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1、1Med19 在人胃癌中的表达及其临床意义作者：丁相福 黄国民 李俊安 房学东【摘要】 目的 研究 Med19 基因在人胃癌组织中的表达情况及临床意义。方法 应用免疫组化和 RT PCR 方法检测 Med19 基因在胃癌组织、癌旁胃组织及正常胃组织中的表达。结果 胃癌组织中 Med19 表达阳性率为 71.7%（43/60），显著高于癌旁胃组织和正常胃组织（P0.01）。癌旁胃组织和正常胃组织中 Med19 多为阴性表达，少数为弱阳性表达，二者间差异无显著性（P 0.05）。Med19 的表达与胃癌的细胞分化程度、淋巴结转移情况、TNM 分期相关(P0.05)，而在不同年龄、性别、肿瘤大小、浸
2、润深度的胃癌样本中表达差异无显著性（P 0.05）。 结论 Med19 参与了胃癌的发生、发展过程，有望成为一个新的肿瘤治疗靶向因子。【关键词】 MED19；胃癌；基因表达胃癌的发生主要与癌基因的突变、扩增、过度表达以及抑癌基因的突变、失活等密切相关。中介体亚单位 Med19 亚基在人类中的同源基因为肺癌转移相关基因 LCMR1，目前对其功能研究较少。本研究观察胃癌组织中 Med19 蛋白的表达及其与临床病理特征的关系，探讨 Med19 表达与胃癌发生、发展的相关性。1 材料与方法1.1 对象与试剂60 例人胃癌组织标本来源于我院普外科，其中男 36 例，女 24 例，平均年龄58.2 岁，所
3、有标本均经病理证实为胃腺癌，且术前均未接受放疗和化疗。组织学检2查为正常胃黏膜者 20 例源于胃镜活检标本。病理类型：高分化腺癌 13 例，中分化腺癌 9 例，低分化腺癌 26 例，未分化癌 12 例。TNM 分期：期 8 例，期 13 例，期 19 例，期 20 例。本组 60 例均获临床随访，随访时间 4862 个月，患者生存时间 862 个月，中位生存时间 37 个月。主要试剂 Med19 购于美国 Cayman 公司，Med19 上游引物：5 TGACAGGCAGCACGAATC 3；下游引物： 5 CAGGTCAGGCAGGAAGTTAC 3。内参照基因 actin 引物序列：上游引
4、物： 5 CGAGAAGATGACCCAGATCA 3；下游引物： 5 GATCTTCATGAGGTAGTCAG 3；由上海生物工程有限公司合成。1.2 试验方法1.2.1 免疫组织化学方法检测 Med19 蛋白表达按 S P 免疫试剂盒说明书操作。阳性染色定位于肿瘤细胞胞核与胞浆，呈棕黄色颗粒状分布。在 400 倍视野下计数着色细胞占视野细胞总数的百分数，共计数 5 个视野，取平均值。肿瘤细胞阳性染色10%为阴性表达，10%为阳性表达。1.2.2 RT PCR 方法检测 Med19 mRNA 表达20 例手术切除的新鲜胃癌组织和对应癌旁胃组织及正常胃组织置于液氮中冻存备用。提取 mRNA 进
5、行定量和定性分析。RT PCR：采用 Trizol 一步法抽提胃癌组织总 RNA，经 DNA 酶消化后逆转录。逆转录和 PCR 均设阴性对照。设定程序为两步法实时定量。预变性 95，15 s；之后每一步变性 95，5 s；退火延伸60，30 s；共进行 45 个循环。每次在延伸阶段读取吸光值。PCR 结束后，在 95变性 1 min。然后冷却至 55，使 DNA 双链充分结合。从 55开始到 95，每一步增加 0.5，保持 4 s，同时读取吸光值。31.3 统计学处理采用 SPSS16.0 统计软件分析，数据以 xs 表示，两均数间的比较采用配对 t检验；多组均数比较采用单因素或多因素方差分析
6、。2 结 果2.1 Med19 蛋白的表达 阳性表达颗粒呈棕黄色，主要定位于肿瘤细胞胞浆和胞核内，尤其是癌灶边缘的内皮细胞及少量间质细胞也可呈弱阳性表达。染色存在异质性，即在不同组织和区域染色强度及染色面积不相同。胃癌组织中 Med19 表达阳性率为71.7%（43/60），显著高于癌旁胃组织和正常胃组织（P0.01）。癌旁胃组织和正常胃组织中 Med19 多为阴性表达，少数为弱阳性表达，二者间差异无显著性（P 0.05）。见表 1、图 1。表 1 Med19 在各组胃组织中的表达n(略) 2.2 Med19 表达与临床病理特征的关系Med19 蛋白的表达与胃癌的细胞分化程度、淋巴结转移情况、
7、TNM 分期相关(P0.05)，而在不同年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度的胃癌样本中表达差异无显著性（P 0.05）。见表 2。表 2 胃癌 Med19 蛋白表达与临床病理特征的关系（略） 2.3 各组胃组织中 Med19 mRNA 的表达图 2 为不同样本的 RNA 抽提物电泳结果，可见胃癌组织标本的总 RNA 中 18 S、28 S 条带很清晰，并有连续的 mRNA 拖带，而未见 DNA 条带，表明 RNA 没有4降解。2.4 RT PCR 反应扩增 Med19 mRNA采用 2 CT 法，以胃癌癌旁组织为参照，胃癌组织中 Med19 mRNA 表达高于癌旁组织和正常胃组织（P0.05）。见
