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1、1实验性腹膜炎小鼠脾、肾钙调神经磷酸 酶的变化作者：程建青 李海峰 范红斌 杜斌 杨志勇【摘要】 目的： 观察实验性腹膜炎小鼠脾、肾钙调神经磷酸酶(CaN)在腹膜炎病程中变化。方法：36 只小鼠随机分为 6 组，即腹膜炎 48h、5d、10d、14d、21d 组与对照组，腹膜炎组腹腔注射 1%冰醋酸 0.2mL，对照组腹腔注射等量生理盐水，每组各 6 只。采用比色法测定脾、肾组织 CaN 活性。结果： 脾 CaN 活性在实验性腹膜炎 5d、10d、14d、21d 呈持续性低水平（P0.01）；肾 CaN 活性在实验性腹膜炎10d 达高峰 14d、21d 与 10d 相比呈下降趋势但仍高于对照组
2、，差异有显著性。结论： 实验性腹膜炎小鼠脾、肾 CaN 活性变化与病程进展有关。 【关键词】 腹膜炎;脾;肾;钙调神经磷酸酶【ABSTRACT】 Objective:AIM To investigate the alteration of calcineurin activity in spleen and kidney in experimental peritonitis mice.Methods:36 Kunming mice were randomly divided into 6 groups，which were experimental Peritonitis groups fo
3、r 48h、5d、10d、14d、21d and control group.In the groups of experimental peritonitis,the model of nonspecific peritonitis was induced by injecting ice acetate acid into mouses peritoneal cavity,and the same quatity of normal saline was injected to animals in control group.CaN activity in spleen and kidn
4、ey was measured by using PNPP as substrate.Results:CaN activity in spleen was significantly decreased in experimental peritonitis groups of 5d、10d、14d、21d compared with that of control group（P0.01）,while in kidney was increased for the groups of 10d、14d、21d（ P0.01or P0.05） compared with that of cont
5、rol group.There was a peak time at 10d.Conclusion:CaN activity might be involved in functional regulation for spleen and kidney in experimental Peritonitis.【KEY WORDS】 Peritonitis;Spleen;Kidney;CaN2钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)是迄今发现的唯一受 Ca2+/钙调素(calmodulin,CaM)调节的丝/苏氨酸蛋白磷酸酶,参与了多种生理功能调节1。既往发现 CaN 在淋巴细胞的活化
6、和神经系统中发挥重要作用2,CaN 活性改变与多种疾病发生发展密切相关，本研究对实验性腹膜炎小鼠脾、肾 CaN 活性变化进行研究，为研究腹膜炎自愈过程中机体损伤和抗损伤机理提供理论依据。1 材料与方法1.1 动物分组及模型制备 选用健康昆明种小鼠 36 只，体重 1822g，由浙江实验动物中心提供。在标准饲养条件下，小鼠随机分为 6 组，即腹膜炎48h、5d、10d、14d、21d 与对照组，腹膜炎组腹腔注射 1%冰醋酸 0.2mL，对照组腹腔注射等量生理盐水，每组各 6 只。1.2 酶活性测定 无机磷法测定 CaN 活性，以每小时每毫克蛋白的 CaN 分解底物对硝基苯磷酸(PNPP)产生 1
7、molL-1 无机磷的量为一个活力单位（molPi/mgprot/hour）。考马斯亮蓝法测定组织蛋白含量。测定试剂购自南京建成生物工程研究所，按试剂盒说明制备脾、肾组织样本,操作按照说明书进行酶测定，考马斯亮蓝法测定组织蛋白。1.3 统计学分析 运用 SPSS12.0 统计软件对数据进行统计处理。实验数据以平均值标准差（x)表示，样本均数间比较采用单因素方差分析。 2 结果小鼠腹腔解剖观察 实验组小鼠腹腔注射冰醋酸后，精神萎糜，进食减少。腹腔解剖，48h 有腹膜和肠管壁充血、水肿，胃肠扩张明显，有腹水。5d 的小鼠，腹腔仍有充血，但充血减轻，水肿减轻，渗出的腹水被吸收，肝脏与膈肌之间及部分小
