了成年神经干细胞的应用。比如，成年神经干细胞在大脑内的含量很少而且数量随年龄增长而降低。是什么原因导致神经干细胞在成年脑内的含量很少? 与衰老是否有关系?2 0 0 4 年诺贝尔化学奖颁给了发现泛素蛋白酶体通路( U P P ) 的科学家，显示了蛋白酶体研究的重要性。目前已经确认的体内蛋白降解的正常途径有溶酶体途径和蛋白酶体途径。溶酶体主要负责细胞外和跨膜蛋白的降解，蛋白酶体则主要降解胞内蛋白1 4 】。蛋白酶体是一种高度保守的多价催化蛋白酶复合物，广泛存在于真核细胞的核内和细胞质内。这种复合物能催化水解连接有多聚泛素链的蛋白，是泛素蛋白酶体通路的主要组分。它将积蓄的蛋白降解以保持体内蛋白平衡特别是细胞信号转导途径中多种调节蛋白的活化和降解，控制着细胞的分化、生长、凋亡等过程。大量研究表明1 5 ，6 7 1 ，蛋白酶体2 0 S 参与了细胞的分化，增殖，凋亡，衰老等生理过程，
