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1、1ccnd1 在卵巢子宫内膜异位囊肿的表达 及其临床意义【摘要】目的：探讨 ccnd1 与卵巢子宫内膜异位囊肿发生与发展的关系。方法：用免疫组化法检测 40 例卵巢子宫内膜异位囊肿患者，其中 I 期 5 例，II 期 9 例，III 期 10 例，期 16 例（分期标准依据 1985 年美国生育协会的修正分期法(AFS-r)【1】，I 期、II 期为早期病例，III 期、期为晚期病例），对照成员为 30 例卵巢组织正常者。结果：30 例正常卵巢组织中阳性表达率 20；40 例卵巢巧克力囊肿组织中阳性表达率 7250。由此可以看出 ccnd1 在卵巢子宫内膜异位症中的阳性表达率较在正常卵巢组织中
2、明显增高，两组病例比较，差异有统计学意义(p005)。40 例卵巢巧克力囊肿组织中，ccnd1 在早期病例中的阳性表达率为 6429，而在晚期病例中其阳性表达率为 7692，经统计学分析差异无显著性（pO05)。结论：ccnd1 是种重要的细胞周期调节蛋白，在正常卵巢组织中为低表达，而在卵巢子宫内膜异位症患者的异位囊肿组织中表达明显增高，表明 ccnd1 与卵巢子宫内膜异位症的发生可能存在一定的关系。ccnd1 的表达与卵巢子宫内膜异位囊肿临床期别无明显相关性。 【关键词】子宫内膜异位症；细胞周期蛋白；细胞周期；免疫组织化学 1 材料与方法 1.1 材料来源本研究所用标本均来源于青岛市市立医院
3、妇科 2010 年 3 月至 2011年 3 月住院行腹腔镜手术或开腹手术治疗的患者共 70 例，年龄 3952 岁，平均(45387)岁。其中卵巢巧克力囊肿 40 例，正常对照组 30 例，两组患者年龄经统计学处理无显著性差异。40 例卵巢巧克力囊肿经腹腔镜手术 31 例，开腹手术9 例；其中 I 期 5 例，II 期 9 例，III 期 10 例，期 16 例(均伴大小不等的卵巢巧克2力囊肿)，分期标准依据 1985 年美国生育协会的修正分期法(AFs-r)；正常对照组病例来自因其他妇科疾病来院治疗的患者，取正常卵巢组织作对照。全部病例均经组织病理学证实，术前 3 个月未行过激素治疗。卵巢
4、巧克力囊肿病例均做 HE 染色，挑选有典型内膜及间质的组织标本。 1.2 免疫组化染色免疫组化染色采用 s-p 法，cyclinD1 鼠抗人单克隆抗体（工作液）及 s-p 试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司，设立阳性及阴性对照组。 1.3 染色结果染色结果判定阳性染色为棕色颗粒，按 maeda、杨红的方法判定结果。1.4 统计学处理统计学分析采用卡方检验。 2 结果 2.1cnd1 在正常卵巢组织、卵巢子宫内膜异位囊肿中的表达 ccnd1 的表达在卵巢子宫内膜异位囊肿中高于正常卵巢组织，差异有显著性（p0.05），见表 1。 表 1ccnd1 在正常卵巢组织、卵巢子宫内膜异位囊肿中的表达 组别
5、 Ccnd1 表达合计阳性率% 阴性阳性 正常卵巢组织 2463020.0 子宫内膜异位囊肿 1129*4072.5 合计 35357050 218.9；220.05（1）3.841，p0.05，差别有统计学意义。 2.2ccnd1 在卵巢子宫内膜异位囊肿不同期别的表达 40 例卵巢巧克力囊肿组织中，ccnd1 在早期病例中的阳性表达率为 6429，在晚期病例中其阳性表达率为7692，经统计学分析差异无显著性（pO05)，见表 2。 表 2ccnd1 在卵巢子宫内膜异位囊肿不同期别的表达 3组别 Ccnd1 表达合计（n）阳性率% 阴性阳性 -期 591464.29 -期 6202676.92
6、 合计 11294072.5 20.728；220.05（1）3.841，p0.05，差别无统计学意义。 3 讨论 3.1 细胞周期蛋白与细胞周期调控的机制人体的生命活动即是细胞的生命活动，细胞增殖是生命现象的基本特征之一，而细胞增殖是通过细胞周期(CellCycle)实现的。细胞周期是指细胞从前一次有丝分裂活动完成到下一次有丝分裂活动完成所经历的连续动态过程。细胞生长从 Gl 期(DNA 合成前期)-S 期(DNA 合成期)一G2 期(有丝分裂前期)一 M 期(有丝分裂期)有着严格的周期顺序及时间。在此细胞周期中，存在着控制细胞由 G1 期到 S 期、G2 期到 M 期转换的检查点。由于 G
7、1期为控制细胞周期长短的限速期【2】，所以处于 Gl 晚期控制细胞进入 S 期的检查点(在人类称为限制点)尤为重要，细胞一旦通过了此限制点，将会自主完成增殖周期而不再依赖外源性增殖分裂信号的刺激【3】。G1S 调控点是细胞周期中最重要的调控点，CyclinD1 是 G1 期中最重要的细胞周期素，其对细胞周期 G1 期的调控是通过对抑癌基因蛋白 pRb(视网膜母细胞瘤)的调控实现的。正常情况下CyclinD1 在 G1 期恒定表达或保持较低水平，但当 CyclinD1 结构异常或受到增殖信号时，上调其表达，使 Gl 期缩短，细胞增殖失控，最终导致细胞转化。CyclinDI基因改变和过度表达已在多
