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1、1cyclinD1、P27 在非小细胞肺癌中的表 达及其临床意义【摘要】 目的 探讨细胞周期素 D1(cyclinD1)和 P27 在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其临床意义。方法 应用 SP 法对 56 例 NSCLC 进行 cyclinD1 和 P27蛋白检测。结果 cyclinD1 和 P27 蛋白表达与 NSCLC 的组织分化程度、淋巴结转移和临床分期有关，且两者在 NSCLC 中的表达呈负相关(P0.05)。结论 cyclinD1 的高表达和 P27 的低表达在 NSCLC 的发生发展中起重要作用，两者的联合检测有可能作为判断 NSCLC 恶性程度和预后的生物学指标。 【关键词
2、】 非小细胞肺癌 细胞周期素 D1 P27 免疫组织化学 病理学 临床 Abstract: Objective To investigate the expressions of cyclinD1 and P27 protein in non-small cell lung cancer (NSCLC) and their clinical significance. Methods 56 NSCLC were detected by immunohistochemical technique (streptavidin-peroxydase) for the expression of cy
3、clinD1 and P27 protein. Results The expressions of P27 and cyclinD1 were closely related to the histodifferentiation, lymphatic metastasis and clinical stages. The expression of cyclinD1 was negatively correlated with that of P27 (P0.05). Conclusions The high expression of P27 and low expression of
4、cyclinD1 may play an important role in the pathogenesis and progression of NSCLC. Detection of cyclinD1 and P27 can be used as a biological marker to assess the malignancy and prognosis of NSCLC. Key words: non-small cell lung cancer; cyclinD1; P27; immunohistochemistry；pathology,clinical 肺癌在我国的发病率和
5、病死率日渐增高，是我国发病率最高的恶性肿瘤，其中非小细胞肺癌（NSCLC）在肺癌中比例较高。研究发现，肺癌的发生是一个长时间、多因素、多步骤逐步演进的复杂的生物学过程，细胞周期紊乱、细胞失控性生长是肺癌发生的主要机制之一1。本实验采用免疫组织化学 SP 法检测 NSCLC 中细胞周期素 D1（cyclinD1）及其调节因子 P27 的表达,并探讨两者在 NSCLC 发生、发展过程中的作用及临床病理意义。 1 材料和方法 21.1 材料 收集 56 例 NSCLC 患者手术切除标本存档蜡块,取自徐州医学院附属医院。均具备完整资料，其中男性 42 例,女性 14 例，年龄 3275 岁，中位年龄5
6、7.1 岁。根据李维华肺癌的分化表型分类方法2分为鳞癌 16 例、腺癌 24 例、类癌 4 例、肺泡细胞癌 12 例。TNM 分期采用 1997 年 UICC 肺癌国际分期标准：-期 24 例，-期 32 例。取远离肿瘤的正常肺组织 10 例作为对照组。标本均经 10%甲醛固定，石蜡包埋切片，苏木精-伊红染色。 1.2 试剂及方法 鼠抗人 cyclinD1 单克隆抗体、鼠抗人 P27 单克隆抗体、链霉素抗生物素-过氧化物酶免疫组化超敏试剂盒（UltraSensitiveTMS-P Kit 即用型）均购自福州迈新生物技术有限公司。按 SP 试剂盒说明书操作，用已知阳性片和 PBS代替一抗分别作为
7、阳性和阴性对照。 1.3 结果判断标准 cyclinD1 和 P27 阳性表达产物为突出于背景的棕黄色或棕褐色细颗粒，定位于细胞核。凡阳性细胞数5%者为阳性。 1.4 统计学处理 采用 STATA 7.0 统计软件包处理。计量资料的比较采用 t 检验，cyclinD1 和 P27 阳性表达率的比较采用 2 检验或确切概率法，两者表达与NSCLC 临床特征的关系用秩和检验，生存曲线采用 Kaplan-Meier 法,生存率的比较采用 Mantel-Haenszel 检验。检验水准：=0.05。 2 结 果 cyclinD1、P27 在 NSCLC 和正常肺组织中的表达及与临床病理参数的关系见表
8、1。本组中 cyclinD1、P27 的表达强弱与 NSCLC 的分化程度、TNM 分期及淋巴结转移明显相关（P0.05），与患者性别、年龄、组织学类型无明显关系。在高分化型、中晚期和伴有淋巴结转移的 NSCLC 中 cyclinD1 显著高表达，而 P27 蛋白表达强度降低，差异具有统计学意义(P0.05 或 P0.01)。此外，实验结果显示，3cyclinD1、P27 的表达无论在 NSCLC 组织分化程度、有无淋巴结转移还是 TNM分期上，二者之间呈负相关(r=-0.214，P0.05)。表 1 NSCLC 中 cyclinD1 和 P27蛋白的表达及其与临床病理参数的关系 2.2 cy
