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1、1MMP2、MMP9 在胃癌组织中的表达及 相关性分析【摘要】 目的 研究基质金属蛋白酶(MMP) 2、 9 在胃癌组织中的表达及相关性。方法 采用免疫组化法观察 60 例胃癌及 20 例胃正常黏膜石蜡标本中MMP 2、 9 蛋白的表达情况。结果 MMP 2 在胃癌组织中的表达率为75%,MMP 9 在胃癌组织中的表达率为 68.3%,均显著高于周围正常组织(P0.05)。MMP 2 和 9 的表达与胃癌的浸润深度、淋巴结转移及肿瘤临床分期相关(P0.05)。且 MMP 2 的表达与 MMP 9 的表达呈正相关(P0.05)。结论 MMP 2 和 9 在胃癌组织中显著高表达,与胃癌的浸润转移相
2、关,其异常表达可能共同参与胃癌的发生、发展过程,检测 MMP 2、 9 可作为反映胃癌病理学特点的参考指标。 【关键词】 胃癌;免疫组化;基质金属蛋白酶基质金属蛋白酶(MMPs)与多种肿瘤的侵袭和转移有关。MMP 2 和 MMP 9 是MMPs 家族的重要成员,主要降解明胶及型胶原。近来在多种肿瘤中发现有MMP 2 和 MMP 9 异常高表达,有研究证实它们与多种肿瘤的侵袭和转移有关13。目前有关 MMP 2 和 MMP 9 在胃癌中的研究已有少量国内外文献报道4,5,但多仅对其中一项指标进行研究。本文对 MMP 2 和 MMP 9 在胃癌组织中的表达进行研究,并分析 MMP 2、 9 在胃癌
3、组织中表达的相关性及其意义。1 材料与方法1.1 研究对象 收集 2007 年 1 月至 2008 年 1 月我院病理科石蜡包埋胃组织标2本 80 例,其中胃癌 60 例,癌旁正常胃黏膜 20 例;20 例正常对照均取自距胃癌切缘 5 cm 以外正常胃黏膜组织。60 例胃癌患者中,男 48 例,女 12 例;年龄 36 75平均(58.616.7)岁。病理类型:高分化及中分化腺癌 36 例,低分化腺癌、印戒及黏液细胞癌 24 例。无淋巴转移者 17 例,有淋巴转移者 43 例。TNM 分期:期及期共 19 例,期及期共 41 例。所有患者在术前均未接受放疗和化疗处理;临床病理资料完整;每例标本
4、都选择包括肿瘤中心和肿瘤边缘的石蜡块 12个,制成连续切片,片厚 34 m。1.2 实验试剂 MMP 2 兔抗人多克隆抗体、MMP 9 兔抗人多克隆抗体均为即用型,购自北京中杉金桥生物技术有限公司。1.3 免疫组化染色及结果判定 每个病例的切片均分为三部分,分别检测MMP 2、 9 蛋白的表达。免疫组化采用 EnVision 二步法。MMP 2、 9 阳性染色位于细胞浆和/或细胞膜呈棕黄色,显色强时为棕褐色。光镜下用高倍镜视野对每例组织切片癌组织区域连续计数 500 个细胞,计算癌细胞所占的阳性比例。其中无细胞染色为阴性(-),阳性细胞所占比例10%为+,阳性细胞数占 10%50%为,阳性细胞
5、数50%为 。为便于统计描述,对样本进行分类,0+为弱染,定为阴性表达, 为强染,定为阳性表达。1.4 统计学分析 采用 SPSS11.0 数据分析软件,应用 2 检验、Spearman 相关分析进行统计学处理。2 结 果2.1 胃癌组织中 MMP 2、 9 的表达 MMP 2 在正常胃黏膜中大多为阴性表3达,少部分为阳性。MMP 2 其在胃癌组织中的表达呈细胞浆分布,阳性信号为棕黄色颗粒。本组病例在正常胃黏膜中 MMP 2 阳性表达 5 例,阳性率为 25%(5/20);在胃癌组织中阳性表达 45 例,阳性率为 75%(45/60),显著高于正常胃黏膜的表达(P0.05),见图 1,表 1。
6、MMP 9 在正常胃黏膜中大多为阴性表达,少部分为阳性。其在胃癌组织中的表达呈细胞浆分布,阳性信号为棕黄色颗粒。本组病例在正常胃黏膜中 MMP 9阳性表达 4 例,阳性率为 20%(4/20);在胃癌组织中阳性表达 41 例,阳性率为68.3%(41/60),显著高于正常胃黏膜的表达(P0.05),见图 1,表 1。表 1 正常胃黏膜及胃癌组织中 MMP 2、 9 的表达2.2 胃癌组织中 MMP 2、 9 的表达与临床病理特征的关系 胃癌组织中MMP 2、 9 的表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移及 TNM 分期均显著相关(均P0.05)。但与患者的年龄、性别及胃癌分化程度无显著相关(均 P0.