8、种肿瘤检测到并发现和其发生、发展、转移、预后有密切关系。由各种机制导致 ccnd1 过度表达或紊乱表达，都会使细胞无限制生长，并使带有 DNA 损伤的错误遗传信息在细胞无限制生长时被不断扩大，这种错误积4累到一定值以后，将造成细胞基因型改变而发生恶性转化，最终可能导致肿瘤生成。 3.2CyclinD1 的表达及临床意义 1991 年，Motkura 等在研究人甲状旁腺腺瘤时发现了 CyclinD1 基因，故称甲状旁腺腺瘤基因(PRADl)，亦称 CCNDI。目前认为ccnd1 作为原瘤基因须与其他癌基因协同作用，因此多数学者认为 ccnd1 在恶性肿瘤中的过量表达为首发事件。研究证实，ccnd
9、1 的过度表达与多种肿瘤的发生、发展及预后密切相关4。Ccnd1 基因改变和过度表达在乳腺癌、头颈部鳞状细胞癌、皮肤癌、结肠癌、食道癌及淋巴造血系统肿瘤等均可检测到。 Worsley5发现卵巢上皮细胞及卵巢良性囊肿中无 ccnd1 过度表达，而 43 例卵巢癌中过度表达率为 26。有学者6研究在 mRNA 及蛋白水平检测 ccnd1，结果表明具有低度恶性潜能的肿瘤及癌中均有表达，肿瘤中明显高于正常卵巢；在蛋白水平上56卵巢肿瘤中表达阳性，因此其过表达可能是卵巢肿瘤发生中的早期事件。国内王晓玫等通过诱导小鼠肺癌的不同病理变化，得出的结论是 ccnd1 过表达在肺癌发生的早期阶段7。Bae8等使用
10、印迹杂交方法研究表明 ccnd1 在宫颈癌组的表达高于不典型增生组，差异有显著性。Dhar9等用免疫组化法对卵巢上皮性肿瘤的研究发现 ccnd1 阳性率为 89，进一步用 RFLP 技术和 PCR 分析均证实有ccnd1 过表达，多因素分析发现 ccnd1 基因扩增在晚期卵巢癌中很常见，具有预后意义。 本研究通过免疫组织化学的方法分析发现，ccnd1 在正常卵巢及卵巢巧克力囊肿患者囊壁的组织中的阳性表达均定位于细胞核上，故以细胞核染色定为阳性表达，ccnd1 在卵巢巧克力囊肿患者的囊壁组织中的阳性表达率明显高于正常卵巢组织，两组病例比较差异有统计学意义(P005)，说明内异症患者的卵巢囊壁组织
11、中存在 ccnd1 的高表达,由此推断在病因学方面存在细胞周期调控紊乱的可能性，过5度表达的 ccnd1 可能在整个细胞周期中持续性激活 CDK4 磷酸化的底物，促进SG2 期转换，超越了细胞周期的控制机制而发生细胞异常增殖由此可能参与子宫内膜在“异地”发生的增殖、种植、侵袭和破坏。本研究试验还发现，在 40 例卵巢巧克力囊肿组织中，III 期(早期)患者 Ccnd1 阳性表达率为 6429，而III期(晚期)患者的阳性表达率为 7692，晚期患者阳性表达率较早期患者增高，但经统计学处理，差异无显著性(P005)，不排除与观察样本例数较少有关。子宫内膜异位症虽然具有和恶性疾病相似的表现，但内异
12、症病灶中没有癌细胞，即内异症的恶性表现仅限于生物学行为上，其毕竟为一种良性疾病，其发病也与恶性肿瘤存在一定差异，ccnd1 在卵巢子宫内膜异位症中的表达增高，表明其与内异症的发病存在一定关系，但目前尚无证据表明其在促进异位内膜细胞的增殖、浸润、转移方面是否具有主导作用，有待于以后进一步研究，另外细胞周期中其他正、负调控因子是否同时存在异常，从而联合导致内异症的恶性行为，也需要在今后的工作中验证。 参考文献 1连利娟.林巧稚妇科肿瘤学北京：人民卫生出版社，2001，720726 2HichmanKA，RobertsJM.RulestoReplicatbyJCell,1994,79:557562.
13、 3HunterT,pinesJ.CyclinsandCancerI:CyclinDandCDKinhibitorscomeofageJ.Cell,19 94.79;573582. 4 UmekitaY，OhiY，SagaraY，eta1OverexpressionofCyclinDIpredictsforpoorprognosi sinestrogenreceptornegativebreastcancerpatientsIntJCancer，2002，98(3)：415- 418 5 WorsleySD，PonderBAJ，DaviesBROverexpressionofCyclinDIi
14、nepithelialovarianca ncersJGynecologicOncology，1997，64：189-195 6 ShigemasaK，TanimotoH，ParhamGP，eta1CyclinD1oVerexpressionandp53mutatuin statusinepithelialovariancancerJJSocGynecol Investig，1999，6(2)：102108 7王晓玫，单军，陈灼怀肺肿瘤演进中 CyclinD1，p53 基因表达的实验研究6J中国肺癌杂志，2002，5(2)：107 8 BaeDS，ChoSBAberrantexpressionofCyclinDIisassociatedwithpoorprognosisinearlys tagecervicalcanceroftheuterus力GynecolOncol，2001，81(3)：341 9 DharKKBraniganK，ParkesJ，eta1ExpressionandsubcellularlocalizatuonofCyclinDI proteininepithelialovariantumourcellsJBrJCancer，1999，81(7)：174-1181