9、clinD1、P27 蛋白与 NSCLC 患者预后的关系 Kaplan-Meier 法生存曲线显示，P27 阳性组患者生存率高于阴性组，cyclinD1 阳性组患者生存率低于阴性组，差异有显著性(P0.05，P0.01)。见图 1。 3 讨 论 NSCLC 的发生、临床诊断、治疗和患者预后与小细胞肺癌（SCLC）差异显著，常常表现为肿瘤恶性程度高、易于早期转移、患者生存率低等特点。本实验主要从肿瘤细胞周期方面，分析 NSCLC 与 cyclinD1、P27 的关系，寻找 NSCLC 发生发展的分子机制，探索影响 NSCLC 预后的关键因素，为 NSCLC 的诊断、治疗及预后判断提供理论依据。
10、肺癌的发生与肿瘤细胞周期调控异常密切相关。cyclinD1 定位于染色体 11q13 扩增区域, 编码大约 295 个氨基酸序列，是与细胞周期中 G1 期调控有关的蛋白,被认为是癌基因3。在细胞由 G1 期向 S 期转化的过程中,cyclinD1 可与细胞周期素激酶 CDK4/CDK6 结合，形成 cyclin/CDK 复合物，激活 Rb 蛋白,启动细胞 S期相关基因的转录,使细胞进入自主分裂增殖程序。研究发现 NSCLC 中 cyclinD1常常过表达，导致细胞周期启动异常,引起细胞持续性恶性增殖4。Wang 等5的研究表明 cyclinD1 与 NSCLC 的转移和预后不良有关，认为 cy
11、clinD1 是NSCLC 发生的晚期事件，可以作为判断 NSCLC 的预后指标之一。本实验结果显示 cyclinD1 在 NSCLC 过表达，显著高于癌旁肺组织，而且显示 cyclinD1 的过表达与 NSCLC 的分化程度、淋巴结转移、TNM 分期呈正相关，与 Yoo 等6报道相符。 4P27 蛋白是细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制物(CDKI)家族成员之一,是一种新型候选抑癌基因7。研究发现，P27 在细胞增殖过程的 G1/S 转换中发挥作用,它可以特异性结合 cyclinD-CDK4(CDK6)、cyclinA-CDK2 及 cyclinE2-CDK2 等在 S期具有活性的细胞周期素复合物
12、及其单体,抑制 cyclin/CDK 复合物的活性,阻滞Rb 蛋白的磷酸化，对细胞周期进行负调节，与肿瘤的发生密切相关8。Lindberg等9的研究发现 P27 基因突变在肿瘤的发生过程中是稀有事件,P27 与肿瘤的关系主要体现在其蛋白水平上,表现为 P27 蛋白的减少或缺失。P27 蛋白的下降，降低了 P27 对正性细胞周期调控蛋白的抑制效应,导致细胞增殖过度,发生肿瘤10。本研究发现，P27 在癌旁肺组织呈现高表达，而在 56 例 NSCLC 中阳性率仅为 17.9%；进一步研究其与 NSCLC 各临床病理因素的关系发现，P27 与 NSCLC的细胞分化、恶性程度、早期转移及 TNM 分期
13、有关，且呈负相关。揭示其作用机制可能为：P27 低表达削弱了抑制 cyclin/CDK 或其单体活性的作用,诱导了肿瘤细胞周期进展，加速了肿瘤细胞由 G1 期向 S 期的转换，促进肿瘤发展。 此外本实验还发现，NSCLC 中 cyclinD1 与 P27 蛋白的表达呈负相关(r=-0.214，P0.05)，说明 P27 蛋白的表达下降与 cyclinD1 的过表达密切相关，在NSCLC 的发生中有偶联作用，与李蓓等11的研究结果一致，反映了肿瘤的恶性程度较高,预后较差。同时 Mantel-Haenszel 检验发现 cyclinD1 高表达、P27 低表达患者的生存率显著下降，提示联合检测 c
14、yclinD1 和 P27 可作为判断 NSCLC 预后的生物学指标。 【参考文献】 1 Papay J, Krenacs T, Moldvay J, et al. Immunophenotypic profiling of nonsmall cell lung cancer progression using the tissue microarray approach J. Appl Immunohistochem Mol Morphol, 2007, 15(1): 19-30. 2 刘复生，李维华. 中国肿瘤病理学分类M. 北京：科学技术文献出版社，52001：99-100. 3 Tak
15、ebayashi T, Higashi H, Sudo H, et al. NF-kappaB dependent induction of CyclinD1 by retinoblastoma protein (pRB) family proteins and tumor-derived pRB mutants J. J Biol Chem, 2003, 278(17):14897-14905. 4 Reed MF, Zagorski WA, Knudsen ES, et al. RB activity alters checkpoint response and chemosensitiv
16、ity in lung cancer lines J. J Surg Res, 2007, 142(2):364- 372. 5 Wang J, Miao LJ, Wu YM, et al. Expression of AKT2, cyclinD1, and MMP-9 and their correlations to clinicopathologic features of non-small cell lung cancer J. Ai Zheng, 2006,25(1):69-72. 6 Yoo J, Jung JH, Lee MA, et al. Immunohistochemical analysis of non-small cell lung cancer: correlation with clinical parameters and prognosis J. J Korean Med Sci, 2007,22(2):
