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1、1FS1272 滴眼液对体外大鼠白内障晶状 体的影响作者：顾静 周大兴 陈安平 朱晓燕 王晶 钱艳鑫 【摘要】 目的研究 FS 1272 滴眼液对硒性白内障的防治作用。 方法采用离体晶状体培养方法，观察 FS 1272 滴眼液对亚硒酸钠性白内障大鼠晶状体混浊程度，晶体中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱苷肽过氧化酶（GSH PX）、过氧化氢酶（CAT）活性，丙二醛（MDA）、可溶性蛋白（WSP）和不溶性蛋白（WIP）含量的影响。结果FS 1272 滴眼液高、中剂量组晶状体混浊度明显低于模型组，SOD、CAT、GSH Px 活性高于模型组，MDA 和 WIP 含量低于模型组。 结论FS 1272 滴
2、眼液可减轻晶体氧化损伤程度，从而起到防治白内障的作用。 【关键词】 白内障；亚硒酸钠；大鼠；晶状体；Fs 1272 滴眼液Abstract: Objective To study the preventive and therapeutic effect of FS 1272 eye drops on cataract induced by Sodium selenite. Methods With the crystalline lens culture method in vitro, the influence of FS 1272 eye drops on the cataract c
3、rystalline lens of rat induced by Sodium selenite was observed,including the extent of the rat crystalline lens opaque,the activities of superoxide dismutase(SOD)，tathion peroxidase(GSH PX),catalase(CAT)，the quantities of malondialdehyde (MDA ), soluble protein(WSP) and insoluble protein(WIP) in len
4、s.ResultsThe extent of the crystalline lens opaque in high and middle dose group of FS 1272 eye.Key words： cataract; Sodium selenite; rats; crystalline随着人们生活水平的提高和寿龄的延长，白内障(Cataract)已经成为目前世界性的首位致盲因素,同时也是我国第一位的致盲眼病1，而老年性白内障(Sinile Cataract, 简称 SC)是最常见的白内障，在眼科为常见病、多发病，严重影响老年人的日常生活和质量2 3。目前还没有令人满意的防治白内
5、障药物,因此寻找经济2高效安全的防治白内障的新药依然是眼科医学研究的重点课题。我们采用亚硒酸钠4 7体外诱发大鼠白内障模型来模拟老年性白内障。观察大鼠晶状体的混浊程度变化，测定大鼠晶状体 SOD、CAT、PSH Px 等抗氧化酶活性、氧化产物MDA 以及 WSP 和 WIP 的含量8 9，旨在探讨新药 FS 1272 滴眼液对抗白内障的作用及其机理，为临床预防和治疗白内障提供确凿的实验依据。1 材料1.1 实验动物Wistar 雌性大鼠 140 只，体重 80 100 克，由浙江中医药大学动物中心提供。1.2 药品FS 1272 干粉（属于多肽类物质，上海新药开发中心，批号 060427），白
6、内停滴眼液（武汉远大制药集团有限公司，批号 060408），莎普爱思滴眼液（浙江平湖莎普爱思制药有限公司，批号 060105）。1.3 主要试剂亚硒酸钠（天津市天达净化材料精细化工厂，批号 060410）；M199 干粉（美国GiBCO 公司）；胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司，批号 060328）；MDA、SOD、GSH PX、CAT、考马斯亮兰试剂（南京建成生物工程研究所，批号060523）；其它试剂均为国产分析纯产品。2 实验方法2.1 培养液的制备与实验分组3在 M199 无血清培养液的基础上另加相应成分（胎牛血清除外），配成空白对照组、模型组、FS 1272 高剂量组、FS
7、1272 中剂量组、FS 1272 低剂量组、白内停组、莎普爱思组 7 种不同的培养液，完全溶解再过滤除菌，之后，加入已灭活过的胎牛血清使之最终浓度至 10；4冰箱分装保存。2.2 新鲜完整晶状体的制备颈椎脱臼法处死大鼠，迅速取出眼球，洗净，剔除肌肉等组织，75乙醇冲洗，青链霉素溶液（80 万 u/L）冲洗两次,将晶状体放入装有 37预热过的 M199 无血清培养液的青霉素小瓶中。在无菌室中超静台上用抗生素溶液清洗眼球，眼科剪由后路剪开眼球后壁，将巩膜向两侧分开，剥离晶状体，去净玻璃体，用 M199 无血清培养液冲洗两次，将晶状体后极向下，置入含 M199 有血清培养液 1.5ml 的24 孔
8、板中，每孔一枚。将 24 孔板置于 37、5培养箱中培养 8h 后，选取透明晶状体备用。2.3 分组、给药、培养将晶状体随机分为 7 组，分别放入上述 7 组含有不同培养液的培养板中。于37、5%CO2 细胞培养箱中培养，每 24h 更换 1 次培养液；于培养的24h、48h、72h 后观察晶状体混浊度，最后一次观察后检测晶状体相关生化指标。 2.4 晶体混浊度观察与记录培养 24h、48h、72h 后在倒置显微镜下各观察一次，记录晶体混浊情况，同时用尼康 4500 数码相机照相。晶体混浊度参照张家萍等10的标准分级，：晶体无混浊；：晶体轻度混浊，周边出现空泡；：晶体中度混浊，周边空泡向中心扩