8、肠之3间粘连。注射 10d 后的小鼠腹腔中的渗出液体已大部分被吸收，肠管色泽恢复，有轻微充血和肠管壁轻微水肿的情况，仍有脏器的粘连情况。注射冰醋酸 14d 后的小鼠腹腔中渗出的液体已吸收，肠管壁的水肿不明显，充血减轻。21 天小鼠腹腔观察已基本恢复正常，与空白对照组比较无明显区别。脾、肾 CaN 活性在实验性腹膜炎 48h 无显著性变化；脾的 CaN 活性在腹膜炎5d、10d、14d、21d 组呈持续性低水平（P0.01）(图 1)；肾 CaN 活性在实验性腹膜炎 5d、10d 逐渐上升，10d 达高峰（P0.01），14d、21d 与 10d 相比呈下降趋势但仍高于对照组，差异有显著性（P0
9、.05）(图 2)。各组小鼠脾、肾 CaN 的活性变化见表 1。表 1 不同组别小鼠脾、肾钙调神经磷酸酶活性比较注:*与对照组比较P0.05，*与对照组比较 P0.013 讨论机体局部病变可引发全身各器官发生相应的反应。本研究采用比色法，对实验性腹膜炎小鼠脾、肾 CaN 活性进行测定，发现实验性腹膜炎小鼠 CaN 活性在脾、肾调控变化不同。与对照组相比,脾 CaN 活性在实验性腹膜炎 5d、10d、14d、21d 均呈显著性降低。肾 CaN 活性在实验性腹膜炎从 5d 升高，10d 达高峰 14d、21d 仍高于对照组，差异有显著性。以往研究显示，CaN 具有广泛的组织分布，在神经组织和 T
10、淋巴细胞中含量最为丰富，其中脑的 CaN 占脑总蛋白含量 1%以上，在心脏和骨骼肌中亦有较高的表达，在肺、脾、肾和肝组织中也同样存在。CaN 不同的组织分布特性，表明其具有广泛的组织生物学效应3。CaN 的组织生物学效应是通过 CaN 活化达到的。有研究发现，正常 Wistar 大鼠 CaN 活化强弱特征表现为:脾、肾、肝、脑、肺、主动脉和心，其中以脾 CaN 活性最强，心脏 CaN 活性最弱4。4然而，当受外源性醛固酮处理 4 周后，Wistar 大鼠 CaN 活化特性发生了明显的变化，表现为:心、肺、脾和脑 CaN 活性明显增高，其中心脏上升了 147%、肺 95%、脾 65%、脑 43%
11、。本研究显示小鼠脾 CaN 活性高于肾脏，实验性腹膜炎自愈过程中，脾和肾的 CaN 活性变化不同。对肾性高血压大鼠重要脏器 CaN 活性变化的研究发现，假手术组大鼠脾中 CaN 活性甚高，认为可能是外伤性刺激对假手术组大鼠脾脏组织中的 CaN 高表达造成了一定的影响5。而本研究中腹膜炎521dCaN 活性呈持续性低水平，表明腹膜炎损伤与外伤性刺激脾的反应机理不同。肾内 CaN 活性变化，证实在实验性腹膜炎过程中肾组织有反应性变化，但在21d 时 CaN 活性仍高于正常对照组，提示腹膜炎损伤自愈过程在细胞水平的恢复较腹腔观察征象可能更长一些时间。肾 CaN 活性增强可能是细胞内钙大量内流激活的结
12、果，而脾的 CaN 活性下降可能来源于某种内源性抑制因子。脾和肾在已有的研究资料中是含有 CaN 活性较高的器官，研究病理状态下脾和肾 CaN 活性变化，对探讨重要脏器结构与功能保护具有重要意义。本研究结果提示实验性腹膜炎小鼠脾、肾 CaN 活性变化与病程进展有关。有关小鼠腹膜炎 CaN 活性在脾、肾调控变化的不同机理有待进一步研究。【参考文献】1 Gurerini D.Calcineurin:not just a simple protein phosphataseJ.Biochem Biophys Res Commun,1997,235(2):2712752 Yakel JL.Calcin
13、eurin regulation of synepic function:from ion channels to transmitter release and gene transcriptionJ.Trends Pharmacol Sci,1997,18(4):1241333 Liu J.FK506 and cyclosporin,molecular probes for studying intracellular signal transductionJ.Immun Today,1993,14:2902964 谢晓华,陈雯,常连庆,等.醛固酮诱导大鼠相关组织器官钙调神经磷酸酶的活化5J.心脏杂志,2005,17(4)：3203225 陈雯,谢晓华,常连庆,等.肾性高血压大鼠重要脏器钙调神经磷酸酶活性的变化J.高血压杂志,2004，12(1)：6669
