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1、1p57kip2 和 cyclin D2 在人脑胶质瘤中 的表达和临床意义【摘要】 目的： 探讨 p57kip2 蛋白和 Cyclin D2 蛋白在人脑胶质瘤中的表达情况及其临床意义. 方法： 采用免疫组织化学 SP 法检测 p57kip2, Cyclin D2 在 55例人脑胶质瘤和 10 例正常脑组织中的表达. 结果： 在 55 例胶质瘤中，p57kip2 蛋白阳性率为 38.2%(21/55)，低于正常脑组织(80%，P0.05). 低度恶性(III 级)与高度恶性(IIIIV 级)间及不同生存时间组间阳性率差异有统计学意义(P0.05). Cyclin D2 蛋白阳性率为 52.7%(
2、29/55)，高于正常脑组织(0%，P0.01). 脑胶质瘤不同恶性程度组间阳性率差异有统计学意义(P0.05)，不同生存时间组间差异无统计学意义（P0.05）. p57kip2 蛋白的表达与 Cyclin D2 蛋白的表达无相关(P0.05). 结论： p57kip2 蛋白和 Cyclin D2 蛋白在脑胶质瘤的发生、发展中起重要作用. 且与肿瘤的分化程度,预后相关. 【关键词】 p57kip2 蛋白；Cyclin D2 蛋白；神经胶质瘤；免疫组织化学 【Abstract】 AIM: To investigate the expressions of p57kip2 and cyclin D
3、2 proteins in human glioma and their clinical significances. METHODS: The expressions of p57kip2 and cyclin D2 proteins in glioma tissues from 55 patients and normal brain tissues of 10 subjects were detected with SP immunohistochemical technique. RESULTS: The positive rate of p57kip2 protein in gli
4、oma tissues was 38.2% (21/55), lower than that in normal brain tissues (80%, P0.05), and it was statistically different between low and high grade malignant gliomas (I II vs III IV) and between different length of survival time (P0.05). The positive rate of cyclin D2 protein was 52.7% (29/55), highe
5、r than that in normal brain tissue (0%, P0.01), and it was significantly correlated with the grade of malignance (P0.05), but not with the two year survival time (P0.05). The expression of p57kip2 protein was found not related to the expression of cyclin D2 protein (P0.05). CONCLUSION: Both p57kip2
6、and cyclin D2 proteins play important roles in the genesis and development of human glioma. Furthermore, their expressions are correlated with the differentiation and prognosis of the glioma. 【Keywords】p57kip2 protein; cyclin D2 protein; glioma; immunohistochemistry 20 引言 近来研究表明，细胞周期调控异常与细胞癌变密切相关. 并
7、有人认为肿瘤可能是细胞周期疾病(Cell cycle diseased)，使细胞周期调控异常与肿瘤的关系成为肿瘤学研究的热点问题1. 新近发现的 p57kip2 是细胞周期 G1/S 期的重要调控因子，与多种肿瘤的发生、发展有关2-3. 但 p57kip2 蛋白的表达与脑胶质瘤的关系以及 p57kip2 蛋白与 Cyclin D2 蛋白在脑胶质瘤发生发展中的关系目前尚不清楚，本文拟应用免疫组织化学技术，探讨蛋白 p57kip2, Cyclin D2 在脑胶质瘤组织和正常脑组织中以及不同生存期的脑胶质瘤组织中的表达和意义. 1 材料和方法 1.1 材料 西安交通大学医学院第二附属医院 2002/
8、2004 手术存档 55 例脑胶质瘤石蜡标本，均经病理诊断证实. 男 28 例，女 27 例，年龄 471（平均 40.1）岁，生存时间2 年 31 例，2 年 24 例. 根据 2000 年修改的 WHO 神经系统肿瘤分类标准，对所有肿瘤进行组织学分类和分级： I 级 12 例，II 级 17 例，III 级 18 例，IV 级 8例. 另 10 例正常对照脑组织取自我院因颅脑损伤行内减压术的患者. 所有患者均未经过放化疗. 鼠抗人 p57kip2 单克隆抗体(NeoMarkers 公司,1400) ,鼠抗人Cyclin D2 单克隆抗体（Cell signaling 公司，150）,广谱