7、05)。MMP 2、 9 在 T1+T2、T3+T4 阳性表达率分别为 16.7%(1/6)和 81.5%(44/54),16.7%(1/6)和 74.1%(40/54),浸润越深,表达越强;在+期、+期阳性表达率分别为 52.6%(10/19)和 85.4%(35/41),47.4%(9/19)和 78.0%(32/41),分期越晚,表达越强;在无淋巴结转移及有淋巴结转移的阳性表达率分别为 52.9%(9/17)和83.7%(36/43),35.3%(6/17)和 81.4%(35/43),淋巴结转移越多,表达越强。见表 2。 2.3 胃癌组织中 MMP 2, 9 表达的相关性 胃癌组织中
8、35 例 MMP 2 与MMP 9 共阳性表达,9 例 MMP 2 与 MMP 9 共阴性表图 1 正常胃黏膜及胃癌组织中 MMP 2、 9 的表达(400)表 2 MMP 2、MMP 9 与胃癌临床病理特征的关系 达,仅 MMP 2 阳性 10 例,仅 MMP 9 阳性 6 例,经相关性分析表明4MMP 2 与 MMP 9 表达呈正相关(r=0.352,P0.05)。3 讨 论肿瘤从开始形成到浸润和转移,经历三个重要阶段:细胞粘连、局部蛋白酶解及细胞动力增加和迁移。有许多证据表明在癌细胞侵袭转移过程中,涉及许多特殊基因及其表达产物。MMPs 是一类高度保守的依赖于锌离子的内切蛋白水解酶家族,
9、可降解基底膜和细胞外基质的大多数蛋白质,有关 MMP 2 和 MMP 9 在人类肿瘤中表达与肿瘤侵袭转移的关系,国内外许多作者做了大量的研究。陈洪雷等6研究发现,随着肺癌原发肿瘤的增长、淋巴结浸润和远处转移的出现,MMP 2、 9 的表达阳性率逐步增高。同时肺癌的临床分期与上述指标的表达呈正相关,说明它们的表达与肺癌的进展程度相关。MMP 2 和 MMP 9 能降解细胞外基质和基底膜,促进肿瘤间质血管的新生,与肿瘤的浸润及转移有关。Davies等7发现 MMP 2 和 MMP 9 的水平随膀胱的分级增高而升高,侵袭性肿瘤明显高于表浅性肿瘤。有学者研究发现食管癌组织中 MMP 2 和 MMP 9
10、 表达率明显高于正常组织,而且 MMP 2 和 MMP 9 在淋巴结转移组阳性表达率明显高于无淋巴结转移组8,9。吕增发等10在研究中发现肝癌中 MMP 2、 9 的表达比周围组织高,而且其活性增高与肝癌细胞对门静脉和包膜浸润以及发生肝内转移、肿瘤复发密切相关。有作者发现胃癌中 MMP 2、MMP 9 表达增强。Monig 等4观察 114 例胃癌患者,其中 93 例癌组织 MMP 2 表达阳性,并且 MMP 2 表达与胃癌进展及其淋巴结转移正相关。而且随着浸润程度由黏膜层到浆膜外的加深,MMP 2 的阳性表达逐渐增加。王璐等5研究发现随着胃癌组织浸润深度的增加,胃癌细胞内 MMP 9 的含量
11、逐渐增高,淋巴转移阳性组 MMP 9 表达率高于阴性组。5本研究发现正常胃黏膜中 MMP 2 和 MMP 9 的阳性表达率明显低于胃癌组织,且胃癌中浸润越深、有淋巴结转移及 TNM 分期晚者 MMP 2 和 MMP 9 的阳性表达越高,提示 MMP 2,MMP 9 也参与了胃癌的侵袭转移过程。并且,MMP 2 的表达和 MMP 9 的表达呈正相关,这提示 MMP 2 和 MMP 9 在胃癌浸润和转移过程中可能有协同作用,共同参与了胃癌的恶性演进,检测MMP 2、 9 可作为反映胃癌病理学特点的参考指标。【参考文献】1 Westermarck J,Kahari VM.Regulation of
12、matrix metalloproteinase expression in tumor invasionJ.FASEB J,1999;13(8):781 92.2 Itoh Y,Nagase H.Matrix metalloproteinases in cancerJ.Essays Biochem,2002;38(1):212 36.3 Curran S,Murray GI.Matrix metalloproteinases:molecular aspects of their roles in tumor invasion and metastasisJ.Eur J Cancer,2000
13、;36(13):1621 30.4 Monig SP,Baldus SE,Hennecken JK,et al.Expression of MMP 2 is associated with progression and lymph node metastasis of gastric carcinomaJ.Histopathology,2001;39(6):597 602.5 王 璐,李玉林,张丽红,等.MMP 9 在胃癌组织中的表达及对血管新生和肿瘤进展的影响J.临床与实验病理学杂志,2002;18(2):163 6.6 陈洪雷,刁路明,刘铭球,等.MMP 2、TIMP 2、bFGF 在大
14、鼠肺鳞癌癌变过程中的动态表达J.肿瘤,2002;22(3):375 9.7 Davies B,Waxman J,Wasan H,et al.Levels of matrix metalloproteases in bladder cancer correlate with tumor grade and invasionJ.Cancer Res,1993;53(22):5365 9.8 陈美芳,季 峰,厉有名.食管癌基质金属蛋白酶及其组织抑制剂表达的研究J.中华消化杂志,2002;22(3):181 2.69 温洪涛,张 蕾,高冬玲,等.基质金属蛋白酶 9 mRNA 在食管癌中的表达J.中华消化杂志,2002;22(1):52 5.10 吕增发,周 洪,刘玉明,等.原发性肝癌中基质金属蛋白酶表达的临床意义J.陕西医学杂志,2005;34(6):667 8.