9、4展，中心核出现雾状混浊；:晶体高度混浊，空泡扩展到核区，中心核雾状混浊加重；:晶体核混浊，白内障成熟。2.5 晶体生化指标测定取出培养 3d 后的各组晶状体,将每个晶体吸干水分，称重，立即将各晶体放入匀浆管内，加入适量生理盐水，冰浴下充分研磨 5min 制成 10%的晶体匀浆，备用。测定时将每组晶体分成两部分，一部分测定 SOD、CAT、MDA；另一部分测定GSH PX、WSP、WIP。严格按照试剂盒所示方法测定其含量。2.6 统计学处理数据以 xs 表示，对离体晶体混浊度观察结果用 Ridit 分析进行检验；生化测定结果用 SPSS 统计软件进行方差分析，P0.05、P0.01 为差异显著
10、性标志。3 结果3.1 FS 1272 滴眼液对离体晶体混浊度的影响在实验中我们发现，大鼠晶状体混浊首先从周边出现空泡开始，继而空泡向中心发展出现雾状混浊，最后核混浊，白内障成熟。培养 24 小时后，对照组晶状体全部透明，模型组晶状体多数处于、级混浊甚至发展到级混浊；FS 1272 滴眼液高剂量组多为、级混浊；中剂量组以级混浊为主，部分、级混浊；低剂量组以级混浊为主，小部分级混浊。培养 48、72 小时后，各组晶状体混浊继续向前发展，以模型组混浊最严重，均达级甚至级，FS 1272 滴眼液高、中、低剂量组混浊程度较模型组轻。5由表 1 可见，FS 1272 滴眼液具有治疗大鼠白内障的作用，且高
11、剂量组抗白内障作用优于中低剂量组。莎普爱斯、白内停也能治疗白内障。表 1 FS 1272 滴眼液对大鼠晶状体混浊度的影响（略）3.2 FS 1272 滴眼液对大鼠晶体 SOD、CAT、GSH PX 和 MDA 含量的的影响 由表 2 可见，FS 1272 滴眼液高、中、低剂量组晶体内 SOD、CAT、GSH PX活性明显高于模型组，而脂质过氧化产物 MDA 含量则明显低于模型组，表明FS 1272 滴眼液可提高大鼠晶体内抗氧化酶的活性，减少晶体氧化损伤。表 2 FS 1272 滴眼液对大鼠晶体 SOD、CAT、GSH PX 和 MDA 含量的影响（略）3.3 FS 1272 滴眼液对大鼠晶体可
12、溶性蛋白、不溶性蛋白含量的影响由表 3 可见，FS 1272 滴眼液高、中、低剂量组晶体内可溶性蛋白明显高于模型组，而不溶性蛋白含量则明显低于模型组，表明 FS 1272 滴眼液能延缓大鼠晶体内可溶性蛋白向不溶性蛋白的转化，从而达到治疗白内障的目的。表 3 FS 1272 滴眼液对大鼠晶体可溶性蛋白、不溶性蛋白含量的影响（略）4 讨论老年性白内障(SC)形成的主要因素是氧化损伤。晶状体的抗氧化防御系统主要包括酶促防御系统和非酶促防御系统。酶促防御系统主要包括 SOD、CAT 和GSH Px 等。晶状体中这些酶活性下降的同时，其抗氧化能力下降，自由基产生增加。Zarina 等11认为各种因素导致
13、眼内自由基增加后,WSP 被氧化形成高分子聚合物（HMW）等，随之出现 WIS，晶状体混浊，白内障形成。提高抗氧化酶的活性，减少自由基的产生，对于预防和治疗白内障具有极其重要的意义。6本实验研究表明亚硒酸钠诱发离体大鼠晶状体形成白内障，其机制与氧化损伤有关，其病变过程与老年性白内障基本相似。本实验采用倒置显微镜观察离体晶状体混浊度，结果显示 FS 1272 滴眼液高、中、低剂量组均能明显降低离体晶状体混浊度。晶体生化测定显示，FS 1272 滴眼液能提高大鼠晶状体内SOD、GSH PX、CAT 等抗氧化酶的活性,减少氧化产物 MDA 的产生,减轻晶体氧化损伤程度；FS 1272 滴眼液能减少可
14、溶性蛋白氧化损伤，减少不溶性蛋白的产生，有效阻止可溶性蛋白向不溶性蛋白转变有关。以上研究表明，FS 1272 滴眼液对实验大鼠亚硒酸钠白内障模型有明显的预防和治疗作用。【参考文献】1陈莺（综述），陈大本（审校）.白内障发病机制及预防治疗的研究进展J.眼科新进展，2005,25（2）：190 193.2J. Fielding Hejtmancika, Marc Kantorowb et al. Molecular genetics of age related cataractJ. Experimental Eye Research，2004(79): 3 9.3Shichi H.Catarac
15、t formation and preventionJ.Exp Opin Invest Druges，2004,13(6):691 701.4范莉琼，曹阳，等. 硒性白内障模型与人老年性白内障比较研究J. 眼科新进展，2005,25（3）248 250.5董东生，陆爱丽，刘莹等.体外培养大鼠白内障模型晶状体的早期生化改变J.中华眼科杂志，2000，36（5）：344 347.6李德馨.白内障发病机制与药物治疗J.沈阳药科大学学报，2002,19(4)：300.77郭勇，严宏.肌肽预防白内障形成的作用J.眼科学报，2006，22（2）：85 88.8杨炜.老年性白内障患者与脂质过氧化反应的研究J.眼科新进展,2000，20(2)：124.9张敏，刘奕志，黄强，等.水溶性及水不溶性晶状体蛋白质的研究J.眼科研究，2002，20（3）：202 204.10张家萍，侯伟敏.亚硒酸钠诱发大鼠白内障的研究J.生物化学杂志，1985，1(5，6)：15 21.11Zarina S Zhao HRAbraham EC.Advanced glycation end products in human senile and diabetic cataractous lensesJ.Mol Cell Biochem,2000,210:29.
