《MTA1在化疗后骨肉瘤中的表达及其与预后的关系》由会员分享，可在线阅读，更多相关《MTA1在化疗后骨肉瘤中的表达及其与预后的关系（5页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1MTA1 在化疗后骨肉瘤中的表达及其与预 后的关系【摘要】 目的研究化疗后骨肉瘤组织中残存肿瘤细胞中肿瘤转移相关基因1(metastasis associated 1，MTA1)的表达在骨肉瘤发生、发展中的作用及其生物学意义，探讨化疗后骨肉瘤中 MTA1 的表达与骨肉瘤患者预后之间的关系。方法 采用免疫组织化学 SP 法，检测 31 例化疗后骨肉瘤组织中 MTA1 的表达。并应用统计学方法分析其与预后的关系。结果统计学分析显示化疗后 MTA1 的阳性表达率为 54.84%，其表达与患者的性别、年龄、发病部位、发病-就诊时间及肿瘤的体积无相关性。通过对所有病人随访结果的对比分析，发现 MTA1
2、 阳性表达的预后良好率为 35.29%(6/17)，明显低于阴性表达组(78.57%，11/17，P=0.016)。结论MTA1 表达阳性的患者预后差，它反映了化疗后残存骨肉瘤细胞侵袭、转移的生物学活性;检测 MTA1 的表达可作为判断骨肉瘤患者预后的参考指标。 【关键词】 骨肉瘤; 新辅助化疗; MTA1; 预后Abstract: ObjectiveTo discuss the clinical and the biological significance of the expression of residual tumor cells MTA1 in the occurrence an
3、d progression of osteosarcoma after chemotherapy, and to investigate the correlation between MTA1 expression and the prognosis in osteosarcoma patients. MethodSP immunohistochemical technique was used to detect the expression of MTA1 in the residual tumor cells from 31 osteosarcoma patients after ch
4、emotherapy.ResultAmong 17 patients with positive MTA1 expression, 6 had good prognosis (35.29%); and among 14 patients with negative MTA1 expression, 11 had good prognosis (78.57%). There were significant differences between groups (P0.05).ConclusionThe MTA1 expression in osteosarcoma after chemothe
5、rapy could reflect the invasive, metastatic biological activities of the residual tumor cells. It is helpful to detect MTA1 expression for the prognosis of patients with osteosarcoma.Key words：osteosarcoma; neoadjuvant chemotherapy; MTA1; prognosis2肿瘤转移相关基因 1(metastasis associated 1，MTA1)是新近发现的一个肿瘤转