9、SP 试剂盒购自深圳晶美生物技术有限公司. 1.2 方法采用链酶素抗生物素 过氧化物酶连接法(SP 法)检测蛋白表达. 每次试验以 PBS 代替一抗作为空白对照，由试剂公司提供阳性对照片. 实验操作按试剂盒说明书进行. p57kip2 蛋白以胞核染色为棕褐色颗粒者为阳性反应细胞，Cyclin D2 蛋白以胞核或胞浆染色为棕褐色为阳性反应细胞. 400 倍显微镜下每张载玻片计数 500 个细胞，依据染色阳性细胞数，计算阳性细胞所占百分比：阴性：10 %（-）；弱阳性：10 %25 %为(+)；阳性：26 %50 %为( )；强阳性：50 %为( ). 3统计学处理：应用 SPSS 11.5 统计
10、软件进行分析. 用 2 检验、校正 2 检验，Spearman 等级相关分析，P0.05 有统计学差异. 2 结果 2.1p57kip2，Cyclin D2 蛋白在脑胶质瘤中的表达 p57kip2 在人脑胶质瘤中的蛋白阳性着色主要定位于细胞核，但在胞核和胞浆中均有表达. Cyclin D2 在人脑胶质瘤中的蛋白阳性着色主要定位于细胞浆，但在胞核和胞浆中均有表达（图 1，表 1） .表 1p57kip2 和 Cyclin D2 在脑胶质瘤和正常脑组织中的表达(略) 2.2p57kip2 与 Cyclin D2 表达之间的关系 脑胶质瘤中 p57kip2 与 Cyclin D2 的表达无相关性(r
11、s =-0.075, P0.05，表 2). 表 2p57kip2 和 Cyclin D2 在脑胶质瘤中表达（略） 3 讨论 本研究显示，脑胶质瘤中 p57kip2 表达阳性率低于正常脑组织(P0.05)，提示 p57kip2 蛋白的表达缺失与脑胶质瘤分化程度有关，p57kip2 在人脑胶质瘤发生、发展过程中起重要作用，并且其作用强度主要决定于 p57kip2 蛋白表达水平的改变. 在包括对肝癌的多种肿瘤的研究中发现4-7，p57kip2 蛋白表达下降与肿瘤患者预后差有关，可作为一独立预后指标,但在人脑胶质瘤中尚未见报道. 本研究中，p57kip2 蛋白阳性表达组与 p57kip2 蛋白阴性表
12、达组患者两年生存率差异有统计学意义(P0.05)，提示 p57kip2 蛋白的表达与脑胶质瘤的预后有关，可能成为预测预后的指标之一. Cyclin D2 基因位于人染色体 12p13 区位，是一类细胞周期正性调节蛋白，其产物 Cyclin D2 蛋白与 CDK4/6 形成活性复合物，Cyclin D2/CDK4/6 参与 G1 期和 S 期的 pRb 磷酸化作用，能加速 S 期，对 DNA4复制的启动十分重要. 现有研究发现，Cyclin D2 在多种肿瘤中被过度表达，其中包括胰腺癌、子宫癌、乳腺癌、胃癌等8-10. 赵明等11实验发现，正常脑组织中无 Cyclin D2 的表达，而各病理等级
13、的脑胶质瘤中均存在 cyclin D2 表达，并随肿瘤恶性程度增高而升高，低恶性度胶质瘤(I,II 级)和高恶性度胶质瘤(III, IV 级)之间广泛存在统计学差异，这提示 cyclin D2 在胶质瘤中发挥重要的正性调控作用. 细胞增生周期中，p57 是一负性调节信号，Cyclin D2 是一正性调节信号，二者共同作用于细胞周期 G1/S 期节点. 本研究提示 p57kip2 蛋白的表达缺失与Cyclin D2 蛋白的过表达可能通过不同的机制分别促进 G1/S 期的进展，导致脑胶质瘤的发生. 对 p57kip2 和 cyclin D2 的生物学功能及其机制不完全清楚，但现有研究结果已经初步显
14、示出其与肿瘤的发生与发展存在着密切联系. 深入研究p57kip2 蛋白与 Cyclin D2 蛋白在脑胶质瘤的发生、发展中的作用机制，不仅能够加深对细胞周期网状调节机制的理解,而且将为脑胶质瘤的治疗提供新的思路. 【参考文献】 1Sherr CJ . Cancer cell cycles J. Science, 1996,274(5293):1672-1677. 2Ito Y, Yoshida H , Nakano K, et al . Expression of p57/ Kip2 protein in normal and neoplastic thyroid tissuesJ . Int
15、 J Mol Med, 2002,9 (4) :373-376. 3Ito Y, Takeda T, Sasaki Y, et al. Expression of p57/ Kip2 protein in extrahepatic bile duct carcinoma and intrahepatic cholangiocellular carcinomaJ . Liver, 2002,22(2):145-149. 4Lee MH , Reynisdottir I, Massague J. Cloning of p57kip2, a cyclin dependent kinase inhib
16、itor with unique domain instructure and tissued distributionJ . Genes Dev ,1995 ,9 (6) :639-649. 5Lai S, Goepfert H, Gillenwater AM, et al. Loss of imprinting and genetic alterations of the cyclin dependent kinase inhibitor p57KIP2 gene in head and neck squamous cell carcinomaJ. Clin Cancer Res, 2000,6(8):3172-3176. 56Matsuoka S, Edwards MS, Bai C, et al. p57kip2, a structurally distinct member of the p21cip1 Cdk inhibitor