8、表 3。表 3 各组 Med19 mRNA 含量的比较(略)3 讨 论RNA 聚合酶是三大 RNA 聚合酶之一，存在于基因转录装置的核心位置，编码蛋白质基因的转录受到 RNA 聚合酶的调控。转录起始的精确性于核心启动子元件，而某些基因和组织特异的 DNA 结合转录激活与中介体密切相关。Med19（Rox3）是中介体的一个亚单位，在转录激活和抑制中发挥重要作用，最初是在研究 CYC7 基因突变体中发现的1。Med19 基因刚开始发现时被认为是必需基因编码的蛋白产物，后来逐渐发现了缺失 med19 基因的酵母菌株，并且Med19 基因突变会阻碍 Gal4 和 Gcn4 诱导的基因活化作用2，3，B
9、aidoobonso 等4研究发现 Med19 在中介体复合物各部分内在相互作用中起着重要的调控作用，Ding 等5研究小组发现 Med19/Med26 在中介体复合物促进 RE1 沉默转录因子诱导的神经基因表观沉默过程中发挥重要作用。中介体 Med19 在基因转录过程中具有重要功能，与细胞的生长和周期调控关系紧密，因此本研究首先对 Med19 基因在胃癌组织中的表达进行了研究。本实验显示，Med19 蛋白在胃癌组织中呈异常的阳性表达，60 例胃癌组织Med19 阳性率为 71.7%；而癌旁胃组织和正常胃组织中均少量表达，分别为 30%和 15%。癌旁组织是光镜下处于癌组织周边，而形态结构正常
10、的组织，Med19 在5癌旁组织中高表达，在正常组织低表达，说明它由肿瘤组织产生，可能参与胃癌的发生。癌旁组织处于癌前病变时期，受到肿瘤组织分泌蛋白的作用，Med19 呈现一定程度的表达。Med19 在癌组织中的作用可能是刺激肿瘤细胞恶性增殖，促进肿瘤浸润性生长，其表达上调可能作为胃癌发生的一种早期标志。本实验发现胃癌中 Med19 表达与胃癌的肿瘤大小、细胞分化程度、TNM 分期相关(P0.05)，而与年龄、性别、浸润深度、淋巴结转移情况无关(P0.05)。Med19 表达在肿瘤较大、组织分化差、TNM 分期高者明显高于肿瘤小、高分化和低 TNM 分期者。同时本研究用荧光实时定量 PCR 方
11、法观察 Med19 mRNA 在胃癌组织、癌旁组织和正常胃组织中的表达状况。结果显示，胃癌组织中 Med19 mRNA 比癌旁组织和正常胃组织表达量增高。以上结果从 mRNA 转录水平和蛋白翻译水平上表明 Med19 参与了胃癌的发生、发展过程，有望成为一个新的肿瘤治疗靶向因子。【参考文献】1 Samuelsen CO, Baraznenok V, Khorosjutina O, et al. TRAP230/ARC240 and TaRAP240 /ARC250 mediator subunits are functionally conserved through evolutionJ.
12、Pro Nat Acad Sci USA, 2003;100:6422 7.2 Brown TA, Evangelista C, Trumpower BL. Regulation of nuclear genes encoding mitochondrial proteins in saccharomyces cerevisiaeJ. J Bacteriol, 1995;177(23):6836 43.3 Qiu H, Hu C, Yoon S, et al. An array of coactivators is required for optimal recruitment of TAT
13、A binding p rotein and RNA polymerase by promoter bound Gcn4pJ. Mol Cell Biol,2004;24:4104 17.4 Baidoobonso SM, Guidi BW, Myers LC. Med19(Rox3) regulates intermodule interactions in the saccharomyces cerevisiae mediator complexJ. JBC, 2007;282(8):5551 9.5 Ding N, Tomomori Sato C, Sato S, et al. MED19 and MED26 are synergistic 6functional targets of the RE1 silencing transcription factor in epigenetic silencing of neuronal gene expressionJ. JBC, 2009;284(5):2648 56.