6、移相关基因，其表达与许多恶性肿瘤的浸润转移能力呈正相关1。为探讨骨肉瘤化疗后 MTA1 基因的表达与病人预后的关系，本研究采用免疫组织化学方法，检测 MTA1 蛋白在 31 例化疗后病人手术切除骨肉瘤组织中的表达，并分析其与预后的关系。1 材料与方法1.1 标本选择及切片 所选病例符合以下标准：在济南军区总医院骨病科经穿刺或切开活检，病理组织学证实为骨肉瘤;治疗前经胸片、CT 扫描排除远处转移，Enneking 分期均为B 期的肢体骨肉瘤;入院前未行任何治疗;随机应用 MMIA 和 DDP-IFO-ADM 两种化疗方案系统治疗，术前行 2 个疗程化疗，手术切除肿瘤组织;有化疗前后病理标本且免疫
7、组化染色后无脱片。按上述标准选择济南军区总医院骨病科 1999 年 1 月2005 年 12 月诊断为骨肉瘤资料完整的31 例患者。所有标本经常规甲醛固定、石蜡包埋。每例组织蜡块 4 m 连续切片10 张，1 张切片 HE 染色作光镜下诊断复查，另 1 张切片作 MTA1 免疫组织化学染色，其余备用。1.2 临床资料 本组男 14 例，女 17 例;平均年龄 15.4 岁(629 岁)。病变部位：股骨远端 16 例，胫骨近端 13 例，肱骨近端 1 例，腓骨近端 1 例。所有诊断均经病理组织学证实。参照 Enneking 外科分期，均为b 期。手术方式和例数：保留骨骺的瘤段骨切除灭活再植术 5
8、 例2、瘤段骨切除灭活再植术 13 例、瘤段骨切除特制肿瘤型人工假体置换术 9 例、瘤段骨切除同侧锁骨反转代肱骨术 1 例、肿瘤扩大切除术 1 例、髋关节离断术 1 例、瘤段骨切除灭活同时行特制肿瘤型人工假体置换术 1 例。随机应用 MMIA 和 DDP-IFO-ADM 两种化疗方案系统治疗，2 疗程后3行外科手术。所有患者均获得随访，平均随访 24.7 个月(569 个月)。随访期内死亡 8 例，其中 7 例为肺转移或复发后肺转移患者，1 例死于化疗并发症脑出血。另外肺转移带瘤生存 2 例，局部复发 4 例，其中再次行肿瘤扩大切除 2 例，根治性切除 2 例，随访 544 个月正常。本研究将
9、随访期发生肺转移、肿瘤复发及其他原因引起死亡的病例均归为预后不良组，其余病人为预后良好组。1.3 试剂及来源 一抗为浓缩型山羊抗人 MTA1 多克隆抗体，为 Santa Cruz 公司产品。即用型 SP 超敏试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司，严格按 SP 法步骤操作。用 PBS 液代替一抗作为阴性对照，已知阳性标本作阳性对照。1.4 免疫组织化学染色 采用 SP 法，常规脱蜡至水化，以枸橼酸盐缓冲液微波炉抗原修复法修复抗原，一抗工作浓度是 1500，用 PBS 液稀释，其他步骤均严格按照说明书操作。1.5 结果判断 MTA1 蛋白主要表达于细胞核及细胞浆3,其阳性细胞的标志为细胞核出现棕黄
10、色着色。对每例切片随机选择 10 个高倍视野(1040)，每个视野下数 100 个细胞，总计 1 000 个肿瘤细胞，根据细胞阳性的比例进行判断：阳性细胞比率10%为阳性(+)表达，10%为阴性(-)表达。1.6 统计学方法 采用 SPSS 10.0 软件行 x2 检验。2 结果MTA1 蛋白主要在细胞核表达，部分细胞胞浆也呈阳性反应，呈棕黄色颗粒状(见图 1)。根据前述 MTA1 阳性的分析判定标准，本组病例中 17 例为阳性表达，414 例为阴性表达，阳性表达率为 54.84%。经统计学分析，发现化疗后 MTA1 的阳性表达与患者的性别、发病部位、发病-就诊时间无相关性(P=0.092;0
11、.058;0.624);骨肉瘤患者的年龄、肿瘤的体积与 MTA1 的表达同样无相关性(t=-1.269，P=0.214;t=1.132，P=0.270)。图 1a 化疗后骨肉瘤细胞中 MTA1 呈阴性表达 400图 1b 化疗后骨肉瘤细胞中 MTA1 呈阳性表达 400 本组病例中骨肉瘤术后MTA1 的阳性表达组中预后良好率为 35.29%(6/17)，明显低于阴性表达组的预后良好率，有显著性差异(78.57%，11/14，P=0.016)详见表 1。表 1 MTA1 表达与骨肉瘤患者预后的关系 3 讨论恶性肿瘤的浸润转移是其导致患者死亡的主要原因，也是临床治疗最棘手的问题，因而参与调控肿瘤浸
12、润转移基因的研究一直是一个热点。MTA1 是一个被证实的与肿瘤转移相关的基因，它与许多恶性肿瘤的浸润转移密切相关，如乳腺癌、食道癌、肝癌1、4、5等。但它是否与骨肉瘤有同样的关系，目前尚不明确。有研究表明，在体外高转移性骨肉瘤细胞株表达 MTA1 的水平明显高于低转移性细胞株;低转移性细胞株在转染 mta1 后其侵袭能力呈显著性增强6。1994 年 Toh 等应用差异 cDNA 文库筛选(differential cDNA library screening)方法，从 13762NF 大鼠乳腺癌转移系统筛选克隆出候选转移相关基因 mtal，Nawa等7在人类高转移性乳腺癌细胞株中发现 mtal
13、 相关序列 MTA1。应用荧光原位杂交方法发现人 mta1 基因定位于染色体 14q32.38 ，其编码的蛋白质含 715 个氨基酸残基，分子量 8.14 万 u，在羧基端 696705 处有一富含脯氨酸的支链，与SH3(the src homology3 domains)结合域序列一致。SH3 结合域参与信号传导通路5中蛋白间相互作用的调控，并参与调控细胞骨架成份蛋白，提示 MTA1 蛋白可能参与调控信号传导通路及细胞骨架成份蛋白。此外，人 MTA1 蛋白还含有一锌指DNA 结合域 Cys-X2-Cys-X17-X2-Cys(在 393 残基处)、一亮氨酸拉链结构域(在251 残基处)和许多
14、 SPXX 域，这些结构常见于基因调节蛋白和 DNA 结合蛋白中。在 MTA1 氨基酸残基末端，有 2 个高酸性区域，这些负电荷区域是许多转录因子酸性转录激活域的特征。在 MTA1 蛋白分子中还有一些蛋白与蛋白、蛋白与 DNA相互作用的结构域，如 BAH 结构域(bromo-adjacent homology domain)、SANT 结构域(SWI3，ADA2，N-CoR and TFIIIB DNA-binding domain)、GATA 样锌指模体7。这些结构可能有助于恶性肿瘤的浸润转移。MTA1 促进恶性肿瘤转移的分子机制可能与组蛋白去乙酰化转录调节有关。组蛋白末端乙酰化能中和组蛋白
15、中的阳离子，从而降低 DNA 与乙酰化区域的结合，打开染色质结构，促进转录;相反，组蛋白去乙酰化使染色质结构变得紧密，抑制转录。研究表明，MTA1 作为 NuRD 的一个亚单位9，与组蛋白去乙酰化成正相关。作为组蛋白去乙酰化酶的辅助激动因子抑制转录，成为转录过程中一个辅助抑制因子，实现其对下游基因的调控。另外，在 MTA1 蛋白结构分析中，已知MTA1 蛋白具有磷酸化位点和 SH3 结合位点，可与细胞内一些蛋白相互作用，参与信号转导从而调控与侵润转移有关的蛋白质的表达，细胞侵袭转移还往往涉及细胞骨架重塑、细胞表面黏附分子的改变、细胞形状的改变。在胰腺癌中，mta1 转染的胰腺癌细胞动力和穿过上
16、皮层的侵袭能力增加10。观察发现，MTA1 可以显著改变胰腺癌细胞角蛋白丝系统的组装及细胞骨架蛋白的定位，并使细胞获得更具侵袭性和转移性的表型。但在其他恶性肿瘤尤其是骨肉瘤细胞中，MTA1 是否也能使细胞骨架发生改变而促进细胞侵袭转移，还有待于进一步研究。MTA1 可6以通过以上这些机制实现其促进肿瘤浸润、转移的目的。因此，MTA1 可成为一个能比较准确地预测恶性肿瘤浸润转移的指标。目前已有很多文献报道 mtal/MTA1 基因的 mRNA 表达水平与一些上皮源性恶性肿瘤的转移或浸润潜能有关，如乳腺癌、卵巢癌、食管癌、贲门癌等3、11。关于 mtal/MTA1 基因与骨肉瘤的复发或转移的报道较少，有关其在化疗后骨肉瘤中表达的研究国内外未见报道。李新志等5通过应用半定量 RT-PCR 检测高转移性骨肉瘤细胞株和低转移性骨肉瘤细胞株中 MTA1 的表达水平，发现高转移性骨肉瘤细胞株中 MTA1 的表达水平明显高于低转移性骨肉瘤细胞株，有统计学意义，表明
